CƠ SỞ LÝ LUẬN
GIỚI THIỆU VỀ THỤ TINH NHÂN TẠO
Thụ tinh nhân tạo (TTNT) đã có lịch sử từ thế kỷ XVIII và hiện nay, nhờ công nghệ sinh học tiên tiến, tinh dịch và phôi của các loài động vật quý hiếm được bảo tồn hiệu quả Tại Việt Nam, TTNT được áp dụng trong chăn nuôi heo từ năm 1958, với nhiều tiến bộ đáng kể như thiết lập các trạm TTNT cấp tỉnh và mạng lưới cấp huyện, vùng TTNT đã trở thành một phần quan trọng trong ngành chăn nuôi heo Việt Nam, giúp nâng cao chất lượng đàn heo giống và tăng tỷ lệ nạc trong heo thương phẩm.
2.1.1 Khái niệm về thụ tinh nhân tạo
Thụ tinh nhân tạo là phương pháp phối giống do con người thực hiện một cách gián tiếp, bao gồm các bước như lấy tinh trùng, kiểm tra chất lượng, pha chế môi trường, bảo quản và gieo tinh.
2.1.2 Ưu và nhược điểm của thụ tinh nhân tạo
+ Nâng cao hiệu suất sử dụng đực giống
+ Kiểm soát được tinh dịch tốt hoặc xấu
+ Cải tạo giống nhanh, làm nhanh quá trình kiểm tra đời sau
+ Tiết kiệm được đực, có điều kiện chọn những con đực tốt nhất
+ Tránh được sự chênh lệch về tầm vóc
+ Là biện pháp thích hợp nhất trong chăn nuôi để tạo các đàn nuôi đồng đều theo lứa (all in - all out)
+ Hạn chế được một số bệnh lây lan do tiếp xúc
+ Tránh các stress không cần thiết cho đực (vận chuyển, bị nái tấn công,…) + Có thể bảo tồn và vận chuyển xa
+ Phải có phòng thí nghiệm với đầy đủ trang thiết bị
+ Phải có kỹ thuật viên có tay nghề và yêu nghề
+ Bảo quản tinh dịch trong thời gian dài còn gặp nhiều khó khăn
Nếu quy trình kiểm tra bệnh không được thực hiện một cách nghiêm ngặt, tốc độ lây lan của các bệnh như Brucelose và Leptospirose sẽ nhanh chóng gia tăng, thậm chí nhanh hơn nhiều so với việc lây lan qua phối giống trực tiếp.
+ Sổ sách không rõ ràng, cẩn thận sẽ dễ bị đồng huyết do ít đực.
SỰ THÀNH THỤC VỀ TÍNH DỤC
Gia súc đạt đến sự trưởng thành về tính dục, hay còn gọi là sự thành thục về tính dục, khi chúng có khả năng sản sinh ra các tế bào sinh dục hoàn chỉnh như trứng và tinh trùng, có khả năng thụ thai Đồng thời, chúng cũng thể hiện các hành vi và tập tính sinh dục đặc trưng.
2.2.2 Sự thành thục về tính dục
Tuổi thành thục tính dục thay đổi tuỳ theo giống, loài, khí hậu, mùa, dinh dưỡng, phái tính, chăm sóc
Những giống nhỏ con thường có tuổi thành thục lớn hơn
Bao gồm sự tương tác giữa nhiệt độ, ẩm độ, thời gian sinh sống,… giúp cho động vật thành thục sớm hơn
- Mùa Ảnh hưởng lớn đối với thú giao phối theo mùa, tuổi thành thục có thể đến sớm hoặc kéo dài đến mùa sau
Tốt thì thú có thể thành thục sớm hơn, tuy nhiên dinh dưỡng kém không ngăn ngừa sự thành thục, mặc dù nó đến muộn hơn
Thú cái thành thục sớm hơn thú đực vài tuần, vài tháng hoặc vài năm tùy loài.
BỘ PHẬN SINH DỤC ĐỰC
Bộ phận sinh dục đực bao gồm dịch hoàn, phó dịch hoàn, ống dẫn tinh, các tuyến sinh dục phụ và dương vật
Dịch hoàn là tuyến sinh dục chính có chức năng sản xuất tinh trùng và hormone sinh dục nam, góp phần phát triển các đặc điểm giới tính thứ cấp.
Tinh hoàn có hình bầu dục, giống như hai hạt đậu hơi dẹp với hai đầu tròn Đầu sau tự do, trong khi đầu trước có nhiều ống nhỏ kết nối giữa dịch hoàn và phó dịch hoàn Trong thời kỳ bào thai, hai dịch hoàn nằm trong xoang bụng và vào cuối thai kỳ, chúng di chuyển ra ngoài qua kênh háng để định vị trong bìu dịch hoàn.
Chức năng tạo giao tử đực, cụ thể là tinh trùng, được thực hiện bởi các ống sinh tinh từ khi bắt đầu giai đoạn thành thục tính dục, với khả năng sản xuất tinh trùng liên tục Trong quá trình này, các tế bào dòng mầm như tinh nguyên bào, tinh bào và tinh tử kết hợp với tế bào Sertoli tạo thành biểu mô sinh tinh Các tế bào này tổ chức thành những quần hợp tế bào riêng biệt, hình thành chu kỳ của biểu mô sinh tinh.
Tế bào Leydig, là những tế bào lớn và đa diện, nằm trong mô liên kết giữa các ống sinh tinh, có chức năng chính là sản xuất hormone testosterone, hormone chính điều tiết đặc điểm giới tính nam Quá trình này được kích thích bởi hormone từ thùy trước của tuyến yên.
Phó dịch hoàn là một cấu trúc thon dài, nằm ở phía trên của dịch hoàn Phần trước được gọi là đầu, phần sau là đuôi, và phần giữa được gọi là thân.
Phó dịch hoàn đóng vai trò quan trọng trong việc di chuyển, sinh tồn và trưởng thành của tinh trùng Tinh trùng được sản xuất trong ống sinh tinh và được vận chuyển đến đầu phó dịch hoàn nhờ vào tiên mao của biểu mô Phó dịch hoàn co bóp theo nhịp để hỗ trợ sự di chuyển của tinh trùng Trong môi trường của phó dịch hoàn, áp suất thẩm thấu tăng cao và pH giảm, giúp tinh trùng giữ được trạng thái bất động và tồn tại lâu dài.
Bắt đầu từ phần đuôi của phó dịch hoàn, ống tinh dẫn đến túi tinh Bầu ống tinh, nơi tiếp nối của hai ống dẫn tinh phải và trái, có hình dạng chữ V, nằm dưới tuyến nhiếp hộ và dẫn vào đoạn đầu của ống thoát tiểu Ống dẫn tinh bao gồm cả đoạn có tuyến và đoạn không có tuyến.
