Nghiên cứu ảnh hưởng của gia nhiệt trong quá trình uốn thép tấm để chế tạo một số chi tiết tàu thủy253

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LÊ THANH HẢI HÀ PH¸T TRIĨN SINH KhốI Virus NHÂN ĐA DIệN (NPV) TRÊN Tế BàO SÂU KHOANG PHụC Vụ SảN XUấT THUốC TRừ SÂU SINH HọC LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC HÀ NỘI - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LÊ THANH HẢI HÀ PH¸T TRIểN SINH KhốI VIrus NHÂN ĐA DIệN (NPV) TRÊN Tế BàO SÂU KHOANG PHụC Vụ SảN XUấT THUốC TRừ SÂU SINH HäC Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Hồng Đình Hồ PGS.TS Lê Văn Trịnh Hà Nội - 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu nêu luận án trung thực, không trùng lặp với đề tài luận án khác chưa tác giả khác công bố Hà Nội, ngày tháng Tác giả i năm 2020 LỜI CẢM ƠN Qua thời gian nỗ lực học tập nghiên cứu, tới tơi hồn thành luận án tiến sĩ: “Phát triển sinh khối vi rút nhân đa diện (NPV) tế bào sâu khoang phục vụ sản xuất thuốc trừ sâu sinh học” Trong suốt trình học tập nghiên cứu, nhận dạy bảo tận tình thầy cơ, đồng thời nhận giúp đỡ động viên đồng nghiệp, gia đình bạn bè Tơi xin chân thành cảm ơn Phòng Đào tạo, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Viện Đại học Mở Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập, nghiên cứu đề tài luận án Đặc biệt tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy GS.TS Hồng Đình Hồ PGS.TS Lê Văn Trịnh tận tâm truyền đạt kiến thức cho tơi lịng say mê nghiên cứu khoa học Tôi xin chân thành cảm ơn chị em anh đồng nghiệp Trung tâm Đấu tranh Sinh học – Viện Bảo vệ thực vật, đồng nghiệp nơi công tác bạn bè động viên giúp đỡ tơi hồn thành đề tài luận án tốt nghiệp Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu nặng tới người thân gia đình động viên, giúp đỡ tơi vật chất lẫn tinh thần trình học tập Hà Nội, ngày tháng Tác giả ii năm 2020 MỤC LỤC Diễn giải Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH x MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu Mục đích, yêu cầu cần đạt đề tài 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn Đối tượng phạm vi nghiên cứu Những đóng góp luận án CHƯƠNG CƠ SỞ KHOA HỌC VÀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Cơ sở khoa học đề tài nghiên cứu 1.2 Tổng quan tài liệu 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước ngồi 1.2.1.1 Nghiên cứu sâu khoang hại trồng 1.2.1.2 Nghiên cứu NPV sâu hại 1.2.1.3 Nghiên cứu phát triển sinh khối tế bào côn trùng 12 1.2.1.4 Nghiên cứu điều kiện phát triển sinh khối tế bào côn trùng 18 1.2.1.5 Nghiên cứu lây nhiễm NPV tế bào nhân nuôi 28 1.2.1.6 Nghiên cứu tinh thể vùi tạo dạng sử dụng chế phẩm NPV 32 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 35 1.2.2.1 Nghiên cứu sâu khoang hại trồng 35 1.2.2.2 Nghiên cứu NPV sâu hại 36 1.2.2.3 Nghiên cứu nuôi nhân tế bào côn trùng 37 1.2.2.4 Nghiên cứu phát triển sinh khối NPV 38 1.2.2.5 Nghiên cứu tạo dạng sử dụng chế phẩm NPV phòng trừ sâu hại 41 iii CHƯƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu, hoá chất dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 43 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 43 2.1.2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 43 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 44 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 44 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 44 2.3 Nội dung nghiên cứu 44 2.4 Phương pháp nghiên cứu 44 2.4.1 Điều tra, đánh giá thu thập, tuyển chọn NPV sâu khoang 44 2.4.2 Nghiên cứu điều kiện thích hợp phát triển sinh khối tế bào sâu khoang lây nhiễm NPV tế bào nuôi nhân 49 2.4.2 Nghiên cứu điều kiện thích hợp để nhân sinh khối tế bào sâu khoang 50 2.4.2.2 Nghiên cứu