Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính gây độc tế bào của hai loài macaranga indica và macaranga denticulata họ thầu dầu (euphorbiaceae) ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÊ TRẦN NGUYÊN VŨ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA HAI LOÀI MACARANGA INDICA VÀ MACARANGA DENTICULATA HỌ THẦU DẦU (EUPHORBIACEAE) Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC HÀ NỘI – 2022 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS.TSKH Phạm Văn Cường Người hướng dẫn khoa học 2: TS Trần Đăng Thạch Phản biện 1: PGS.TS Lê Nguyễn Thành Phản biện 2: GS.TS Trần Đình Thắng Phản biện 3: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi , ngày tháng năm 2022 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Ung thư bệnh nan y mà lồi người biết đến từ sớm có tỷ lệ tử vong cao Theo đánh giá Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), bệnh ung thư tăng gấp đôi 30 năm qua, nguyên nhân gây tử vong hàng đầu giới Theo số liệu thống kê Hiệp hội Phịng chống Ung thư (UICC) vừa cơng bố vào ngày 04/02/2021 ngày “Ung thư Thế giới” sau: giới, có số ca tử vong tăng từ 9,6 triệu ca theo thống kê năm 2018 tăng lên 9,96 triệu ca theo thống kê năm 2020 Số ca tử vong ung thư dự đoán tiếp tục tăng lên 13 triệu ca vào năm 2030 Từ số liệu thống kê vừa nêu cho thấy “giặc ung thư” ngày nguy hiểm trước nhân loại Theo quy luật “sự cân sinh thái” y học Phương đơng, loại bệnh xuất thiên nhiên có loại cỏ có khả chữa loại bệnh Việt Nam nước nhiệt đới gió mùa ẩm với thảm thực vật đa dạng phong phú: 12.000 loài thực vật bậc cao, với hàng nghìn lồi rêu, quyết, dương xỉ, nấm, tảo, địa y,[1],[2] chứa đựng nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học cao tìm ẩn, có lồi nghiên cứu hố thực vật hoạt tính sinh học Hiện nay, quan tâm Đảng nhà nước, tổ chức, tập đoàn dược liệu lớn giới, phát triển vượt bậc ngành sinh học phân tử với phịng thí nghiệm trang bị nhiều thiết bị đại, phục vụ cho việc nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học từ cỏ dược liệu thiên nhiên,.v.v Chi Macaranga thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) có 300 lồi, Việt Nam có khoảng 13 lồi [3], chủ yếu phân bố vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới, đặc biệt Châu Á, tập trung nhiều Đông Nam Á Kết nghiên cứu sơ từ dịch chiết ethyl acetate loài Macaranga indica ức chế 26,3% dòng tế bào ung thư KB nồng độ µg/ml dịch chiết ethyl acetate từ lồi Macaranga denticulata ức chế 24% dịng tế bào ung thư KB nồng độ 1µg/ml Trong khn khổ đề tài độc lập cấp Nhà nước, mã số đề tài ĐTĐLCN.14/16 Chương trình hợp tác quốc tế Pháp - Việt “Phịng thí nghiệm hợp tác Pháp - Việt Hóa học hợp chất tự nhiên (NAPTROCHEMLAB)” Do vậy, chúng tơi chọn hai lồi mã rạng ấn (M indica) (Hance) Wight loài mã rạng (M denticulata) (Blume) Muell.-Arg Việt Nam làm đối tượng nghiên cứu luận án Luận án đặt tên là: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc tế bào hai loài Macaranga indica Macaranga denticulata họ thầu dầu (Euphorbiaceae) Việt Nam” Mục tiêu nghiên cứu: Phát hợp chất có hoạt tính chống ung thư từ số lồi thuộc chi Macaranga Việt Nam, cụ thể là: - Nghiên cứu phân lập xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ dịch chiết hai loài Macaranga là: loài mã rạng ấn (M indica) loài mã rạng (M denticulata) Việt Nam - Khảo sát hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ dịch chiết hai loài Macaranga vừa nêu làm sở khoa học định hướng cho việc nghiên cứu ứng dụng hợp chất Nhiệm vụ nghiên cứu: - Tổng quan tài liệu nghiên cứu trước chi Macaranga - Phân lập hợp chất từ hai loài mã rạng ấn (M indica) loài mã rạng (M denticulata) phương pháp sắc ký; - Xác định cấu trúc hoá học hợp chất phân lập phương pháp vật lý hóa học; - Thử hoạt tính chống ung thư in vitro hợp chất phân lập được, dòng tế bào ung thư như: KB, MCF-7, Hep-G2, Lu-1, Luận án có 142 trang bao gồm: Phần Đặt vấn đề (3 trang), Chương 1: Tổng quan (28 trang); Chương 2: Thực nghiệm phương pháp (20 trang); Chương 3: Kết thảo luận (75 trang); Tài liệu tham khảo (9 trang); Kết luận, tính mới, kiến nghị danh mục cơng trình liên quan phần trang; Có 28 biểu bảng 96 hình