2.3.4 Các tuyến sinh dục phụ
2.3.4.1 Túi tinh nang (Vesicular gland)
Tuyến lớn nhất trong ba tuyến, chất tiết này đóng vai trò quan trọng trong việc tạo môi trường đệm, cung cấp năng lượng và trung hòa pH ở âm đạo, từ đó tạo điều kiện thuận lợi cho sự di chuyển của tinh trùng.
2.3.4.2 Tuyến tiền liệt (Prostate Gland)
Tuyến lẻ nằm ở cổ bàng quang, có chức năng tiết dịch qua các lỗ nhỏ vào ống Chất tiết này có pH trung tính, giúp hấp thụ CO2, pha loãng tinh dịch và tăng cường hoạt tính của tinh trùng.
2.3.4.3 Tuyến cầu niệu đạo (Cowper Gland)
Chất tiết là dịch thể keo chứa globulin, và dưới tác dụng của men vezikinase, dịch này tạo thành khối keo phèn (Tapioca) Tapioca có tác dụng bít kín cổ tử cung, ngăn không cho tinh dịch chảy ngược ra ngoài.
Dương vật chia làm ba phần:
- Gốc hay rễ là phần liên kết với cung tọa của xương chậu
- Thân nối tiếp với rễ, đoạn này rất dài, hướng về phía trước, có một phần gập lại hình chữ S
- Qui đầu là phần tận cùng phía dưới, ống thoát tiểu đổ ra phần trước của bao qui đầu.
TINH DỊCH
Tinh dịch là hỗn hợp các chất tiết của dịch hoàn, dịch hoàn phụ và các tuyến sinh dục phụ
2.4.2 Thành phần của tinh dịch
Tinh dịch gồm hai thành phần chính là tinh trùng và tinh thanh
Bảng 2.1 Thành phần hoá học của tinh dịch
(Sergin và Milovanob, 1992; dẫn liệu của Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Quốc Đạt,
Thành phần Đơn vị tính (mg %)
Protein (tính theo đơn vị N) 3831
Tinh thanh là hỗn hợp dịch chất được tiết ra từ tuyến sinh dục phụ, được hình thành ngay trước khi xuất tinh Chức năng của tinh thanh là kích thích tinh trùng hoạt động trở lại, giúp chúng thoát khỏi trạng thái tiềm sinh.
- Tác dụng của tinh thanh
+ Rửa sạch niệu đạo, là môi trường cho tinh trùng vận động
+ Trung hòa pH âm đạo và tạo điều kiện cho tinh trùng tiến đến trứng
Số lượng tinh thanh phụ thuộc vào kích thước và tốc độ tiết của các tuyến sinh dục phụ Ở thú giao phối tại tử cung như ngựa và heo, lượng tinh thanh thường nhiều nhưng nồng độ tinh trùng lại thấp Ngược lại, ở thú giao phối tại âm đạo như bò và cừu, lượng tinh thanh ít hơn nhưng nồng độ tinh trùng lại cao.
Tinh trùng, giao tử đực được sản sinh trong ống sinh tinh, có thành phần chủ yếu là 75% nước và 25% vật chất khô Trong vật chất khô, tinh trùng chứa 85% protid, 13,2% lipid và 1,8% chất khoáng.
Bảng 2.2 Kích thước trung bình tinh trùng của một số loài gia súc
(àm) Đầu (dài x rộng x dày x) Cổ thân Đuôi
Đầu tinh trùng hình trứng được bảo vệ bởi màng lipoprotein, hình thành khi tinh trùng di chuyển qua dịch hoàn phụ, giúp tinh trùng có khả năng định hình và chống lại các điều kiện bất lợi Dưới màng lipoprotein là hệ thống acrosome, đóng vai trò quan trọng trong khả năng thụ thai của tinh trùng, nhưng hệ thống này lại dễ bị phân hủy bởi hóa chất và hòa tan bởi enzyme.
Cổ thân tinh trùng nối liền với đầu một cách lỏng lẻo và chủ yếu chứa nguyên sinh chất Phần này rất dễ bị tách rời, trong khi thân tinh trùng lại chứa nhiều enzyme hô hấp.
- Đuôi chứa 23% lipid giúp cho tinh trùng vận động nhờ những sợi xoắn dọc theo chiều dài của tinh trùng
2.5 ĐẶC TÍNH CỦA TINH TRÙNG VÀ CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN
2.5.1 Những đặc tính của tinh trùng
Tinh trùng hấp thụ oxy và thải carbon dioxide, với mức độ hoạt động cao sẽ tiêu hao nhiều năng lượng, dẫn đến giảm sức sống Quá trình trao đổi chất của tinh trùng diễn ra qua hai phương thức chính: hô hấp và phân giải đường, bao gồm fructose và glucose.
Trong điều kiện cú O2 tinh trựng hụ hấp mạnh, hệ số hụ hấp (tớnh bằng àl) là số O2 tiờu hao trong 1 giờ của 100.000 tinh trựng ở 37 0 C, trung bỡnh là 10-20 àl
Sự phân giải đường diễn ra trong môi trường không có oxy, với hệ số phân giải là lượng fructose (mg) mà 10^9 tinh trùng tiêu thụ trong 1 giờ ở nhiệt độ 37°C, trung bình đạt 2 mg.
Nếu tinh dịch chứa bọt khí và vật lạ, tinh trùng sẽ tiếp xúc với những yếu tố này Điều này giúp tinh trùng bao vây và thụ tinh với trứng khi gặp nhau.
Nếu nhỏ một giọt tinh lên lame kính nửa sáng nửa tối thì tinh trùng sẽ tập trung về nơi có ánh sáng
Tinh trùng có khả năng di chuyển ngược dòng và vận động thẳng Khi giao phối với con cái đang trong thời kỳ động dục, dịch nhờn từ tử cung giúp tinh trùng bơi ngược vào tử cung và tiến lên 1/3 ống dẫn trứng, từ đó tăng cường khả năng thụ tinh cho trứng.
2.5.2 Những yếu tố ảnh hưởng đến sức sống của tinh trùng
Nước cất hoặc nước đã tiêu độc có thể làm cho tinh trùng bị tổn thương, dẫn đến tình trạng đầu to, lắc lư và chết do ảnh hưởng đến áp suất thẩm thấu của môi trường Vì vậy, trong quy trình thụ tinh nhân tạo, việc sử dụng bình lấy tinh và các dụng cụ chứa tinh phải đảm bảo khô sạch và được tiệt trùng kỹ lưỡng.
Tinh trùng hoạt động kém ở nhiệt độ từ 5-15 độ C, nhưng khi nhiệt độ tăng lên, hoạt động của tinh trùng cũng gia tăng Nhiệt độ tối ưu cho tinh trùng là 37 độ C, tuy nhiên, nếu nhiệt độ tiếp tục tăng, tinh trùng sẽ hoạt động mạnh mẽ hơn nhưng cũng tiêu hao năng lượng nhanh chóng, dẫn đến giảm sức sống và tăng tỷ lệ chết.