lây nhiễm NPV sâu khoang tế bào nhân nuôi 55 2.4.3 Nghiên cứu tinh thể vùi tạo chế phẩm NPV dạng bột thấm nước 61 2.4.3.1 Nghiên cứu tinh thể vùi NPV sau lây nhiễm tế bào 61 2.4.3.2 Nghiên cứu phát triển chế phẩm NPV dạng bột thấm nước 62 2.4.3.3 Đánh giá hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm tạo 62 2.4.4 Phương pháp tính tốn, xử lý số liệu 66 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Điều tra, đánh gi thu th ập, tuyển chọn virus nhân đa diện (NPV) sâu khoang 67 3.1.1 Mức độ phổ biến khả gây chết sâu khoang virus nhân đa diện (NPV) đồng ruộng 67 3.1.2 Phân lập, tuyển chọn chủng NPV có hoạt lực cao 71 3.2 Nghiên cứu phát triển sinh khối tế bào sâu khoang lây nhiễm NPV tế bào nhân nuôi 78 3.2.1 Nghiên cứu phát triển sinh khối tế bào sâu khoang 79 3.2.1.1 Nghiên cứu điều kiện thích hợp phát triển sinh khối tế bào sâu khoang 79 3.2.1.2 Phát triển sinh khối tế bào sâu khoang qui mơ phịng thí nghiệm 89 iv 3.2.2 Nghiên cứu phát triển sinh khối NPV sâu khoang tế bào nuôi nhân 93 3.2.2.1 Xác định điều kiện thích hợp cho lây nhiễm virus nhân đa diện ( NPV) 94 3.2.2.2 Mức độ phát triển sinh khối tế bào hình thành thể vùi trình lây nhiễm virus nhân đa diện (NPV) 103 3.2.2.3 Mức độ gây chết sâu khoang hình thành thể vùi NPV nhân tế bào sâu 105 3.2.2.4 Hiệu lực trừ sâu khoang chủng virus TL.1a nhân tế bào 108 3.3 Nghiên c ứu tinh s ạch th ể vùi NPV sâu khoang tạ o chế phẩm ng bột thấm nước 110 3.3.1 Tinh thể vùi NPV sâu khoang 110 3.3.2 Thử nghiệm tạo chế phẩm NPV sâu khoang dạng bột thấm nước 115 3.3.3 Đánh giá hiệu lưc phòng trừ sâu khoang chế phẩm tạo 118 3.3.3.1 Đánh giá hiệu lưc phòng trừ sâu khoang điều kiện phịng thí nghiệm 118 3.3.3.2 Đánh giá hiệu lưc phịng trừ sâu khoang bắp cải ngồi nhà lưới 119 3.3.3.3 Đánh giá hiệu lưc phòng trừ sâu khoang đồng ruộng 121 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 128 Đề nghị 129 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 130 TÀI LIỆU THAM KHẢO 131 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, Diễn giải chữ viết tắt ADN Axit Deroxyribo Nucleic CT Công thức CV Coefficient of Variation (Hệ số biến động) FBS Fetal Bovin Serum (Huyết thanh) et al Những người khác LSD Mức sai khác có ý nghĩa MOI Multiplicity of Infection (Chỉ số lây nhiễm) cs Cộng NSNN Ngày sau nuôi nhân NSLN Ngày sau lây nhiễm NPV Nuclear Polyhedrosis Virus (Virus nhân đa diện) OB Occlusion Bodies (Thể vùi) PBS Photphatse Buffer Saline PIB Polyhedral shaped inclusion Bodies (Thể vùi nhân đa diện) QCVN Qui chuẩn Việt Nam QG.NPV Quĩ gen virus nhân đa diện TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam SDS Sodium Dodecyl Sulfate TB Trung bình vi DANH MỤC BẢNG Diễn giải Trang Bảng 3.1 Mật độ sâu khoang phát sinh tỷ lệ sâu chết NPV trồng đồng ruộng (2014- 2015) 69 Bảng 3.2 Mức độ phổ biến NPV ký sinh sâu khoang trồng đồng ruộng (2014- 2105) 70 Bảng 3.3 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang ngày sau lây nhiễm chủng NPV sau phân lập lần 73 Bảng 3.4 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang sau ngày lây nhiễm chủng NPV sau phân lập lần 75 Bảng 3.5 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang sau ngày lây nhiễm chủng NPV điển hình sau phân lập lần thứ 76 Bảng 3.6 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang sau ngày lây nhiễm chủng NPV lựa chọn 77 Bảng 3.7 Mật độ tế bào sâu khoang ngày sau nuôi nhân môi trường khác 80 Bảng 3.8 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân mức nhiệt độ khác 82 Bảng 3.9 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân mức pH môi trường khác 84 Bảng 3.10 Mật độ tế bào sâu khoang ni nhân mơi trường có bổ sung huyết FBS với tỷ lệ khác 86 Bảng 3.11 Mật độ tế bào sâu khoang