Phần Phụ lục có 119 trang CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược thực vật họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) 1.2 Sơ lược thực vật chi Macaranga 1.2.1 Sơ lược loài M indica 1.2.2 Sơ lược lồi M denticulata 1.3 Các nghiên cứu hóa sinh học chi Macaranga 1.3.1 Nhóm chất Flavonoid 1.3.2 Nhóm chất Terpenoid 1.3.3 Nhóm chất Stilbene 1.4 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học loài M indica loài M denticulata giới Việt Nam 1.4.1 Tình hình nghiên cứu lồi M indica giới Việt Nam 1.4.2 Tình hình nghiên cứu lồi M denticulata giới Việt Nam CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Đối tượng vật liệu thiết bị nghiên cứu 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc 2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính 2.3 Phân lập hợp chất từ hai loài M indica M denticulata 2.3.1 Phân lập hợp chất từ loài Mã rạng ấn (M indica) Hình 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất phân đoạn (MI1) từ loài M indica Hình 2.4 Sơ đồ phân lập hợp chất phân đoạn (MI2-3) từ loài M indica 2.3.2 Phân lập hợp chất từ thân loài Mã rạng ấn (M indica) Hình 2.5 Sơ đồ phân lập hợp chất từ thân loài Mã rạng ấn (M indica) 2.3.3 Phân lập hợp chất từ loài Mã rạng (M denticulata) Hình 2.6 Sơ đồ phân lập hợp chất từ loài Mã rạng (M denticulata) 2.4 Hằng số vật lý liệu phổ hợp chất phân lập 2.5 Hoạt tính chống ung thư hợp chất phân lập Có 24 tổng số 37 hợp chất tiến hành thử nghiệm có hoạt tính gây độc tế bào từ mạnh đến trung bình dòng tế bào ung thư người như: (KB, Hep-G2, MCF-7, Lu-1 Hep3B, A-549 Hela) với giá trị IC50 nhận khoảng từ 0,6±0,1 đến 62,8±2,2 μM Các hợp chất có kí hiệu (MIL2), (MIL5-7) (MDF1) có hoạt tính từ mạnh đến trung bình tất bảy dịng tế bào thử nghiệm Các hợp chất có hoạt tính mạnh tất dòng tế bào thử nghiệm, chí mạnh chất đối chứng dương Mitoxantrone (MX) hợp chất có kí hiệu (MIL11-12) (MDF6-7) CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập Tổng số 40 hợp chất phân lập xác định cấu trúc từ hai loài Mã rạng ấn (M indica) Mã rạng (M denticulata), có: - Cấu trúc hóa học 22 hợp chất phân lập từ loài Mã rạng ấn (M indica), trình bày theo hình 3.1 bên dưới: Hình 3.1a: Bảy hợp chất phân lập từ loài Mã rạng ấn (M indica) Hình 3.1b Các hợp chất phân lập từ loài Mã rạng ấn (M indica) - Cấu trúc 10 hợp chất phân lập từ thân loài Mã rạng ấn (M indica), hợp chất có kí hiệu MIT4 có lập thể hình 3.2 bên (9 hợp chất đồng thời phân lập từ tối giản phần tóm tắt này, xem hình 3.1 trang phía trên) Hình 3.2 Các hợp chất phân lập từ thân lồi M indica - Cấu trúc hợp chất phân lập từ lồi (M denticulata) Hình 3.3 Các hợp chất phân lập từ loài M denticulata 3.1.1 Cấu trúc hợp chất phân lập từ loài M indica 3.1.1.1 Hợp chất MIL1 (Macarindicin I): 6-prenyl-3′,4′-(2-methoxy - dihydro - furano)kaempferol (hợp chất mới) Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất MIL1 Hợp chất MIL1 phân lập dạng bột vơ định hình màu vàng nhạt Công thức phân tử MIL1 xác định C 23H22O7 dựa vào kết phổ khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS với xuất pic ion m/z 411,1438 [M+H]+ (tính tốn lý thuyết cho công thức C 23H23O7+: 411,1444) Trên phổ 1HNMR MIL1 cho thấy có mặt proton aromatic, gồm hệ ABX vòng B δH 8,00 (1H, br d, J = 8,5 Hz), 7,01 (1H, d, J = 8,5 Hz) 8,05 (1H, d, J = 2,0 Hz); proton aromatic vòng A δH 6,50 (1H, s) gợi ý đến có mặt mảnh flavonol; tín hiệu 01 proton olefinic δH 5,19 (1H, t, J = 7,0 Hz) 02 nhóm methyl δH 1,63 (3H, s) 1,73 (3H, s) gợi ý đến xuất nhóm prenyl; nhóm methoxy δH 3,45 (3H, s) Trên phổ 13C-NMR HSQC MIL1 tín hiệu 23 nguyên tử carbon, bao gồm 01 carbonyl carbon (δC 175,9), 11 carbon không liên kết trực tiếp với hidro (δC 102,8, 110,3, 123,8, 126,3, 130,6, 135,9, 146,3, 154,1, 157,4, 159,0, 161,8), methine (δC 92,8, 108,0, 109,4, 122,3, 124,4 128,3), 02 proton methylene (δC 21,0 35,5), 03 proton methyl (δC 17,7, 25,5 55,4) Dữ liệu phổ 1H 13C NMR MIL1 giống với glyasperin A ngoại trừ vòng B flavonol bị biến đổi thành vòng benzofuran Khả xảy oxi hóa C-7ʺ nhóm prenyl C-3ʹ tạo thành vịng furan Vị trí vịng furan C-3ʹ C-4ʹ chứng minh tương tác phổ HMBC: proton H-5′ (δH 7,01) tương