- Các chất có tính sát trùng
Tinh trùng rất nhạy cảm với các hóa chất có tính sát trùng như alcool, crezyl,… nên khi tồn trữ hoặc pha chế không nên để chúng rơi vào
Trong môi trường có oxy (O2), tinh trùng sẽ tăng cường hô hấp và hoạt động, dẫn đến việc tiêu hao năng lượng nhanh chóng Vì vậy, khi cho tinh trùng vào lọ, cần đảm bảo rằng lọ được rót đầy, đậy nắp kín và không còn bọt khí bên trong.
Do tinh trùng có tính hướng sáng nên khi ánh sáng chiếu vào sẽ làm cho tinh trùng tăng cường hoạt động, giảm năng lượng và chết nhanh
Trong quá trình vận chuyển tinh dịch, tinh trùng sẽ bị chết nhanh nếu bị dao động mạnh
- Vật dơ bẩn, vi trùng
Tinh dịch có thể bị coi là nhiễm khuẩn nặng khi chứa từ 13.000 vi khuẩn trở lên, điều này có thể ảnh hưởng đến sức khỏe và chất lượng con cái Một số loại vi khuẩn thường gặp trong tinh dịch bao gồm Staphylococcus spp, E.coli và Streptococcus spp.
Vật bẩn (thức ăn,…) là môi trường thuận lợi để tinh trùng bám vào và mau chết
Tinh dịch heo có pH 6,8-7,6 nếu thay đổi pH trong phạm vi lớn hoặc đột ngột sẽ ảnh hưởng đến sức sống của tinh trùng.
NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH SINH TINH VÀ PHẨM CHẤT TINH DỊCH
Có rất nhiều yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tinh và phẩm chất tinh dịch như sau:
Các giống khác nhau cho phẩm chất tinh dịch khác nhau, thường các giống heo ngoại cho dung lượng và phẩm chất tốt hơn các giống heo nội
Bảng 2.3 Phẩm chất tinh dịch của các giống heo
(Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Thiện, 1993)
Theo Morrow (1986) giống của con đực ảnh hưởng không lớn đến khả năng thụ thai và số con đẻ ra
Dinh dưỡng là yếu tố quan trọng trong đời sống vật nuôi, đặc biệt đối với giống đực Ngoài việc duy trì trọng lượng và sức khỏe, dinh dưỡng ảnh hưởng trực tiếp đến quá trình sinh tinh và chất lượng tinh dịch Cung cấp đầy đủ dinh dưỡng giúp cải thiện chất lượng tinh trùng, ổn định và kéo dài thời gian sử dụng Ngược lại, thiếu dinh dưỡng có thể gây ra rối loạn sinh lý và sinh hóa, dẫn đến chất lượng tinh dịch kém.
Protein đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển cân đối của cơ thể và hình thành nhân bào của tinh trùng, giúp heo đạt độ thành thục nhanh chóng Thiếu protein có thể dẫn đến giảm chất lượng tinh, trong khi thừa protein có thể gây viêm nhiễm ở cơ quan tiết niệu, làm giảm tính hăng và tuổi thọ của con đực Hàm lượng protein lý tưởng trong khẩu phần ăn thường dao động từ 14% đến 16%.
Quan trọng trong việc hòa tan các vitamin trong chất béo như vitamin A, D, E,
K Nếu thiếu chất béo sẽ làm giảm khả năng thụ thai
Vitamin A đóng vai trò quan trọng trong việc tổng hợp testosterone, bảo vệ mô của cơ quan sinh dục và tăng cường chức năng tình dục Nó cũng giúp cải thiện số lượng và hoạt lực tinh trùng Khi thiếu vitamin A, số lượng tinh trùng sẽ giảm và tỷ lệ thụ tinh cũng thấp hơn.
Vitamin E đóng vai trò quan trọng trong việc tăng cường nồng độ và thể tích tinh dịch Thiếu hụt vitamin E có thể dẫn đến rối loạn trong quá trình sản xuất tinh trùng, thoái hóa ống dẫn tinh, từ đó giảm lượng tinh dịch và khả năng thụ thai của tinh trùng.
Vitamin D đóng vai trò quan trọng trong việc chuyển hóa canxi và phospho trong cơ thể, góp phần làm cho giống đực khỏe mạnh Thiếu hụt vitamin D có thể dẫn đến thời gian sử dụng ngắn, giảm lượng tinh và tiềm ẩn nguy cơ cho người thực hiện lấy tinh.
Khi thú đã thành thục tính dục, cần nhốt riêng từng con để tránh việc cắn nhau và nhảy lên nhau Chuồng phải được giữ sạch sẽ, đảm bảo đầy đủ ánh sáng, thoáng mát và có sân chơi cho chúng.
Nhiệt độ lý tưởng cho gia súc dao động từ 16-22°C, giúp cải thiện khả năng sản xuất tinh trùng của thú đực Khi nhiệt độ vượt quá 27°C, gia súc sẽ bị stress nhiệt, ảnh hưởng đến sự sản xuất hormone sinh dục Nhiệt độ từ 31-35°C trong 72 giờ có thể làm giảm nồng độ tinh trùng và tỷ lệ thụ thai Nếu nhiệt độ đạt 40°C, gia súc sẽ sản xuất nhiều tinh trùng dị dạng.
Heo cần 10-12 giờ ánh sáng mỗi ngày với cường độ 250 lux để duy trì sức khỏe sinh sản Thiếu ánh sáng có thể dẫn đến giảm thể tích và nồng độ tinh trùng, đồng thời tăng tỷ lệ tinh trùng kỳ hình và tỷ lệ chết.
Vận động là yếu tố quan trọng giúp đực giống tăng cường trao đổi chất, phát triển tính dục và cải thiện sức khỏe cơ thể Mức độ và hình thức vận động sẽ khác nhau tùy thuộc vào từng loài và tình trạng sức khỏe của từng giống.
Có liên quan đến dung lượng, nồng độ, tổng số tinh trùng tiến thẳng và số liều tinh được sản xuất từ một lần lấy
Nếu lấy quá thưa thì không tận dụng hết hiệu suất, phẩm chất tinh dịch có thể ảnh hưởng đến tính dục con nọc
Nếu lấy quá dày thì phẩm chất tinh kém con vật giảm tính hăng và sinh ra trì trệ
Nếu để quá lâu không sử dụng thì con đực ù lì, mập
Trước khi tiến hành lấy tinh, cần vệ sinh chuồng trại sạch sẽ và dọn dẹp phân Nọc giống cũng phải được tắm rửa kỹ lưỡng, đặc biệt là bộ phận sinh dục, và lông ở bao qui đầu cần được cắt ngắn Người thực hiện lấy tinh nên đeo găng tay, đồng thời dụng cụ đựng tinh phải được hấp tiệt trùng để đảm bảo an toàn vệ sinh.
