(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa

(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa(Luận văn thạc sĩ) Đánh giá khả năng sinh tổng hợp chất kháng ung thư của một số chủng vi nấm được phân lập từ hải miên ở vùng biển Khánh Hòa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Hồ Công Dung ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP CHẤT KHÁNG UNG THƯ CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI NẤM ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ HẢI MIÊN Ở VÙNG BIỂN KHÁNH HÒA LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Nha Trang – 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Hồ Công Dung ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP CHẤT KHÁNG UNG THƯ CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI NẤM ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ HẢI MIÊN Ở VÙNG BIỂN KHÁNH HÒA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Nha Trang - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu hướng dẫn PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Các số liệu kết trình bày luận văn kết làm việc tơi suốt q trình thực nghiệm Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang Khánh Hòa, ngày 30 tháng 11 năm 2021 Tác giả luận văn Nguyễn Hồ Công Dung LỜI CẢM ƠN Lời tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc trân trọng đến PGS.TS Trần Thị Thanh Vân, Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang, tận tình giúp đỡ, hướng dẫn khoa học định hướng nghiên cứu suốt q trình tơi thực hồn thiện luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn TS Phan Thị Hoài Trinh, Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang, quan tâm tạo động lực cho suốt trình thực luận văn Đồng thời, tơi xin gửi lời cảm ơn đến anh, chị phịng Cơng nghệ sinh học biển Viện Nghiên cứu Ứng dụng cơng nghệ Nha Trang, giúp đỡ tơi hồn thành tốt phần thực nghiệm Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Quý Thầy, Cô giảng dạy cung cấp kiến thức để hồn thành học phần chương trình đào tạo Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ, Ban Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang Q Thầy, Cơ Phịng Đào tạo Học viện Khoa học Công nghệ; Viện Nghiên cứu Ứng dụng cơng nghệ Nha Trang tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nội dung chương trình đào tạo thủ tục cần thiết trình học tập Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè quan tâm, hỗ trợ động viên thời gian qua để tơi hồn thành tốt nhiệm vụ học tập công tác chuyên mơn Khánh Hịa, ngày 30 tháng 11 năm 2021 Tác giả luận văn Nguyễn Hồ Công Dung DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng anh Tiếng việt Tế bào ung thư biểu mô thận ACHN Renal carcinoma cells A-594 Adenocarcinomic human alveolar Tế bào ung thư phổi basal epithelial cells A2780 Human ovarian cancer Ung thư buồng trứng người BGC-823 Gastric adenocarcinoma cell line Tế bào ung thư dày BEL-7402 Human liver cancer Human liver cancer CN Human nasopharyngeal cancer Ung thư vòm họng DNA Acid Deoxyribonucleic Acid Deoxyribonucleic DU145 Prostatic carcinoma cell line Tế bào ung thư tuyến tiền liệt HCT-15 Human colon cancer cell line Tế bào ung thư đại tràng HCT-116 Human colon cancer cell line Tế bào ung thư đại tràng HeLa HeLa cell line Tế bào ung thư cổ tử cung HL-60 Human leukemic cell line Tế bào ung thư bạch cầu HPLC High performance