tác với C-1′ (δC 123,8)/C-3′ (δC 126,3); proton H-6ʺ (δH 8,00) tương tác với C-2′ (δC 124,4)/C-4′ (δC 159,0)/C-2 (δC 146,3); proton H-6ʺ (δH 3,03 3,46) tương tác với C-2′ (δC 124,4)/C-3′ (δC 126,3)/C-4′ (δC 159,0); proton H-7ʺ (δH 5,82) tương tác với C-3′ (δC 126,3)/C-4′ (δC 159,0) Từ phân tích trên, kết hợp với tài liệu tham khảo hợp chất glyasperin [110] cấu trúc hợp chất MIL1 xác định 6-prenyl3′,4′-(2-methoxydihydro -furano)kaempferol Đây hợp chất đặt tên macarindicin I Giá trị độ quay cực riêng MIL1 ([α]D25 = +0,01 (c 0,1, MeOH), xấp xỉ 0) với ghi nhận hiệu ứng Cotton gần phổ ECD gợi ý MIL1 hợp chất racemic 10 vòng A δH 6,46 (1H, s), đặc trưng cho mảnh flavonol; proton olefinic δH 5,26 (1H, t, J = 6,5 Hz), hai nhóm oxymethine δH 4,35 (d, J = 4,0 Hz) 5,41 (d, J = 4,0 Hz); nhóm methyl δH 1,39 (6H, s) gợi ý đến có mặt hai nhóm prenyl, ngồi có xuất nhóm methyl khác 13 δH 1,69 (3H, s), 1,81 (3H, s) Phổ C-NMR HSQC MIL2 xuất tín hiệu 25 ngun tử carbon, gồm nhóm carbonyl, 11 carbon không liên kết trực tiếp với proton, nhóm methine, nhóm methylene, nhóm methyl Phân tích phổ 1D 2D-NMR cho thấy MIL2 hợp chất diprenyl flavonol Nhóm prenyl thứ xác định vị trí giống hợp chất MIL1, điều khẳng định tương tác phổ HMBC proton H-1′′ (δH 3,34) C-5 (δC 159,1)/C-6 (δC 112,3)/C-7 (δC 163,5) Các tương tác HMBC H-6′′ (δH 5,41) C-2′ (δC 126,5)/C-3ʹ (δC 131,3)/C-4′ (δC 163,0)/C-7′′ (δC 98,8) gợi ý đến vị trí nhóm prenyl thứ C-3ʹ Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR hợp chất MIL2 C 10 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 6′ 1″ 2″ 3″ 4″ 5″ 6″ 7″ 8″ 9″ 10″ δCa,b) 147,4 137,3 177,4 159,1 112,3 163,5 93,7 156,2 104,4 125,5 126,5 131,3 163,0 110,9 131,4 22,2 123,5 132,0 25,9 17,9 73,6 98,8 71,9 25,4 25,4 a,c) δH (mult., J, Hz) 6.46 (s) 8.28 (br s) 6,98 (d, 9,0) 8,16 (br d, 9,0) 3,44 (d, 6,5) 5,26 (t, 6,5) 1,69 (s) 1,81 (s) 5,41 (br d, 4,0) 4,35 (br d, 4,0) 1,31 (s) 1,31 (s) a) đo DMSO-d6, * tín hiệu bị chập, b125MHz, c500MHz 11 Nhóm prenyl thứ hai tạo thành vòng năm tiếp giáp với vòng B khung flavonol qua cầu oxy C-4ʹ C-7ʺ Từ hình thành nên vịng dihydrofuran tiếp giáp với vòng B khung flavonol Điều khẳng định tương tác HMBC proton H-7ʺ (δH 4,35) với C-3ʹ (δC 131,3)/C-4ʹ (δC 163,0) Hai nhóm hydroxy xác định vị trí C-6ʺ C-8ʺ nhờ tương tác HMBC H-2ʹ (δH 8,05) với C-6ʺ (δC 73,6); proton H-9ʺ/10ʺ (δH 1,31) với C-7ʺ (δC 98,8)/C-8ʺ (δC 71,9) Hằng số tương tác nhỏ H-6ʺ H-7ʺ (J = 4,0 Hz) tương tác NOESY H-6ʺ (δH 5,41) H-9ʺ/10ʺ (δH 1,31) gợi ý đến cấu hình trans dihydrofuran Như vậy, cấu trúc MIL2 xác định 6-prenyl-3ʹ,4ʹ(2-hydroxy-isopropyl-3-hydroxydihydrofurano)kaempferol hợp chất đặt tên macarindicin II, hợp chất racemic không thấy có hiệu ứng Cotton độ quay cực riêng gần ([α] D25 = +0,01 (c 0.1, MeOH) 3.1.1.3 Hợp chất MIL3 (Macarindicin III): 6-prenyl-3′,4′-(2,2-dimethyl3,4-dihydroxydihydropyrano)kaempferol (hợp chất mới) Hình 3.16 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất MIL3 Hợp chất MIL3 phân lập dạng bột vơ định hình màu vàng Cơng thức phân tử MIL3 xác định C25H26O8 dựa vào kết phổ khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS với xuất pic ion m/z 455,1698 + + [M+H] (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C 25H27O8 : 455,1706) Phổ phân giải cao HR-ESI-MS MIL3 cho thấy pic ion phân tử [M+H] + m/z 455,1698 cho phép xác định công thức phân tử MIL3 C25H26O8 Phân tích liệu phổ 1H- 13C-NMR gợi ý đến MIL3 hợp chất diprenyl flavonol Cấu trúc MIL3 tương tự MIL2 ngoại trừ khác mảnh vòng B khung flavonol Đó cấu trúc hợp chất MIL3 có xuất vòng dihydropyran thay cho vòng dihyrofuran MIL2 vòng B khung flavonol Các tương tác HMBC H-6ʺ (δH 4,41) C-2ʹ (δC 128,3)/C-3ʹ (δC 125,7)/C-4ʹ (δC 153,6)/C-8ʺ (δC 79,0) chứng tỏ vị trí hai nhóm hydroxy C-6ʺ C-7ʺ Cùng với chuyển dịch trường thấp C-4ʹ (δC 153,6) trường cao C-8ʺ (δC 79,4) vịng dihydropyran thiết lập C-6ʺ/C-7ʺ/C-8ʺ trans hai nhóm hydroxy dihydropyran xác định dựa vào số tương tác lớn H-6ʺ H-7ʺ (J = 7,5 Hz) Hợp chất MIL3 xác định racemic độ quay cực riêng nhỏ ([α] D25 = +0,01 (c 0,1, MeOH), xấp xỉ 0) khơng thấy có hiệu ứng Cotton phổ CD Từ phân tích liệu phổ trên, cấu trúc MIL3 