Khi thu hoạch tinh heo nọc, người lấy tinh hướng dẫn nọc nhảy lên giá nhảy, nơi nọc sẽ có phản xạ cương cứng và thúc giá Khi nọc bắt đầu thúc giá, người lấy tinh vào vị trí và quan sát phản ứng của nọc, ngồi ở tư thế hình chữ đinh Họ bóp bao quy đầu để đẩy nước tiểu ra ngoài, sau đó nắm dương vật cách đầu khoảng 2 cm và kích thích với tần suất 60 nhịp/phút để nọc đưa dương vật ra ngoài Khi nọc chuẩn bị phóng tinh, ngưng kích thích và thu thập vài giọt tinh đầu màu trắng trong, tiếp tục lấy khi tinh có màu trắng đục Sau khi hết đợt phóng tinh, kích thích trở lại trong 2-3 pha Khi nọc không còn hứng thú với giá nhảy và dương vật có xu hướng rút vào, người lấy tinh từ từ rời vị trí, giúp nọc xuống giá một cách nhẹ nhàng.
Sau khi lấy tinh, tinh được đựng trong bình nhựa tối màu, nhanh chóng đưa tinh về phòng thí nghiệm, khi đi tránh sóng lắc, ánh sáng chiếu thẳng
Lấy tinh bằng tay cần kỹ thuật và phương pháp đúng để đạt hiệu quả cao Người thực hiện cần đeo găng tay và vệ sinh chuồng trại cũng như con đực giống trước khi tiến hành lấy tinh.
Heo thường đạt độ trưởng thành sinh dục trong khoảng 5-8 tháng tuổi, lúc này dịch hoàn có thể chứa tinh trùng, nhưng số lượng còn ít và khả năng thụ thai không cao do heo đực chưa phát triển hoàn chỉnh về tập tính sinh dục Khi heo trưởng thành, dung lượng tinh dịch sẽ tăng dần theo độ tuổi và ổn định ở giai đoạn từ 2 đến 3 năm tuổi.
2.6.5 Bệnh lý do vi khuẩn
Brucellose, Leptospirose, Vibriose làm sưng và teo dịch hoàn, ảnh hưởng đến khả năng sinh tinh
Heo chịu nóng kém nên chuồng trại phải thoáng mát, nhiệt độ ổn định
Bảng 2.4 Nồng độ tinh trùng qua các mùa
Nồng độ tinh trùng (10 6 tt/ml) Giống
Mùa đông xuân Mùa hè thu
(Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Thiện, 1993)
PHA CHẾ VÀ BẢO QUẢN TINH DỊCH
Để tăng cường dung lượng tinh dịch và nâng cao hiệu suất sử dụng giống đực, việc pha chế tinh dịch không chỉ cung cấp môi trường dinh dưỡng cho tinh trùng sống lâu hơn mà còn giúp làm loãng nồng độ các chất có hại do các tuyến sinh dục phụ tiết ra trong quá trình bảo tồn.
Trong quá trình pha chế, cần đảm bảo rằng áp suất thẩm thấu của môi trường và tinh dịch tương đương nhau Đồng thời, mức pH từ 6 đến 6,3 sẽ giúp giảm sự vận động của tinh trùng, tạo điều kiện thuận lợi cho các bước tiếp theo trong quy trình.
- Bảo tồn ở nhiệt độ mát (10-15 0 C)
- Một số phương pháp đơn giản để tạo nên nhiệt độ này
Để bảo quản tinh chất, hãy sử dụng nước đá cho vào phích kim loại lưỡng tính hoặc hộp xốp Sau đó, lót một lớp vải sạch lên trên và đặt các lọ đựng tinh lên lớp vải đó.
Sử dụng acid axetic để bảo quản tinh dịch bằng cách đặt các lọ acid axetic vào ngăn đá của tủ lạnh Acid axetic sẽ đóng băng và giữ cho tinh dịch ở nhiệt độ 10-15 độ C trong suốt quá trình tan chảy, vì acid axetic bắt đầu tan chảy ở nhiệt độ 10 độ C.
Thiết bị bảo ôn là một loại "tủ làm mát" cỡ nhỏ, hoạt động bằng điện hoặc ắc quy, có thể đặt trong phòng hoặc mang theo khi di chuyển bằng ôtô, mô tô, xe đạp, với khả năng duy trì nhiệt độ từ 10-15 độ C.
MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN KẾT QUẢ BẢO QUẢN
2.8.1 Ảnh hưởng của chất lượng tinh dịch
Chất lượng tinh dịch có ảnh hưởng đến kết quả bảo tồn (Nguyễn Tấn Anh - Nguyễn Quốc Đạt 1997)
2.8.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ bảo quản
Nhiệt độ môi trường ảnh hưởng đáng kể đến hoạt động của tinh trùng Khi được giữ ở nhiệt độ 5°C, tinh trùng sẽ không hoạt động hoặc chỉ di chuyển rất ít Tuy nhiên, khi nhiệt độ tăng lên 10°C, hoạt động của chúng trở nên tích cực hơn Sự gia tăng nhiệt độ tiếp tục dẫn đến sự mạnh mẽ trong hoạt động của tinh trùng, đạt mức tối đa ở 37°C Do đó, khả năng hoạt động của tinh trùng tỷ lệ thuận với nhiệt độ môi trường mà chúng đang sống.
Nâng cao nhiệt độ môi trường sẽ rút ngắn tuổi thọ của tinh trùng Nghiên cứu của Klemina cho thấy rằng ở nhiệt độ 46 độ C, protein của tinh trùng sẽ biến tính không hồi phục (theo dẫn liệu của Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Quốc Đạt, 1997).
Nhiệt độ thấp không gây hại nhiều cho tinh trùng, và việc làm lạnh từ từ có thể giúp tinh trùng duy trì khả năng sống sót Sau khi được hâm nóng, tinh trùng có thể phục hồi hoạt lực và vẫn có khả năng thụ thai.
Tốc độ hạ nhiệt để đạt được nhiệt độ bảo tồn là yếu tố quan trọng, vì nếu quá nhanh, nó có thể gây choáng lạnh cho tinh trùng.