liquid Sắc ký lỏng cao áp HepG-2 Human liver cancer Ung thư gan người HL-29 Colorectal adenocarcinoma cell line Tế bào ung thư đại trực tràng K-562 Human leukemic cell line Tế bào ung thư bạch cầu ITS Internal transcribed spacer Vùng phiên mã nội MDA-MB231 Human breast cancer cells Tế bào ung thư biểu mô tuyến vú MGC803 human gastric cancer cells Tế bào ung thư dày MCF-7 Human breast carcinoma cell line Tế bào ung thư vú MS Mass spectroscopy Phổ khối MTT - [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5 diphenyl tetrazolium bromide MOLT-4 Human leukemia Ung thư bạch cầu người NCI-H23 Human lung cancer cell line Tế bào ung thư biểu mô phổi NCI-H460 Human lung cancer cell line Tế bào ung thư phổi NUGC-3 Gastric adenocarcinoma cell line Tế bào ung thư biểu mô dày OSMAC One-Strain-Many-Compounds Một chủng – Nhiều hợp chất PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng khuếch đại gen PC-3 Prostatic carcinoma cell line Tế bào ung thư tuyến tiền liệt SK-MEL-2 Human skin cancer Ung thư da người SK-BR-3 Human breast cancer Ung thư vú người SGC-7901 Human gastric cancer Ung thư dày người SW1990 Pancreatic cancer cell line Tế bào ung thư tuyến tụy T47D Human breast cancer Ung thư vú người WiDr Human colon cancer Ung thư ruột kết người DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Danh sách chủng vi nấm biển phân lập 38 Bảng 3.2 Hoạt tính gây độc tế bào chủng vi nấm biển phân lập 52 Bảng 3.3 Đặc điểm hình thái chủng vi nấm biển tuyển chọn 63 Bảng 3.4 Đặc điểm hình thái 05 chủng vi nấm biển tuyển chọn quan sát kính hiển vi 64 Bảng 3.5 Phân loại 05 chủng vi nấm biển dựa phân tích trình tự gen vùng ITS 66 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Sự đa dạng vai trò vi nấm hệ sinh thái biển Hình 2.1 Địa điểm thu mẫu hải miên đảo Hòn Tre, vịnh Nha Trang 33 Hình 2.2 Các chủng vi nấm biển lên men tĩnh mơi trường gạo 34 Hình 2.3 Sinh khối môi trường lên men vi nấm ngâm chiết với ethyl acetate 35 Hình 3.1 Thống kê đặc điểm bề mặt khuẩn lạc 65 chủng vi nấm biển 49 Hình 3.2 Thống kế đặc điểm độ dày khuẩn lạc 65 chủng vi nấm biển 50 Hình 3.3 Thống kê màu sắc bề mặt khuẩn lạc 65 chủng vi nấm biển 51 Hình 3.4 Cây phát sinh chủng loại 05 chủng vi nấm biển tuyển chọn xây dựng dựa trình tự gen vùng ITS theo phương pháp Neighbor Joining, boostrap 1000 lần phần mềm MEGA7 69 MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI NẤM BIỂN 1.2 CÁC NGUỒN PHÂN LẬP VI NẤM BIỂN 1.2.1 Vi nấm từ hải miên 10 1.2.2 Vi nấm từ san hô mềm 12 1.2.3 Vi nấm từ rong biển 12 1.2.4 Vi nấm từ vùng nước trầm tích biển sâu 13 1.2.5 Vi nấm từ rừng ngập mặn 14 1.2.6 Vi nấm biển phân lập từ nguồn khác 15 1.3 NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ TỪ VI NẤM BIỂN 16 1.4 CÁC HỢP CHẤT KHÁNG UNG THƯ TỪ VI NẤM BIỂN 18 1.5 TÌNH HÌNH VÀ ĐỊNH HƯỚNG NGHIÊN CỨU CÁC HOẠT CHẤT KHÁNG UNG THƯ TỪ VI NẤM BIỂN 24 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 VẬT LIỆU 32 96 180 Mohamed I.E., Gross H., Pontius A., Kelter G., Krick A, Kehraus S., König G.M., Fiebig H.