xác định 6-prenyl-3ʹ,4ʹ-(2,2-dimethyl-3,4- 12 dihydroxydihydropyrano)kaempferol hợp chất đặt tên macarindicin III Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất MIL3 C 10 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 6′ 1″ 2″ 3″ 4″ 5″ 6″ 7″ 8″ 9″ 10″ δHa,c) (mult., J, Hz) 6.49 (s) 8.26 (br d) 6,87 (d, 9,0) 7,96 (dd, 2.0, 9,0) 3,24 (d, 7,0) 5,19 (t, 7,0) 1,63 (s) 1,73 (s) 4,41 (br d, 17,0) 3,42 (br d, 7,5) δCa,b) 146,2 135,9 175,9 157,4 110,2 161,8 92,7 154,0 102,8 122,9 128,3 131,3 153,6 116,2 128,2 21,0 122,2 130,6 25,4 17,7 67,6 74,4 79,4 26,6 19,6 1,40 (s) 1,17 (s) b c a) đo DMSO-d6, 125MHz, 500MHz 3.1.1.4 Hợp chất MIL4 (Macarindicin IV): 3′-prenyl-6,7-(2hydroxy-isopropyl-dihydrofurano)kaempferol (hợp chất mới) Hình 3.21 Cấu trúc hóa học hợp chất MIL4 Hợp chất MIL4 phân lập dạng bột vơ định hình màu vàng Cơng thức phân tử MIL4 xác định C25H26O7 dựa vào kết phổ khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS với xuất pic ion m/z + + 439,1750 [M+H] (tính tốn lý thuyết cho C25H27O7 : 439,1757) Dữ liệu 13 phổ 1H- 13C-NMR gợi ý đến MIL4 hợp chất diprenyl flavonol tương tự MIL2 với khác dạng nhóm prenyl Nhóm prenyl thứ C-3ʹ nhóm prenyl thứ dạng vòng dihydrofuran C-6 C-7 phân tử flavonol Vị trí nhóm prenyl C-3ʹ flavonol khẳng định tương tác HMBC H-6′′ (δH 3,29) C-2ʹ (δC 129,1)/C-3ʹ (δC 127,7)/C-4ʹ (δC 156,9) Các tương tác HMBC H-1′′ (δH 3,08) C-5 (δC 154,7)/C-6 (δC 108,3)/C-7 (δC 166,1) H-2ʺ với C-6 (δC 108,3)/C-7 (δC 166,1)/C-4ʺ (δC 24,8)/C-5ʺ (δC 25,8) gợi ý đến vị trí vịng dihydrofurano C-6/C-7 flavonol 2hydroxyisopropyl C-2 cuả nhóm dihydrofurano Hợp chất MIL4 xác định racemic độ quay cực riêng nhỏ ([α] D25 = +0,01 (c 0,1, MeOH), xấp xỉ 0) không thấy có hiệu ứng Cotton phổ CD Từ phân tích liệu phổ trên, cấu trúc MIL4 xác định 3ʹprenyl-6,7-(2-hydroxyisopropyldihydrofurano)kaempferol Đây hợp chất đặt tên macarindicin IV Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR hợp chất MIL4 a,c) C δH (mult., J, Hz) δCa,b) 147,0 135,0 176,0 154,7 108,3 6.54 (s) 166,1 88,3 156,0 10 103,9 1′ 121,6 2′ 129,1 7.94 (d, 2,0) 3′ 127,7 4′ 156,9 5′ 114,9 6,94 (d, 8,5) 6′ 126,9 7,89 (dd, 2,0, 8,5) 1″ 25,9 3,08 (d, 8,0) 2″ 91,4 4,76 (t, 8,0) 3″ 70,0 4″ 24,8 1,17 (s) 5″ 25,8 1,16 (s) 6″ 28,1 3,29 (br d, 7,5) 7″ 122,4 5,31 (t, 7,5) 8″ 131,8 9″ 25,5 1,71 (s) 10″ 17,7 b c a)do DMSO-d6, 125MHz, 500MHz 14 3.1.1.5 Hợp chất MIL5: Macarindicin D (hợp chất mới) Hình 3.27 Cấu trúc hóa học số tương tác HMBC hợp chất MIL5 Hợp chất MIL5 phân lập dạng chất bột vơ định hình màu vàng Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS xuất pic giả phân tử m/z + + 383,1125 [M+H] (tính tốn cho [C21H19O7] : 383,1131) Kết hợp với phổ 13 C NMR xác định công thức phân tử MIL5 C21H18O7 Phổ HNMR MIL5 tín hiệu proton aromatic hệ ABX vòng B δH 7,18 (1H, d, J = 9,0 Hz), 8,29 (1H, dd, J = 2,0, 9,0 Hz) 8,50 (1H, d, J = 2,0 Hz); proton aromatic vòng A δH 6,50 (1H, s) gợi ý đến có mặt mảnh flavonol, proton olefinic δH 5,19 (1H, t, J = 7,0 Hz) 02 nhóm methyl δH 1,63 (3H, s) 1,73 (3H, s) gợi ý đến có mặt nhóm prenyl; proton aldehyde δH 10,35 (1H, s) Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR hợp chất MIL5 C 10 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 6′ 1″ 2″ 3″ 4″ 5″ 3′-CHO 5-OH δHa,c) (mult., J, Hz) δCa,b) 145,0 136,2 175,9 157,4 110,3 161,7 92,7 154,0 102,8 122,3 128,3 122,3 161,8 117,7 134,9 20,9 122,1 130,6 25,4 17,6 190,5 6.50 (s) 8.50 (d, 2.0) 7,18 (d, 9,0) 8,29 (dd, 2,0, 9,0) 3,24 (d, 7,0) 5,19 (t, 7,0) 1,63 (s) 1,73 (s) 10,35 (s) 12,64 (s) 500MHz đo DMSO- d6, 125MHz, a) b) b c 15 Phổ 13C-NMR HSQC (Bảng 3.5) MIL5 xuất tín hiệu 21 carbon Tín hiệu 21 carbon gồm carbon carbonyl (δC 175,9), carbon aldehyde (δC 190,5), 11 carbon không liên kết trực tiếp với hidro (δC 102,8, 110,3, 122,3 ×2, 130,6, 136,2, 145,0, 154,0, 157,4, 161,7 161,8), carbon methine (δC 92,7, 117,7, 122,1, 128,3 134,9) carbon methylene (δC 20,9), hai carbon methyl (δC 17,6 25,4) Phân tích liệu phổ 1Hvà 13C-NMR MIL5 gợi ý đến cấu trúc MIL5 hợp chất prenyl flavonol tương tự glyasperin A [110], ngoại trừ nhóm isoprenyl khơng xuất C-3ʹ vịng B oxi hóa nhóm prenyl tạo thành nhóm aldehyde