2.8.3 Ảnh hưởng của ánh sáng Ánh sáng tán quang không có hại cho tinh trùng Tuy nhiên, dưới tia nắng trực tiếp, hoạt động của tinh trùng được tăng cường, sau 20-40 phút chúng sẽ chết Vì vậy, khi tiến hành TTNT, không cho tinh dịch tiếp xúc với tia nắng mặt trời và các đèn khử trùng Toàn bộ công việc có liên quan đến tinh trùng cần được tiến hành trong phòng kín Để bảo quản tinh dịch, có thể dùng chai lọ màu để chúng có thể chặn tia cực tím lại
2.8.4 Ảnh hưởng của đặc tính lý-hoá môi trường
Những đặc tính lý-hoá của môi trường có ảnh hưởng lớn đến đời sống tinh trùng, đó là áp suất thẩm thấu, pH, chất điện giải,…
2.8.4.1 Áp suất thẩm thấu của môi trường Áp suất thẩm thấu (Posm) của một chất lỏng phụ thuộc vào nồng độ hòa tan của các phân tử và các ion trong đó Muốn cho sức sống tinh trùng được thuận lợi, Posm của môi trường phải tương đương với Posm nội tạng của tinh trùng, đó là những dung dịch đẳng áp Các dung dịch ưu trương hoặc nhược trương đều có hại, làm cho tinh trùng bị teo lại hoặc trương phồng lên và chết một cách nhanh chóng
Trong thực tế, giá trị Posm của dung dịch có sự biến động lớn giữa các loài, cá thể và các lần lấy tinh Do đó, không phải lúc nào các môi trường pha loãng cũng đẳng trương với tinh dịch và tinh trùng Tuy nhiên, tinh trùng vẫn có khả năng chịu đựng sự chênh lệch này ở mức độ nhất định, nhờ vào khả năng thích ứng tạm thời của màng ngoài tinh trùng và độ bền thẩm thấu.
2.8.4.2 pH của môi trường pH của một chất lỏng được xác định bằng nồng độ ion H + có trong đó Số lượng ion H + càng tăng thì môi trường càng toan tính và nếu ngược lại thì kiềm tính
Trong môi trường kiềm, tinh trùng được kích thích và tăng cường sức hoạt động, trong khi môi trường hơi toan lại ức chế hoạt động của chúng pH quá toan hoặc quá kiềm đều có tác động tiêu cực đến sức sống của tinh trùng, đặc biệt là khi tiếp xúc với các acid mạnh như HCl, H2SO4, acid acetic hay kiềm mạnh như NaOH, KOH Để duy trì pH ổn định ở mức thích hợp, người ta thường sử dụng các hóa chất có năng lực đệm, giúp giảm thiểu sự biến động của môi trường dung dịch.
2.8.4.3 Vai trò của chất điện giải trong môi trường
Tinh trùng rất nhạy cảm với dung dịch muối (NaCl), và môi trường pha loãng có thể trở nên có hại khi tăng hoá trị của cation Các muối cation hoá trị +1 (Na, K) và +2 (Ca, Mg) làm cho tinh trùng tụ dính, trong khi cation hoá trị +3 (Al, Fe) gây đông đặc tinh dịch và làm chết tinh trùng nhanh chóng Đối với anion, các muối hoá trị -2 có tác động tích cực hơn so với anion hoá trị -1, và anion hoá trị -3 còn mang lại hiệu quả tốt hơn nữa.
Mặc dù các muối có thành phần hóa học khác nhau, nhưng các anion cùng hóa trị có tác dụng cải thiện tương tự cho đời sống tinh trùng Các anion trong môi trường pha loãng giúp làm chậm hiện tượng trương phồng của keo vi sinh và màng tinh trùng, hạn chế ngộ độc do sản phẩm phân giải, đồng thời duy trì khả năng đệm của môi trường này.
2.8.4.4 Vai trò của chất không điện giải trong môi trường
Chất không điện giải như glucose, fructose và saccharose giúp giảm độ dẫn điện của môi trường, bảo vệ tinh trùng khỏi hiện tượng mất điện tích trên bề mặt do nhiều nguyên nhân khác nhau Điều này góp phần duy trì sức sống của tinh trùng một cách thuận lợi hơn.
Chất không điện giải đóng vai trò quan trọng như một chất khử, giúp bảo vệ tinh dịch khỏi sự oxy hóa Khi tiếp xúc với oxy, nó hoạt động như một chất chống oxy hóa, ngăn chặn sự tổn hại cho các thành phần của tinh dịch.
2.8.4.5 Ảnh hưởng của nước cất trong môi trường pha chế
Người ta chia nước cất ra thành ba loại (I, II và III) dựa theo sáu chỉ tiêu sau: 1- Độ dẫn điện
Loại I: (loại nước tinh khiết nhất) đây là kết quả sau khi tinh lọc qua một số hệ thống như khử ion, thay đổi áp suất thẩm thấu, khử trùng bằng tia cực tím
Loai II: nước cất hai lần
Loại III: thu được nhờ chưng cất một lần hoặc thay đổi áp suất thẩm thấu mà không chưng cất
Nước thường và nước cất đều có thể làm chết tinh trùng nhanh chóng, vì chúng làm giảm áp suất thẩm thấu của môi trường Khi nước thấm vào, tinh trùng sẽ phình to, lắc lư tại chỗ và cuối cùng dẫn đến cái chết của chúng.
TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT SỬ DỤNG TRONG MÔI TRƯỜNG
Chất không điện ly có khả năng giảm độ dẫn điện của môi trường, giúp bảo vệ tinh trùng khỏi mất điện tích trên bề mặt do nhiều nguyên nhân Nó cũng duy trì áp suất thẩm thấu và cung cấp năng lượng cần thiết cho tinh trùng hoạt động, đồng thời hạn chế tác động của các chất kiềm tính Để tăng cường khả năng sống và hoạt động của tinh trùng, glucose được bổ sung với lượng thích hợp, vì tinh trùng chỉ sản xuất năng lượng trong một giới hạn nhất định.
Các nguồn năng lượng như galactose, fructose, ribose và trehalose đã được bổ sung vào môi trường, nhưng nghiên cứu cho thấy lợi ích của chúng không vượt trội hơn so với glucose.
Tinh trùng và vi khuẩn trong tinh dịch tạo ra các sản phẩm biến chất như acid lactic Sự gia tăng acid lactic trong môi trường dẫn đến sự giảm pH của tinh dịch Chất đệm có vai trò quan trọng trong việc giảm dao động pH trong môi trường tinh dịch.
Hệ đệm gồm một acid yếu và một muối kiềm mạnh của acid yếu Ví dụ, hệ bicarbonate gồm H2CO3/NaHCO3; hệ phosphate là H3PO4/Na2HPO4.
Phản ứng đệm hoạt động theo nguyên tắc cân bằng pH: khi môi trường chứa tinh dịch có độ kiềm tăng, nó sẽ tương tác với phần acid của hệ đệm; ngược lại, khi nồng độ acid tăng, hệ đệm sẽ phản ứng với phần kiềm để duy trì sự ổn định pH.