ni nhân in vitro điều kiện thích hợp 87 Bảng 3.12 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân theo phương pháp tĩnh lắc bình lọc khuẩn 250ml 90 Bảng 3.13 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân với lượng 750ml môi trường bình lọc khuẩn 1000ml theo phương pháp tĩnh lắc 92 Bảng 3.14 S ố lượng thể vùi hình thành nhi ễm NPV tế bào có mật độ khác 95 vii Bảng 3.15 Số lượng thể vùi hình thành nhiễm NPV tế bào theo số MOI khác 96 Bảng 3.16 Số lượng thể vùi hình thành sau thời gian ủ lây nhiễm NPV khác 98 Bảng 3.17 Số lượng thể vùi hình thành lây nhiễm NPV tế bào sâu khoang với loại môi trường khác 99 Bảng 3.18 Số lượng thể vùi hình thành lây nhiễm NPV tế bào sâu khoang nhiệt độ khác 100 Bảng 3.19 Số lượng thể vùi hình thành lây nhiễm NPV tế bào sâu khoang mức pH môi trường khác 102 Bảng 3.20 Mật độ tế bào sâu khoang số thể vùi hình thành sau ngày lây nhiễm NPV theo số MOI khác 105 Bảng 3.21 Hiệu lực trừ sâu khoang nguồn NPV tạo từ lây nhiễm tế bào sâu khoang 106 Bảng 3.22 Số lượng thể vùi hình thành từ nguồn NPV tạo từ lây nhiễm tế bào sâu khoang 107 Bảng 3.23 Hiệu lực trừ sâu khoang chủng NPV nhân sinh khối tế bào sâu khoang 109 Bảng 3.24 Số lượng thể vùi sâu khoang tỷ lệ thu hồi sau tinh theo phương pháp khác 112 Bảng 3.25 Các chủng NPV sâu khoang sử dụng phân tích phả hệ 114 Bảng 3.26 Thành phần phụ gia, chất lượng liều lượng sử dụng chế phẩm NPV dạng bột thấm nước 117 Bảng 3.27 Hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm NPV sau ngày phun điều kiện phịng thí nghiệm 119 Bảng 3.28 Hiệu lực phòng trừ sâu khoang bắp cải sau ngày phun chế phẩm NPV điều kiện nhà lưới 119 Bảng 3.29 Số lượng thể vùi hình thành sâu khoang bắp cải sau sau ngày phun sử dụng chế phẩm NPV nhà lưới 120 Bảng 3.30 Hiệu lực trừ sâu khoang chế phẩm NPV-1 WP bắp cải đồng ruộng Vân Nội (Hà Nội) 122 viii 55 Segura Nidya A, Felio Bello J (2012) Establishment and characterisation of a new cell line derived from Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Vol 107(1): 89-95 56 Lynn D E., C Goodman, G Caputo (2005) Technique for the development of new insect cell lines Report in In vitro biology annual meeting 2005 Society for in Vitro Biology Murhammer Press Totowa New York 57 Toprak U and Gurkan M O (2004) First record of a NPV isolation from Spodoptera litoralis (Boisd) (Lepidoptera: Noctuidae) in Turkey and its molecular identification according to the partial lef-8 gene Turkis Journal of Biology No 28 71- 77 58 Knudson D L and Tinsley T W (1974) Replication of a nuclear polyhedrosis virus in a continous cell culture of Spodoptera frugiperda: Purification, assay of infectivity and growth cheracterristics of the virus Journal of virology No Volum 14 934- 944 59 Petchprakob P., Mekvichitsaeng P., Akeprathumchai S., Dechmahikl W and Poomputsa K (2007) Improvement of Baculovirus NPV production from cell in Bioreactor for use as insecticides Agricultural Scientific Journal No 38(6) 7982 60 McAteer J., Davis J (1994) Basic cell culture technique and the maintenance of cell lines Basic Cell Culture - A Practical Approach Editor: Davis Oxford University Press Inc., New York Pg 93- 148 61 Mishuhashi J (1995) A continuous cell line from pupal ovaries of theo common cutworm Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae) Applied entomology and zoology 30(1) 75-82 62 Mishuhashi J and Goodwin A (1976) Primary cultures of the cells from ovaries of the Cabbage Armyworm, Mamestra brassicae L (Lepidoptera: Noctuidae) Journal of Development, Growth and Differentiation Volume 18 No Page 163- 166 137 63 Agathos S.N (1994) Large scale insect cell production Book: Inscet Cell Biotechnology by Editors: Maramorosch K and Mclntosh CRC