Vị trí nhóm chức xác định phân tích phổ HSQC HMBC Các tương tác HMBC H-5′ (δH 7,18) với C-1′ (δC 122,3)/C-3′ (δC 122,3); H-6′ (δH 8,29) với C-2′ (δC 128,3)/C-4′ (δC 161,8)/C-2 (δC 145,0); proton aldehydic (δH 10,35) C-2′ (δC 128,3)/C-3′ (δC 122,3)/C4′ (δC 161,8) gợi ý đến vị trí nhóm hydroxy C-4′ nhóm aldehyde C3′ Tương tác HMBC H-8 (δH 6,50) với C-6 (δC 110,3)/C-7 (δC 161,7)/C-9 (δC 154,0)/C-10 (δC 102,8); H-1′′ (δH 3,24) C-5 (δC 157,4)/C-6 (δC 110,3)/C-7 (δC 161,7) gợi ý đến vị trí nhóm prenyl C-6 nhóm hydroxy C-5 C-7 Như vậy, cấu trúc MIL5 xác định hợp chất đặt tên macarindicin D 3.1.1.6 Hợp chất MIL6: Macarindicin E (hợp chất mới) Hình 3.32 Cấu trúc hóa học hợp chất MIL6 Hợp chất MIL6 phân lập dạng chất bột vơ định hình, màu vàng Cơng thức phân tử C 25H24O6 xác định dựa vào phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS với pic m/z 421,1642 [M+H]+ (tính tốn cho [C25H25O6]+, 421,1651) Phổ 1H-NMR MIL6 tín hiệu sau: 03 proton ABX aromatic vòng B δH 6,92 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,85 (1H, d, J = 2,5 Hz), and 7,93 (1H, dd, J = 2,5, 9,0 Hz); proton aromatic vòng A δH 6,30 (1H, s) gợi ý đến có mặt mảnh flavonol; 03 proton olefinic δH 5,17 (1H, t, J = 6,5 Hz), 5,85 (1H, t, J = 10,0 Hz), 6,46 (1H, t, J = 10,0 Hz); bốn nhóm methyl δH 1,62 (3H, s), 1,74 (3H, s), 1,42 (6H, s) gợi ý đến xuất 02 nhóm prenyl Phổ 13C-NMR HSQC MIL6 cho thấy tín hiệu 25 carbon Tín hiệu 25 carbon, bao gồm carbon carbonyl, 11 carbon không liên kết với proton, carbon methine, 01 carbon methylene, 04 carbon methyl Phân tích liệu phổ 1H- 13C-NMR cấu trúc MIL6 tương tự macadenathin B (MIL8) [38], ngoại trừ thay đổi nhóm prenyl vòng A 16 Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR hợp chất MIL6 C δHa,c) (mult., J, Hz) a,b) δC 10 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 6′ 1″ 2″ 3″ 4″ 5″ 6″ 7″ 8″ 9″ 10″ 146,0 135,9 176,1 158,2 97,8 161,2 105,6 153,4 103,0 123,7 125,6 120,6 153,9 116,0 128,8 21,1 122,5 130,9 25,3 17,8 121,2 131,8 77,0 27,8 27,8 30 (s) 85 (d, 2,5) 92 (d, 9,0) 93 (dd, 2,5, 9,0) 43 (d, 6,5) 17 (t, 6,5) 62 (s) 74 (s) 46 (d, 10,0) 85 (d, 10,0) 42 (s) 42 (s) a)đo DMSO-d6, b125MHz, c500MHz Các tương tác HMBC proton H-6 (δH 6,30) với C-5 (δC 158,2)/C-7 (δC 161,2)/C-8 (δC 105,6)/C-10 (δC 103,0); H-1′′ (δH 3,43) với C-7 (δC 161,2)/C-8 (δC 105,6)/C-9 (δC 153,4) gợi ý đến vị trí nhóm prenyl C-8 Tương tác HMBC H-5′ (δH 6,92) C-1′ (δC 123,7)/C-3′ (δC 120,6); H-6′ (δH 7,93) C-2(δC 146,0)/C-2′ (δC 125,6)/C-4′ (δC 153,9); H-6′′ (δH 6,46) C-2′ (δC 125,6)/C-3ʹ (δC 120,6)/C-4′ (δC 153,9)/C-8′′ (δC 77,0) gợi ý đến vị trí nhóm prenyl thứ C-3ʹ Sự vịng hóa nhóm prenyl với vịng B flavonol xảy thông qua cầu oxy C-4ʹ C-8ʺ khẳng định chuyển dịch phía trường thấp C-8′′ (δC 77,0) dựa vào phổ khối HR-ESI-MS Dựa vào phân tích cấu trúc MIL6 xác định đặt tên macarindicin E 17 3.1.1.7 Hợp chất MIL7: Macarindicin F (hợp chất mới) Hình 3.38 Cấu trúc hóa học hợp chất MIL7 Hợp chất MIL7 phân lập dạng chất bột vơ định hình màu vàng Phổ khối phân giải cao thu từ thực nghiệm cho kết công thức phân tử MIL7 giống MIL6 C25H24O6 Dữ liệu phổ H- 13C-NMR phần lớn giống với (MIL6), gợi ý đến khả có trao đổi vị trí vịng pyran nhóm prenyl Các tương tác HMBC H-8 (δH 6,51) C-6 (δC 103,9)/C-7 (δC 158,3)/ C-9 (δC 155,1)/C-10 (δC 103,9); H4′′ (δH 1,43)/ H-5′′ (δH 1,43) C-2′′ (δC 128,8)/C-3′′ (δC 77,8); H-1′ ′ (δH 6,61) C-5 (δC 154,6)/C-6 (δC 103,9)/C-7 (δC 158,3) gợi ý đến vịng hóa nhóm prenyl với flavonol (vịng pyran) diễn C-7 C3ʺ Ngồi ra, có mặt nhóm prenyl C-3ʹ khẳng định tương tác HMBC H-9ʺ (δH 1,70)/H-10ʺ (δH 1,70) với C-7ʺ (δC 122,3)/C-8ʺ (δC 131,7); H-6ʺ (δH 3,28) với C-2ʹ (δC 129,2)/C-3ʹ (δC 127,7)/C-4ʹ (δC 157,0) Do vậy, cấu trúc MIL7 xác định đặt tên macarindicin F Kết luận: Từ cặn chiết phân đoạn có hoạt tính lồi mã rạng ấn (M indica), nghiên cứu phân lập 22 hợp chất có kí hiệu (MIL1-MIL22) 3.1.2 Cấu trúc hợp chất phân lập từ thân loài M indica + 10 hợp chất phân lập từ thân lồi mã rạng (M Indica) Trong đó, 09 hợp chất flavonoid quercetin (MIT1), kaempferol (MIT2), kaempferol-3-O-rhamnopyranoside (MIT3), macadenathin B (MIT5), glyasperin A (MIT6), isovitexin (MIT7), 