Các loại buffer đơn giản như sodium bicarbonate và sodium citrate thuộc nhóm buffer có giới hạn, trong khi Tris là loại buffer có phạm vi rộng hơn, hoạt động hiệu quả trong khoảng pH từ 7 đến 9, tùy thuộc vào nhiệt độ bảo quản tinh dịch (Sigma, St Louis, MO, USA).
- EDTA (Ethyl Diamine Tetra Acetate)
Tinh dịch có khả năng liên kết với các ion tự do như Ca++ và Mg++, dẫn đến sự giảm thiểu số lượng ion này, từ đó kìm hãm quá trình trao đổi chất của tinh trùng, đặc biệt là quá trình chuyển hóa đường Nhờ vậy, tinh trùng có thể giữ lại các hợp chất năng lượng cao như ADP và ATP, giúp duy trì lượng đường cần thiết trong suốt thời gian bảo tồn, ngay cả khi bảo quản ở nhiệt độ phòng.
Có khả năng kìm hãm sự hoạt động của một số vi khuẩn, enzyme có hại cho tinh trùng
Gelatine là một loại protein chiết xuất từ nguyên liệu động vật chứa collagen, chủ yếu từ da heo, bò, gia cầm và cá Với khả năng keo hóa mạnh mẽ, gelatine có thể tạo ra các ổ thạch giống tổ ong, hình thành một mạng lưới co giãn Nhờ vào đặc tính này, gelatine được sử dụng trong môi trường bảo quản tinh trùng, giúp giữ tinh trùng trong các ổ nhỏ, giảm khả năng vận động và phân chia acrosome, từ đó nâng cao số lượng tinh trùng sống sót.
Ngoài ra, gelatine chứa 18 acid amin, trong đó chứa đến 9 acid amin thiết yếu
Gelatine chứa 84% - 90% protein, 1% - 2% muối khoáng và phần còn lại là nước Nhờ vào các thành phần này, gelatine có khả năng cung cấp năng lượng và duy trì sự sống của tinh trùng trong môi trường bảo quản.
Cysteine là một acid amin không thiết yếu và kỵ nước, đóng vai trò quan trọng trong cấu trúc của nhiều protein trong cơ thể Mặc dù chỉ xuất hiện với số lượng nhỏ, cysteine vẫn góp mặt trong hầu hết các loại protein, thể hiện vai trò cần thiết của nó trong các chức năng sinh học.
Về mặt hóa học, cysteine là nhóm thiol có chứa gốc sulfur
Cysteine là một amino acid thiết yếu, đóng vai trò quan trọng trong việc tổng hợp protein và duy trì sức khỏe tế bào Nó không chỉ giúp hàn gắn tổn thương tế bào mà còn giảm thiểu tác động của quá trình lão hóa Ngoài ra, cysteine có khả năng chuyển hóa thành glucose, cung cấp nguồn năng lượng cần thiết cho cơ thể.
(www.vitamins-supplements.org/amino-acids/cysteine.php)
Chúng tôi đã quyết định sử dụng cysteine làm chất bổ sung trong môi trường bảo quản tinh trùng, với hy vọng rằng cysteine sẽ hoạt động như một chất nuôi dưỡng tế bào, giúp giảm thiểu tổn thương và cải thiện khả năng sống sót của tinh trùng.
LƯỢT DUYỆT CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ NGHIÊN CỨU
Theo Levis (1998) có thể bảo quản tinh heo từ 3 đến 7 ngày (tuỳ theo môi trường sử dụng), nhưng 3 ngày đầu cho hiệu quả sử dụng cao nhất
Công ty Kubus của Tây Ban Nha đưa ra quy trình sử dụng tinh dịch heo dựa theo tỷ lệ acrosome còn nguyên như sau:
Tỷ lệ tinh trùng còn nguyên acrosome (%) Số tinh trùng (tỷ)/liều
Hồ Thị Nga (1998) đã thực hiện một khảo sát về các yếu tố ảnh hưởng đến phẩm chất tinh dịch và mối tương quan giữa tình trạng acrosome của tinh trùng với tỷ lệ đậu thai trên đàn heo tại xí nghiệp heo giống cấp I Kết quả nghiên cứu cho thấy thể tích tinh dịch trung bình đạt 223 ml, cùng với hoạt lực tinh trùng đáng chú ý.
A = 0,77, nồng độ C = 395,09 triệu/ml, tỷ lệ tinh trùng sống là 87,97% tại xí nghiệp chăn nuôi heo giống cấp I
Lê Minh Tuấn (2004) đã tiến hành khảo sát khả năng tồn trữ tinh dịch heo trong các môi trường khác nhau, với điều kiện bảo quản trong ngăn mát của tủ lạnh Kết quả cho thấy thể tích tinh dịch trung bình đạt 0,86 ml, mật độ tinh trùng là 259 triệu/ml và tỷ lệ tinh trùng sống lên tới 93,52% tại trại heo 2/9.
QUY ĐỊNH CỦA BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN (1993) VỀ PHẨM CHẤT TINH DỊCH
(1993) VỀ PHẨM CHẤT TINH DỊCH
Nhiễm khuẩn < 5000 vi khuẩn/ml
NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH
THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM
3.1.1 Thời gian Đề tài được thực hiện từ 05/02/2007 đến 02/05/2007
Trại heo của Khoa Chăn Nuôi Thú Y, trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM.
ĐIỀU KIỆN TỰ NHIÊN
Khu đực giống được xây dựng riêng biệt cao ráo thoáng mát và sạch sẽ có cổng và hàng rào bảo vệ
Vật liệu xây dựng chuồng xi măng, mái tôn, kiểu chuồng 1 mái, được xây dựng
1 dãy chia thành nhiều ô, diện tích mỗi ô là 2,5 m x 5 m
Trắng toàn thân, mõm dài, đầu nhỏ, tai rũ xuống che 2 mắt, dài đòn, chân cao
Lông da màu trắng đen xen lẫn từng đám, tai thẳng đứng, đầu to vừa phải, mõm thẳng, bốn chân ngắn
Nọc được cho ăn thức ăn hỗn hợp dạng bột dùng cho heo đực giống cao sản mang thương hiệu ANCO
Bột đậu nành cao đạm, bột cá cao cấp, bắp, tấm, cám gạo, dầu cá, dicalci phosphate, L-lysine, DL-Met, L-Threo, premix vitamin, premix khoáng…
- Thành phần dinh dưỡng Đạm tối thiểu 17,5%
P tối thiểu 0,7% Độ ẩm tối đa 14%
Năng lượng trao đổi tối thiểu 3.250 Kcal/kg
3.2.3.2 Chăm sóc và vệ sinh thú y
Cho ăn ngày 2 lần trước giờ lấy tinh buổi sáng 5 giờ 30 và buổi chiều 13 giờ 30 mỗi lần 1,5 kg thức ăn
Không dùng kháng sinh, dược liệu, hormone và kháng hormone
Buổi sáng, dọn phân sạch sẽ trước khi cho ăn Buổi chiều, trước khi cho heo ăn phải tắm heo sạch sẽ
Để ngăn ngừa vi trùng gây bệnh phát triển kháng thuốc, việc thay đổi thuốc sát trùng là rất cần thiết Các loại thuốc sát trùng thường được sử dụng bao gồm Bestaquam 0,4%, biocid 0,1% và TH4 0,5%, và nên được phun xịt định kỳ mỗi tháng một lần.