-H., Maier A., 2009, Epoxyphomalin A and B, prenylated polyketides with potent cytotoxicity from the marine-derived fungus Phoma sp., Organic Letters, 11(21), pp 5014–5017 181 Jadulco R., Ebel R., Schaumann K., Berg A., Wray V., Proksch P., Steube K., 2004, New communesin derivatives from the fungus Penicillium sp derived from the Mediterranean sponge Axinella verrucosa, Journal of Natural Products, 67(1), pp 78–81 182 Bugni T.S., Bernan V.S., Greenstein M., Maiese W.M., Janso J.E., Ireland C.M., Mayne C.L., 2003, Brocaenols A-C: novel polyketides from a marine derived Penicillium brocae, The Journal of Organic Chemistry, 68(5), pp 2014–2017 183 Zhang H., Zhao Z., Wang H., 2017, Cytotoxic Natural Products from Marine Sponge-Derived Microorganisms, Marine Drugs, 15(3), pp 68 184 Chen H., Aktas N., Konuklugil B., Daletos L., Lin W., Dai H., 2015, new fusarielin analogue from Penicillium sp isolated from the Mediterranean sponge Ircinia oros, Tetrahedron letters, 56(35), pp 5316–5320 185 Liu S., Su M., Song S.J, Jung J.H., 2017, Marine-Derived Penicillium Species as Producers of Cytotoxic Metabolites, Marine Drugs, 15(10), pp 329–373 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Danh sách số mẫu hải miên thu nhận vùng biển Nha Trang Ký hiệu mẫu Hình ảnh mẫu Tên khoa học 1901NT - 1.2 Petrosia sp 1901NT - 1.36 Axinyssa sp 1901NT - 1.39 Petrosia sp 1901NT - 1.49 Haliclona sp 1901NT - 1.50 Cliona sp 1901NT - 1.51 Clathria sp 1901NT - 1.52 Haliclona sp 1901NT - 1.59 Haliclona sp 1901NT - 1.62 Haliclona sp 1901NT - 2.7 Haliclona sp 1901NT - 2.8 Ircinia sp 1901NT - 2.14 Acanthella sp 1901NT - 2.23 Haliclona sp 1901NT - 2.42 Haliclona sp 1901NT - 2.43 Cliona sp 1901NT - 3.1.1 Aaptos sp 1901NT - 3.3 Haliclona sp 1901NT - 3.7 Clathria sp 1901NT - 3.8 Haliclona sp 1901NT - 3.9.1 Haliclona sp 1901NT - 3.13 Clathria sp 1901NT - 3.14 Cinachyrella sp 1901NT - 3.19 Clathria sp 1901NT - 3.21 Aaptos suberitoides 1901NT - 3.29 Haliclona sp 1901NT - 3.31 Aaptos suberitoides 1901NT - 3.35 Haliclona sp 1901NT - 3.48 Clathria sp 1901NT - 3.51 Haliclona sp 1901NT - 3.52 Dysidea sp Phụ lục 2: Trình tự gen vùng ITS chủng vi nấm tuyển chọn >1901NT-1.2.2 TCACACGGACACGGACACCCCCATCCCATACGGGATTCTCACCCTC TATGACGACCCGTTCCAGGGTACTTAGATGGGGGCCGCAACCGAA GCATCCTCTGCAAATTACAACTCGGACTCCGAAGGAGCCAGATTTC AAATTTGAGCTTTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGAGGCAATCCC GGTTGGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGG TATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTGGTTAAAAAAAGGTTGGTG GTCGGCAGGCGCCGGCCGGGCCTACAGAGCGGGTGACAAAGCCCC ATACGCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTCGGGCC CGTCCCCCGGGAAGGGGACGGCGACCCAACACACAAGCCGTGCTT GAGGGCAGCAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCCCCGGAATACCA GGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGATGATTCACTGAATTCT GCAATTCACATTAATTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCC GGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACGATTAAATAAAT CGACTCAGACTGCAACCTTCAGACAGTGTTCGTGTTGGTGTCTCCG GCGGGCGCGGGCCCGGGGGCGAATGCCCCCCGGCGGCCACGAATG GCGGGCCCGCCGAAGCAACAAGGTACGATAGACACGGGTGGGAG GTTGGACCCAGAGGGCCCTCACTCG ... tìm kiếm chủng vi nấm liên kết với hải miên vùng biển Khánh Hịa có khả sinh tổng hợp chất kháng ung thư đánh giá cần thiết, góp phần khai thác hợp chất kháng ung thư đồng thời nâng cao giá trị... từ rừng ngập mặn 14 1.2.6 Vi nấm biển phân lập từ nguồn khác 15 1.3 NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ TỪ VI NẤM BIỂN 16 1.4 CÁC HỢP CHẤT KHÁNG UNG THƯ TỪ VI. .. có khả sinh tổng hợp hợp chất chuyển hóa thứ cấp có nhiều hoạt tính sinh học có giá trị y dược chống ung thư, chống oxy hóa, kháng sinh, kháng vi? ?m, chống vi rút [8] Vi nấm biển phân lập từ nhiều