2″-rhamnosyl vitexin (MIT8), vitexin (MIT9), quercitrin (MIL10) 01 hợp chất lignan syringaresinol-O-β-D-gluco- pyranoside (MIT4) 3.1.3 Xác định cấu trúc chất phân lập từ loài M denticulata 3.1.3.1 Hợp chất MDF1: 3′-dehydroxy-solophenol C (hợp chất mới) Hình 3.63 Cấu trúc hóa học hợp chất MDF1 Hợp chất MDF1 phân lập dạng chất bột màu vàng Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS xuất pic ion giả phân tử m/z 439,1779 [MH]- (tính tốn lý thuyết 439,1757 cho cơng thức C 25H28O7), từ xác định công thức phân tử MDF1 C25H28O7 cho biết phân tử bất 18 bảo hòa có 12 liên kết đơi tương đương Phổ hồng ngoại xuất dải hấp -1 thụ max 3419, 1650, 1624, 1486 cm có mặt nhóm chức hydroxy, α,β-unsaturated carbonyl vịng thơm tương ứng Sự có mặt khung flavanol (chính xác kaemferol thế) gợi ý liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR (Bảng 3.26) Trên phổ 1H NMR MDF1, có mặt hệ A2B2 δH 6,93 (2H, d, J = 9,0 Hz), 8,09 (2H, d, J = 9,0 Hz) proton singlet δH 6,44 quan sát thấy vùng trường thấp Thêm vào xuất nhóm methyl H 1,16 (2 x CH3), 1,80 (CH3), nhóm benzylic methylene H 3,35, nhóm methyl proton H 1,49, 1,80, 2,00, 01 vinyl proton H 5,28 phổ 1H NMR gợi ý đến có mặt nhóm 8″hydroxy-3″,8″-trimethyl-oct-2″-enyl [123],[124] Phân tích liệu phổ 13CNMR với HSQC MDF1 chứng tỏ có mặt 25 carbon, bao gồm 03 nhóm methyl, nhóm methylene, sáu methine sp 2, 10 carbon sp2 bậc bốn, 01 carbon sp3 bậc bốn carbonyl carbon Độ chuyển dịch hóa học carbon C 71,5 (C-8″), 137,0 (C-3), 147,7 (C-2), 156,2 (C-9), 159,1 (C-5), 160,4 (C-4′), 163,4 (C-7) gợi ý chúng liên kết với nguyên tử oxy Bảng 3.25 Số liệu NMR hợp chất MDF1 C 10 1′ 2′,6′ 3′,5′ 4′ 1" 2" 3" 4" 5" 6" 7" 8" 9" 10" C a,b) 147,7 137,0 177,3 159,1 112,3 163,4 93,7 156,2 104,4 123,9 130,6 116,3 160,4 22,1 123,7 135,8 16,1 41,3 23,6 44,2 71,5 29,2 29,2 H a,c) (J in Hz) 6,44 (s) 8,09 (d, 9,0) 6,93 (d, 9,0) 3,35 (d, 7,0) 5,28 (t, 6,5) 1,80 (s) 2,0 (t, 7,5) 1,49 (m) 1,40 (m) 1,16 (s) 1,16 (s) a) đo CD3OD, b125 MHz, c500 MHz 19 Tương tác HMBC proton H-6″ (δ H 1,49) với C-8″ (δC 71,5) tương tác proton thuộc nhóm methyl δ H 1,16 (CH3-9″ 10″) với carbon δC 71,5 (C-8″), 44,2 (C-7″) xác định vị trí nhóm hydroxy C-8″ chuỗi geranyl Ngoài ra, tương tác HMBC H-1″ (δ H 3,45) với C-5 (δC 159,1), C-6 (δC 112,3), C-7 (δC 163,4) H-2″ (δH 5,28) với C-6 (δC 112,3) xác định vị trí kết nối chuỗi geranyl biến đổi C-6 vịng A Liên kết đơi chuỗi geranyl MDF1 dạng E dựa liệu độ chuyển dịch hóa học nhóm vinyl methyl nhóm 8″-hydroxy3″,8″-trimethyl-oct-2″-enyl Cấu hình (E) nối đơi khẳng định tương tác NOESY Me-4″ với H-1″ H-2″ với H-5″ không thấy có tương tác NOESY H-2″ với Me-4″ Như vậy, cấu trúc MDF1 xác định 6-(8″-hydroxy-3″,8″-trimethyl-oct-2″-enyl)kaempferol, hợp chất gọi 3′-dehydroxy-solophenol C Từ cặn chiết phân đoạn có hoạt tính lồi mã rạng (M denticulata), chúng tơi nghiên cứu phân lập hợp chất Trong đó, có hợp chất flavonoid 3′-dehydroxy solophenol C (MDF1), robipseudin A (MDF3), macarangin (MDF4), denticulatain D (MDF5), macarhizinoidin A (MDF6), 3,5,7,3’,4’-tetrahydroxy-6-geranyl-flavonol (MDF7), hợp chất diterpenoid (MDF2) (MDF8) 3.2 Kết thử hoạt tính 3.2.1 Hoạt tính hợp chất phân lập từ lồi M indica Đã thử hoạt tính gây độc tế bào tất 22 hợp chất phân lập từ lồi mã rạng ấn (M indica) dịng tế bào ung thư người (KB, Hep-G2, Lu-1và MCF-7), kết cho thấy có hợp chất (MIL2, MIL5-12) có hoạt tính từ mạnh đến trung bình với giá trị IC 50 tương ứng khoảng từ 1,0±0,5 đến 53,1±3,7 μM Các hợp chất lại thể hoạt tính yếu khơng có hoạt tính, giá trị IC50 > 100 μM Trong số hợp chất có hoạt tính, ba hợp chất có kí hiệu (MIL2) (MIL6-7) thể hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào thử nghiệm (KB, Hep-G2, Lu-1 MCF-7) với giá trị IC 50 đáng quan tâm (trong khoảng từ 10,6±1,1 đến 20,3±2,0 μM) Hợp chất có kí hiệu (MIL5) có hoạt tính ức chế hai số bốn dòng tế bào ung thư thử nghiệm Giá trị IC50 hợp chất tính tốn 47,4±2,4 53,1±3,7 μM tương ứng với dòng tế bào ung thư KB MCF-7 Ba hợp chất khác có kí hiệu (MIL8-10) có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư thử nghiệm (KB, Hep-G2, Lu-1 MCF-7) mức tương đối mạnh với giá trị IC 50 tương