Tiêm phòng bệnh dịch tả, bệnh giả dại, bệnh lở mồm long móng, thương hàn Mỗi loại vaccine tiêm cách nhau một tuần lễ (6 tháng chủng ngừa trở lại).
VẬT LIỆU VÀ DỤNG CỤ THÍ NGHIỆM
Tinh dịch được thu thập từ giống đực Landrace và Pietrain tại Trại thực nghiệm thuộc Trung tâm Nghiên cứu và Chuyển giao Công nghệ của Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM.
- Máy đo nồng độ tinh trùng
- Thermo plate (máy làm ấm tinh lên 37 0 C)
- Cốc thủy tinh chia vạch thể tích
Hóa chất sử dụng trong phần I
Hóa chất sử dụng trong phần II
BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM
Bảng 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm (mẫu)
Thời điểm khảo sát (giờ) Môi trường
Kn: Ống tinh theo môi trường Kiev kiểm tra ở mỗi thời điểm
Bn: Ống tinh theo môi trường BTS kiểm tra ở mỗi thời điểm
Mn: Ống tinh theo môi trường Modena kiểm tra ở mỗi thời điểm
Sau khi thu thập tinh dịch, tinh được chuyển ngay về trại heo của khoa trong vòng 5 phút để kiểm tra chất lượng Để đạt được nồng độ 30 triệu tinh trùng/ml, tinh dịch sẽ được pha loãng bằng các loại môi trường phù hợp, đồng thời cần tránh các tác động từ sóng lắc và ánh sáng.
PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM
Điều chỉnh ngăn mát tủ lạnh đạt nhiệt độ bảo quản 15 o C một tuần trước khi tiến hành tồn trữ tinh và hằng ngày có kiểm tra bằng nhiệt kế
Cân hoá chất các môi trường phần I theo bảng 3.2
Bảng 3.2 Công thức hoá chất của các môi trường
Hoá chất (g) KIEV BTS MODENA
- Cân hoá chất của các môi trường phần II
Môi trường 1 là môi trường tốt nhất ở phần I
Môi trường 2 là môi trường tốt nhất ở phần I bổ sung thêm gelatine 300
Môi trường 3 là môi trường tốt nhất ở phần I bổ sung thêm gelatine 300 và cysteine
Cho hóa chất vào 3 cốc thủy tinh (tương ứng với 3 môi trường) có chia vạch
Đổ nước cất vào ba cốc có sẵn môi trường đến vạch 100 ml và ngừng lại Tiến hành khuấy đều hóa chất với nước cất cho đến khi hóa chất hoàn toàn tan trong môi trường.
Nâng nhiệt độ môi trường pha loãng tương ứng với nhiệt độ tinh dịch
Cho môi trường pha loãng chảy từ từ vào tinh dịch để tránh bị sốc cho tinh trùng
Pha loãng tinh dịch sao cho 30 triệu tinh trùng có khả năng thụ thai/ml (3*10 9 tinh trùng/100ml)
Làm lạnh tinh dịch đã pha xuống còn 15-18 0 C
3.5.2.1 Kiểm tra bằng mắt thường
Lượng tinh dịch thu được sau mỗi lần xuất tinh, sau khi đã loại bỏ keo phèn, được đo bằng mililit (ml) Để xác định dung lượng chính xác, cần sử dụng cốc thủy tinh có chia vạch thể tích.
Dung lượng tùy thuộc vào loài, giống, dinh dưỡng, chăm sóc, thời gian, tần số lấy tinh, kỹ thuật lấy tinh, tuổi tác
Màu sắc của tinh dịch có thể được phân loại thành ba loại: màu trắng đục (tinh đặc), màu trắng sữa (tinh vừa) và màu trắng trong (tinh thưa) Nếu tinh dịch có màu sắc khác như xanh, đỏ hoặc vàng, điều này có thể cho thấy sự bất thường, có thể do lẫn máu hoặc mủ.
Có mùi hăng tanh như mùi lòng trắng trứng
3.5.2.2 Kiểm tra bằng kính hiển vi
Chấm một giọt tinh nguyên lên lame và xem dưới kính hiển vi với độ phóng đại
100 và 400 lần để đánh giá
Hoạt lực là khả năng vận động của tinh trùng Có 3 loại vận động:
Vận động tiến thẳng của tinh trùng thể hiện qua việc chúng di chuyển nhanh chóng theo nhiều hướng khác nhau, tạo thành những cuộn sóng Đôi khi, một số tinh trùng có thể di chuyển theo vòng tròn với đường kính lớn hơn chiều dài của chính chúng.
Vận động vòng quanh là tinh trùng chuyển động vòng tròn đường kính nhỏ hơn chiều dài của nó
Vận động lắc lư là tinh trùng không vận động chỉ đứng lắc lư tại chổ
Là số lượng tinh trùng trong 1ml tinh dịch Ta dùng máy đếm tinh để kiểm tra nồng độ
- Dựa vào nồng độ và hoạt lực của tinh trùng, ta tiến hành pha loãng tinh dịch với môi trường tương ứng
- Rót tinh nguyên từ từ vào 3 cốc thủy tinh đã được hấp khử trùng Lượng tinh cho vào cốc được tính theo công thức sau:
Với Q : Tỷ lệ pha chế
C’: Nồng độ 1 liều (tỷ tinh trùng)
C : Nồng độ tinh trùng trong 1ml dung dịch (tỷ tinh trùng)
Tinh được pha chế trong mỗi loại môi trường được chia thành 10 lọ ở phần I và 10-20 lọ ở phần II Sau đó, các lọ này được cho vào hộp giấy có nắp đậy và đặt trong ngăn mát của tủ lạnh.
3.5.4 Kiểm tra tinh dịch trong thời gian bảo quản
- Thời gian kiểm tra (tính từ lúc pha tinh) là 0 giờ, 8 giờ, 24 giờ, 32 giờ, 48 giờ,… n giờ
- Khi kiểm tra chỉ lấy 1 lọ của mỗi môi trường, hâm nóng lên 37 0 C để kiểm tra
- Kiểm tra đến khi A = 50% thì ngưng
3.5.5 Các chỉ tiêu khảo sát
Thời gian bảo quản (tính từ khi pha chế).
PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ THỐNG KÊ
Các chỉ tiêu được xử lý trên phần mềm Microsoft Excel 2003 và Minitab 13 for Windows.