Press, Tokyo 89- 103 64 Demir I., Gorel N., Naloacioglu R., Demirbag Z (2009) Comparative susceptibilities of six insect cell lines to infection by Malacosoma neustria nucleopolyhedrovirus (ManeNPV) Turkey Journal of Biology No 33 (2009), Page 259-273 65 Felio J.B G., Jorge B., Gloria R., Alberto M and Olano V.A (1995) Initiation of primary cell culture from embryos of the mosquitoes Anopheles albimanus and Aedestaeniorhynchus (Diptera: Culicidae) Journal ff Mem Institute of Oswaldo Cruz Rio de Janeiro Volume 90 No Page 547- 551 66 Yeh S.C., Lee S T., Wu C.Y, Wang C.H (2007) A cell line (NTU- MV) established from Maruca vitrata (Lepidoptera: Pyralidae): Characterrization, viral susceptibility and polyhedra production Journal of Invertebrate Pathology No 96 (2007) 138- 146 67 Lynn D.E and Shapiro M (1998) New cell lines from Heliothis virescens: Characterization and susceptibility to baculoviruses Journal of Invertebrate Pathogology No 72 Page 276- 280 68 Trang T.T.K, Chaudhari S and Gautam R.D (2003) A note on the spread of nuclear polyhedrosis virus through Cotesia (Apanteles) angaleti Muesbeck (Hymenoptera: Braconidae) Omonrice No.11 151- 152 (2003) 69 Jakubowska A., Ferre J., Herrero S (2009) Enhancing the multiplication of nucleopolyhedrosis virus in vitro by manipulation of the pH Journal of Viological methods No 161(2009) 254- 258 70 Rey G.J., Ferro C., Bello F.J (2000) Establishment and characterization of new continuous cell line from Lutzomya longipalpis (Diptera: Psychodidae) and its susceptibility to infections with Arboviruses and Leishmania chagasi Inst of Oswaldo, Colombia Vol.95 (1) 103-110 71 Petcharawan O.; Mongkopoch K and Belloncik S (2006) Establishment of cell line devived from embryonic tissue of the Diamondback Moth, Plutella 138 xylostella (L.) KMITL Science Technological Journal Vol.6 No Dec 2006 56- 66 72 Phan Kim Ngọc Phạm Văn Phúc (2010) Công nghệ sinh học người động vật NXB Giáo dục Việt nam 895 trang 73 Maeda S., Mukohara Y and Kondo A (1990) Characteristically distinct isolates of the nuclear polyhedrosis virus from Spodoptera litura Journal of General Virology (1990) No 71 2631- 2639 74 Mclntosh A.h., Grasela J.J., Kariuki C.W., Goodman C.L., Brennan L.A and Dierks P.M (2003) Evaluation of recombinant diamondback moth baculvirus in selected Lepidopteran cell lines and larvae Journal of Insect Biochemistry and Molecular Biology Vol 33 (2003) 927- 931 75 Popham H J.R., Grasela J.J., Goodman C L and Mclntosh A.H (2010) Baculovirus infection influences host protein expression in two established insect cell lines Journal of Insect Physiology No.56 (2010) 1237- 1245 76 Woo S D., Jong Y R., Choi J Y and Jin B R (2007) Propagation of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus in nonpermissive insect cell lines The journal of microbiology April 2007 Page 133- 138 77 Lery X., Zeddam J L., Giannotti J., Fedriere G and Ela S.A (1995) Establishment of a cell line derived from embryos of the potato tuber moth Phthorimaea opercurella (Zeller) Journal of In Vitro Cell Development and Biology of Animal No 31 836-839 78 Vaughn J.L., Goodwin R.H and others (1977) The establishment of two cell lines from the insect Spodoptera frugiperda (Lepidoptera; Noctuidae) Vitro Journal Vol 13, No 213- 219 79 Kanokwan P., Kathariya P., Phenjun M and Uthai K (2003) Pilot scale production of baculovirus using insect cell culture for biopesticides Proceeding of The 13th annual meeting of the Thai society for biotechnology 2003 Page 148- 155 139 80 Maiorella B., Inlow D., Shauger A and Harano D (1988) Large scale insect cell culture for recombinant protein production Biotechnology Journal No (1988) 1406-1410 81 Miranda