ứng từ 30,1±4,0 đến 38,7±2,8 μM Hợp chất có kí hiệu (MIL11) có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư thử nghiệm (KB, Hep-G2, Lu-1và MCF-7) mạnh với giá trị IC50 tương ứng 4,7±0,3 11,0±1,2, 9,0±0,6, 8,0±0,6 μM Giá trị IC50 hợp chất thử nghiệm hai dòng tế 20 bào ung thư KB MCF-7 (4,7±0,3 8,0±0,6 μM) thấp chất đối chứng dương mitoxantrone (giá trị IC50 7,8±0,7 10,3±1,1 μM) Khi thử nghiệm hai dòng tế bào ung thư lại (Hep-G2 Lu-1), giá trị IC50 hợp chất MIL11 (11,0±1,2 9,0±0,6 μM) nhận thấy mức độ tương với chất đối chứng dương mitoxantrone (8,2±0,6 7,7±1,4 μM) Riêng hợp chất có kí hiệu (MIL12) hoạt tính gây độc tế bào bốn dịng tế bào ung thư thử nghiệm có khác biệt tương đối mạnh Hợp chất thể tác dụng gây độc tế bào Lu-1 với giá trị IC 50 triển vọng 1,0±0,5 μM, nhỏ nhiều so với chất đối chứng dương (MX, 7,7±1,4 μM) Trong đó, hợp chất MIL12 thể hoạt tính gây độc tế bào mức độ trung bình dịng tế bào ung thư cịn lại (KB, Hep-G2 MCF-7) vớigiá trị IC50 tương ứng là: 28,7±2,6, 14,3±1,2 16,0±1,2 μM Kết gợi ý rằng, hợp chất MIL12 gây độc tế bào cách trọn lọc dòng tế bào khác Bảng 3.27 Hoạt tính hợp chất phân lập từ lồi M.indica Kí hiệu Giá trị IC50 (μM) Stt KB HepG2 Lu-1 MCF-7 MIL2 10,6±1,1 11,2±1,0 19,0±1,3 15,7±1,2 MIL5 47,4±2,4 53,1±3,7 >100 >100 MIL6 11,0±1,0 11,9±1,3 17,0±1,3 15,5±1,2 MIL7 15,0±1,7 17,9±1,5 20,3±2,0 18,1±1,9 MIL8 32,9±2,1 33,1±1,5 35,0±1,7 33,1±3,2 MIL9 38,2±2,4 30,1±4,0 34,6±3,7 34,4±3,1 MIL10 31,8±2,1 38,0±2,5 37,5±2,9 38,7±2,8 MIL11 4,7±0,3 11,0±1,2 9,0±0,6 8,0±0,6 MIL12 28,7±2,6 14,3±1,2 1,0±0,5 16,0±1,2 Mitoxantrone (MX) 7,8±0,7 8,2±0,6 7,7±1,4 10,3±1,1 21 3.2.2 Hoạt tính hợp chất phân lập từ lồi M denticulata Hầu hết hợp chất phân lập từ loài Mã rạng (M denticulata), tiến hành thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư người như: (KB, Hep-G2, MCF-7, Lu-1, Hep3B, A-549 Hela), kết cho thấy có hợp chất có hoạt tính từ mạnh đến trung bình với giá trị IC50 tương ứng khoảng từ 0,6±0,1 đến 62,8±2,2 μM Hợp chất có kí hiệu (MDF1) có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư phổi người (A-549) mạnh với giá trị IC 50 tương ứng 16,0±0,2 μM, hợp chất cịn có hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư gan (Hep3B) mức độ trung bình với giá trị IC 50 tương ứng 62,8±2,2 μM hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư cổ tử cung (Hela) mức độ mạnh với giá trị IC50 tương ứng 36,9±1,9 μM Hai hợp chất có kí hiệu (MDF3-4) có hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư người thử nghiệm với giá trị IC 50 tương ứng từ 4,5±0,5 đến 61,7±2,1 μM Hợp chất có kí hiệu (MDF7) có hoạt tính mạnh tất dòng tế bào ung thư thử nghiệm với giá trị IC 50 tương ứng khoảng từ 1,3±0,3 đến 8,7±0,4 μM Riêng hợp chất có kí hiệu (MDF6) có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư (KB, Hep-G2, Lu-1và MCF-7) mạnh với giá trị IC50 từ 0,6±0,1 μM đến 1,3±0,1 μM, mạnh hợp chất (MDF7) mạnh chất đối chứng dương ellipticine có giá trị IC50 từ 0,85±0,07 μM đến 11,4±0,8 μM; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào mạnh ba dòng tế bào ung thư thử nghiệm khác (Hep3B, A-549 Hela) với giá trị IC 50 tương ứng là: 3,7±0,5, 4,5±0,3 7,6±0,8 μM Bảng 3.28 Hoạt tính hợp chất phân lập từ loài M denticulata Hợp chất Giá trị IC50 (μM) KB HepG2 >100 MCF-7 Hep3B >100 62,8±2,2 16,0±0,2 36,9±1,9 A-549 Hela MDF1 >100 MDF3 29,3±1,4 20,8±1,5 28,3±1,7 26,0±2,1 61,7±2,1 8,1±1,1 9,8±0,9 MDF4 41,7±0,5 36,3±0,2 33,1±2,1 27,4±1,3 14,4±1,9 4,5±0,5 7,8±0,3 MDF6 0,6±0,1 0,8±0,1 1,3±0,1 1,2±0,1 3,7±0,5 4,5±0,3 7,6±0,8 MDF7 1,4±0,1 7,2±0,8 7,9±0,1 1,3±0,3 9,5±0,4 3,4±0,6 8,7±0,4 Ellipticine 1,1±0,1 0,85±0,07 1,3±0,1 11,4±0,8 0,12±0,01 1,6±0,1 2,9±0,2 Camptothecin >100 Lu-1 22 KẾT LUẬN Từ loài Mã rạng ấn (M indica) phân lập xác định cấu trúc 22 hợp chất Trong đó, có hợp chất thuộc lớp chất prenylated flavonoid có kí hiệu từ (MIL1) đến (MIL7) 15 hợp chất biết lại có hợp chất thuộc lớp chất prenylated flavonoid có kí hiệu (MIL8-10), hợp chất stilben có kí hiệu (MIL11-12) hợp chất cịn lại có kí hiệu (MIL13-22) thuộc lớp chất megastigmane Từ thân loài Mã rạng ấn (M indica) phân lập xác định cấu trúc 10 hợp chất, có kí hiệu (MIT1-10) Trong