KẾT QUẢ THẢO LUẬN
SO SÁNH CÁC CHỈ TIÊU PHẨM CHẤT TINH DỊCH
Bảng 4.1 Số liệu các chỉ tiêu phẩm chất tinh dịch
Dung lượng V (ml/lần xuất tinh)
Nồng độ C (triệu tt/ml)
Bảng 4.2 Phẩm chất tinh dịch của các đực giống (10 9 tt/lần lấy) Đực giống
Biểu đồ 4.1 Phẩm chất tinh dịch của các đực giống
Dung lượng tinh dịch chúng tôi kiểm tra được thấp hơn trong nghiên cứu của
Hồ Thị Nga (1998), Trần Thanh Phong (2003)
Hoạt lực tinh trùng trung bình là cao hơn kết quả Hồ Thị Nga (1998) và thấp hơn Trần Thanh Phong (2003)
Nồng độ tinh dịch trung bình là thấp hơn trong nghiên cứu của Hồ Thị Nga
VAC (tỷ tt/lần lấy) Đực giống
Theo quy định của Bộ Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn, các tiêu chí về chất lượng tinh dịch được nêu trong bảng 4.1 đáp ứng yêu cầu tốt cho việc sử dụng trong thụ tinh nhân tạo.
- Qua xử lý Minitab (bảng 4.2):
Tích VAC trung bình của đực giống Pi 2378 (28,81±7,46 tỷ tt/lần lấy) > L 2225 (27,10±8,16 tỷ tt/lần lấy) > Pi 2378 (22,07±6,00 tỷ tt/lần lấy)
Mức biến động VAC trung bình của đực giống L 2225 (CV0,11%) > Pi 62892 (CV',19%) > Pi 2378 (CV%,89%)
Sự khác biệt về VAC trung bình giữa các đực giống là không có ý nghĩa (P>0,05).
THỜI GIAN BẢO QUẢN CỦA CÁC MÔI TRƯỜNG KIEV, BTS, MODENA TRÊN TINH DỊCH HEO
4.2.1 Thời gian bảo quản riêng của các môi trường Kiev, BTS, Modena trên cùng đực giống
Bảng 4.3 Bảng số liệu thí nghiệm trên đực giống Pi 62892
Các lần lặp lại KIEV BTS MODENA
Bảng 4.4 Thời gian bảo quản tinh dịch đực Pi 62892 của các môi trường (giờ)
Chỉ tiêu KIEV BTS MODENA n 6 6 6
Biểu đồ 4.2 Thời gian bảo quản của các môi trường trên đực Pi 62892
Qua bảng 4.3 và xử lý Minitab bảng 4.4, cho thấy:
Trên đực Pi 62892, mức biến động thời gian bảo quản của môi trường BTS (CV$,49%) > Kiev (CV ,55%) > Modena (CV,12%)
Thời gian bảo quản tinh dịch của môi trường MODENA (74,67 giờ) > KIEV (57,33 giờ) > BTS (53,33 giờ) và sự khác biệt giữa các môi trường này là có ý nghĩa (P BTS (CV=9,12%) > Modena (CV=5,97%)
Thời gian bảo quản tinh dịch của môi trường Modena (77,33 giờ) > KIEV (58,67 giờ) > BTS (50,67 giờ) và sự khác biệt giữa các môi trường này là có ý nghĩa (P Kiev (CV,88%) > Modena (CV=7,45%)
Thời gian bảo quản tinh dịch của môi trường Modena (76 giờ) > Kiev (52 giờ) > BTS (44 giờ) và sự khác biệt giữa các môi trường này không có ý nghĩa (P>0,05)
Môi trường Thời gian bảo quản (giờ)
4.2.2 Thời gian bảo quản chung của các môi trường Kiev, BTS, Modena trên các đực giống
Bảng 4.9 Bảng số liệu thí nghiệm chung trên các đực giống
Các lần lặp lại KIEV BTS MODENA
Thời gian bảo quản (giờ)
Bảng 4.10 Thời gian bảo quản tinh dịch chung của các đực giống trên các môi trường (giờ)
Chỉ tiêu KIEV BTS MODENA n 11 11 11
Biểu đồ 4.5 Thời gian bảo quản chung của các môi trường trên các đực giống
Qua bảng 4.9 và xử lý Minitab bảng 4.10, cho thấy:
Mức biến động thời gian bảo quản của môi trường BTS (CV",53%) > Kiev (CV,33%) > Modena (CV,94%)
Thời gian bảo quản tinh dịch của môi trường MODENA (75,64 giờ) > KIEV (56,73 giờ) > BTS (50,91 giờ) và sự khác biệt giữa các môi trường này rất có ý nghĩa (P M (CV ,05%) > M+G300 (CV=9,42%)
Nghiên cứu cho thấy thời gian bảo quản tinh dịch trong môi trường Modena+gelatine 300 đạt 104 giờ, vượt trội hơn so với Modena+gelatine 300+cysteine với 68,80 giờ và Modena với 65,60 giờ Sự khác biệt giữa các môi trường này có ý nghĩa thống kê (P M+G300 (CV",43%) > M (CV=0%)
Thời gian bảo quản tinh dịch trong môi trường Modena+gelatine 300 đạt 114,67 giờ, vượt trội hơn so với Modena (80 giờ) và Modena+gelatine 300+cysteine (66,67 giờ) Tuy nhiên, sự khác biệt giữa các môi trường này không có ý nghĩa thống kê (P>0,05).
Môi trường Thời gian bảo quản (giờ)
Bảng 4.15 Bảng số liệu thí nghiệm trên đực Pi 2378
Thời gian bảo quản (giờ) 2 72 120 48
Bảng 4.16 Thời gian bảo quản của các môi trường trên đực Pi 2378 (giờ)
Biểu đồ 4.8 Thời gian bảo quản của các môi trường trên đực Pi 2378
Môi trường Thời gian bảo quản (giờ)
Qua bảng 4.15 và xử lý Minitab bảng 4.16, cho thấy:
Trên đực Pi 2378, mức biến động thời gian bảo quản của môi trường M+G300+C (CV(,28%) > M+G300 (CV,71%) > M (CV=7,45%)
Thời gian bảo quản tinh dịch trong môi trường Modena+gelatine 300 đạt 108 giờ, vượt trội hơn so với Modena với 76 giờ, và Modena+gelatine 300+cysteine chỉ đạt 40 giờ Sự khác biệt về thời gian bảo quản giữa các môi trường này có ý nghĩa thống kê (P
Thời gian bảo quản tinh dịch trong môi trường Modena+gelatine 300 đạt 108 giờ, vượt trội hơn so với Modena (72 giờ) và Modena+gelatine 300+cysteine (62,4 giờ) Sự khác biệt giữa các môi trường này là rất đáng kể với P