đó, có hợp chất flavonoid 01 hợp chất lignan (MIT4), có hợp chất đồng thời phân lập từ loài Từ loài Mã rạng (M denticulata) phân lập xác định cấu trúc hợp chất kí hiệu từ (MDF1) đến (MDF8) Trong đó, có hợp chất thuộc hợp chất flavonoid có kí hiệu (MDF1) hợp chất biết cịn lại có hợp chất thuộc lớp chất flavonoid có kí hiệu (MIL3-7), 01 hợp chất diterpenoid có kí hiệu (MDF2) 01 hợp chất megastigman (MDF8) Chín số 22 hợp chất phân lập từ loài Mã rạng ấn (M indica) thể tác dụng gây độc dòng tế bào ung thư KB, HepG2, Lu-1 MCF-7; giá trị IC50 nhận khoảng từ 1,0±0,5 đến 53,1±3,7 μM Năm số hợp chất phân lập từ loài Mã rạng (M denticulata) thể tác dụng gây độc dòng tế bào ung thư (KB, Hep-G2, MCF-7, Lu-1 Hep3B, A-549 Hela); giá trị IC50 nhận khoảng từ 0,6±0,1 đến 62,8±2,2 μM 23 TÍNH MỚI CỦA LUẬN ÁN Luận án, bổ sung thêm hợp chất vào ngân hàng hợp chất thiên nhiên cụ thể: hợp chất có kí hiệu từ (MIL1-MIL7) phân lập từ loài Mã rạng ấn (M indica) hợp chất (MDF1) phân lập từ loài Mã rạng (M denticulata) Luận án cung cấp kết hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất phân lập (đặc biệt hợp chất mới) dòng tế bào ung thư như: KB, Hep-G2, MCF-7, Lu-1 Hep3B, A-549 Hela KIẾN NGHỊ Kết thử hoạt tính gây độc tế bào số hợp chất điển hình phân lập hầu hết có hoạt tính dòng tế bào ung thư người như: (KB, Hep-G2, MCF-7, Lu-1, Hep-3B, A-549 Hela) Đặc biệt, có hợp chất phân lập từ loài Mã rạng ấn (M indica) lồi Mã rạng (M denticulata) có hoạt tính gây độc tế bào mạnh dịng tế bào ung thư người (KB, Hep-G2, MCF-7, Lu-1 A-549); cụ thể có hợp chất (MIL2), (MIL6-7), (MDF1) hợp chất khác (MIL11-12) (MDF67) Kiến nghị, từ kết thu cần thực nghiên cứu chuyên sâu, nghiên cứu xác định chế tác dụng, đồng thời thử nghiệm dòng tế bào ung thư khác nhằm đánh giá độ ức chế chọn lọc từ tạo sở cho việc định hướng nghiên cứu ứng dụng cho hợp chất có kí hiệu (MIL2), (MIL6-7), (MDF1), hay hợp chất có kí hiệu (MDF6) 24 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Le Tran Nguyen Vu, Luu The Anh, Nguyen Thi Cuc, Nguyen Xuan Nhiem, Bui Huu Tai, Phan Van Kiem, Marc Litaudon, Tran Dang Thach, Chau Van Minh, Huong Doan Thi Mai and Pham Van Cuong (2019): Prenylated flavonoid and other constituents from Macaranga indica, Natural Product Research, DOI: 10.1080/14786419.2019.1662007 Doan Thi Mai Huong, Le Tran Nguyen Vu, Luu The Anh, Nguyen Thi Cuc, Nguyen Xuan Nhiem, Bui Huu Tai, Phan Van Kiem, Marc Litaudon, Tran Dang Thach, Chau Van Minh, Van Cuong Pham (2019): Cytotoxic prenylated flavonoids from the leaves of Macaranga indica, Phytochemistry Letters, Vol 34, pp39-42 DOI: 10.1016/j.phytol.2019.09.001 Tran Nguyen Vu Le, Bich Ngan Truong, Thi Phuong Le, Marc Litaudon, Dang Thach Tran, Van Minh Chau, Huong Doan Thi Mai and Van Cuong Pham (2019), Cytotoxic phenolic compounds isolated from the fruits of Macaranga denticulata, Natural Product Research, pp1-8, DOI 10.1080/14786419.2019.1639175 Le Tran Nguyen Vu, Truong Bich Ngan, Le Thi Phuong, Doan Thi Mai Huong, Marc Litaudon, Nguyen Van Hung, Tran Dang Thach, Pham Van Cuong (2018), Chemical constitutents from fruits of Macaranga denticulata (Euphorbiaceae) (Part 2), Vietnam Journal of Chemistry, 56(4), 516-520 Article DOI: 10.1002/vjch.201800040 Lê Trần Nguyên Vũ, Trương Bích Ngân, Lê Thị Phương, Đoàn Thị Mai Hương, Marc Litaudon, Nguyễn Văn Hùng, Trần Đăng Thạch, Phạm Văn Cường (2017), Các hợp chất flavonoid phân lập từ Ba soi (Macaranga denticulata) họ Thầu dầu (Euphorbiaceae), Tạp chí Hóa học, 55(4E23), 70-74 ... hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học loài M indica loài M denticulata giới Việt Nam 1.4.1 Tình hình nghiên cứu lồi M indica giới Việt Nam 1.4.2 Tình hình nghiên cứu lồi M denticulata giới Việt. .. thành phần hóa học hoạt tính gây độc tế bào hai loài Macaranga indica Macaranga denticulata họ thầu dầu (Euphorbiaceae) Việt Nam? ?? 2 Mục tiêu nghiên cứu: Phát hợp chất có hoạt tính chống ung thư từ... phục vụ cho việc nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học từ cỏ dược liệu thiên nhiên,.v.v Chi Macaranga thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) có 300 lồi, Việt Nam có khoảng 13 lồi