E.A., Murcia G.D and Murcia M.D (1997) Large- scale production and purification of recombinant protein from an insect cell/ baculovirus system in Erlenmeyer flasks: application to the chiken poly (ADP- ribose) polymerase catalytic domain Barzillian Jounal of Medical and Biological Research No.30 (1997) 923- 928 82 Cynthia B.E., Barbara J and Kamine K (2007) Recombinant protein production in large- scale agitated bioreactor using the Baculovirus expression vector system In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 224245 83 Tipvadee A., Sudawan C., Suvalux C., Supat A and Pissawan C (1988) Characterization of the nuclear polyhedrosis virus of the Cotton Bollworm, Heliothis armigera Kaseart Jounal (Natural Science) Vol 22 No 14- 23 84 Zitzmann J., Sprick G., Weidner T., Schreiber C and Peter C (2017) Process optimization for recombinant protein expression in insect cells The Hessen State Ministry of Higher Education 110 pages 85 Lynn D.E (2003) Comparative susceptibilities of twenlve insect cell lines to infection by three Baculovirus Journal of Invertebrate Pathogology No 82 129- 131 86 Barbara J K., Linda A.K and Robert D.P (2007) Introduction to baculovirus molecular biology In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second Ed., Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 25- 54 87 Bryony C.B and Nusawadany T (2007) Introduction to the use of Baculoviruses as biological insecticides In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey Page 359- 366 140 88 King L.A., Hitchman R., and Posee R.D (2007) Recombinant baculovirus isolation In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 76- 93 89 Kanokwan P., Kathariya P., Phenjun M and Uthai K (2004) Pilot scale production of baculovirus using insect cell culture for biopesticides Proceeding of The 13th annual meeting of the Thai society for biotechnology 2003 148155 90 Shapiro M and Shepard B.M., (2008) Evaluation of clays and fluorescent brightener upon the activities of the Gypsy Moth (Lepidoptera: Lymantriidae) nuleopolyhedrovirus Jounal of agricultural uban entomology 24(4) 165- 175 91 Patricia T G., McGuire R., Behle R W., Shasha B S and Pingel R L (2002) Storage stability of Anagrapha falcifera nucleopolyhedrovirus in spray- dried formulations Journal of Invertebrate Pathology Vol 79 Page 7- 16 92 Mushobozi W., Grzywacz D., Moscardi F and Wilson K (2004) The African Armyworm Spodoptera exempta nucleopolyhedrovirus (NPV) production and application manual Project Report Natural Resources Institute United Kingdom 116 pps 93 Goulson D.; Martinez A M.; Hughes W O H and Williams T (2000) Effects of optical brighteners used in biopesticide formulations on the behavior of pollinators Journal of Biological Control No 19 232- 236 94 Cisneros J., Perez J A., Penagos D I., Ruiz J V Cabellero P Cave R D and Williams T (2002) Formulation of a nucleopolyhedrosis with Boric acid for control of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) in maize J of Biological Control Vol 23 87- 95 95 Javier G O., Sudawan C Barbara L.C., Motoko I And Michihiro K (2008) Susceptibility of the cell line Hv-AM1 from Heliothis virescens to eight selected Nucleopolyhedroviruses Journal of insect biotechnology and Sericology No 77 Page 141- 150 96 Inst of Zoology, Chinese Academy of Sciences 2006 Introduction of biopesticides products based biotechnological application 12 pgs 141 97 Cục BVTV, Viện BVTV, Trường ĐH Tổng hợp Hà Nội (1995) Báo cáo khoa học cải tiến công tác BVTV Việt Nam (VNM-8910-030) giai đoạn 19901995 NXB Nông nghiệp 154 trang 98 Viện Bảo vệ thực vật (2006) Nghiên cứu chế phẩm sinh học đa chức công nghệ sinh học Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp Nhà nước KC.04-12 (2001- 2005) 119 trang 99 Nguyễn Duy Nhất (1970) Đặc tính sinh vật học, qui luật phát sinh yếu tố ảnh hưởng đến mật độ sâu khoang đồng ruộng vùng Hà Nội Tạp chí KHKT Nơng nghiệp Số 6, 1970 674- 679 100 Lê Văn Trịnh (1996) Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái số sâu hại rau họ Thập tự vùng đồng sơng Hồng biện pháp phịng trừ Luận án Tiến sỹ 181 trang 101 Nguyễn Văn Cảm, Hoàng Thị Việt; Nguyễn Văn Hoa Lương Thanh Cù; Trần Quang Tấn; Nguyễn Đậu Toàn Huỳnh Thị Huệ (1996b) Bệnh thối nhũn sâu đo xanh (Anomis falava Fabr.) khả sử dụng chúng việc phòng trừ sâu đo xanh hại đay Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 19901995 NXB Nông nghiệp, Hà Nội Trang 173- 181 102 Hoàng Thị Việt, Nguyễn Văn Cảm et al (2002) Một số kết nghiên cứu NPV (Nuclear Polyhedrosis Virus) khả sử dụng phòng trừ sâu hại trồng Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 2000- 2002 NXB Nông nghiệp, Hà Nội, Trang 113- 130 103 Trịnh Thị Xuân, Trương Thanh Xuân Liên, Dương Thị Thu Nhi Trần Văn Hai (2016) Tiềm vi rút SeNPV (Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus) sâu keo da láng Spodoptera exigua Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) đồng sơng Cửu Long Tạp chí Bảo vệ thực vật Số 5/2016 19- 26 104 Trần Văn Hai, Trần Thị Xuân, Nguyễn Thị Minh Hạnh, Trần Thị Ánh Tuyết CTV (2010) So sánh dòng Nucleopolyhedrosis Virus đồng sông Cửu Long phương pháp PCR tiềm phòng trừ sâu ăn 142 tạp (Spodoptera litura Fabr.) Báo cáo Hội nghị khoa học cơng nghệ tồn quốc BVTV lần thứ Trang 481- 487 105 Lê Văn Trịnh, Lê Thanh Hải Hà (2011) Tạo dòng tế bào sâu khoang Spodoptera litura từ mơ phơi mơ mỡ Tạp chí Bảo vệ thực vật Số 17- 20 106 Nguyễn Thị Hai (2005) Sử dụng virus Nucleopolyhedrosis phòng trừ sâu keo da láng (Spodoptera exigua) hại trồng Báo cáo Hội nghị: Các biện pháp sinh học phòng chống sâu bệnh hại trồng nông nghiệp NXB Nông nghiệp Trang 175- 181 107 Trương Thanh Giản; Lê Văn Thuyết; Trần Quang Tấn; Nguyễn Đậu Toàn CTV (1996) Bước đầu nghiên cứu sử dụng NPV sâu róm thơng (Dendrolimus punctatus Walker) rừng thơng Thanh Hóa Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 90- 95 NXB Nông nghiệp, Hà Nội Trang 173181 108 Viện Bảo vệ thực vật (1997) Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật- Phương pháp điều tra dịch hại nông nghiệp thiên địch chúng Tập NXB Nông nghiệp, Hà Nội 99 trang 109 Viện Bảo vệ thực vật (2000) Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật- Phương pháp điều tra, đánh giá sâu, bệnh, cỏ dại, chuột hại trồng cạn Tập III NXB Nông nghiệp, Hà Nội 80 trang 110 Bộ Nông nghiệp PTNT (2018) Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 12561:2018 Khảo nghiệm hiệu lực thuốc bảo vệ thực vật 111 Viện Bảo vệ thực vật (1976) Kết điều tra côn trùng 1967- 1968 NXB Nông thôn, Hà Nội 415 trang 112 Khattab M (2013) Isolation of Nucleopolyhedrovirus (NPV) from the Beet armyworm Spodoptera exigua (Hübner) (SpexNPV) International Journal of Environmental Science and Engineering Vol 4: 75-83 (2013) 113 Senthil Kumar C.M.; Sathiah N and Rabindra R.J (2005) Optimizing the time of harvest of Nucleopolyhedrovirus infected Spodoptera litura (Farbricius) larvae under in vivo production systems Current Science, Vol 88 No 10 1682- 1684 143 114 Sireesha K., Kumar Ch S., Rao G.V R, Arjuna R P and Lava P.K (2010) Effect of different storage conditions on the virulence of Helicoverpa armigera nuclea polyhedrosisvirus (HaNPV) Journal of Entomology and Resources Vol 34.No 65-69 115 Goodman C.L., Mclntosh A.H., Sayed G.N.E., Grasel J.J and Stiles B (2001) Production of selected Baculoviruses in newly established Lepidopteran cell lines Journal of In Vitro Cell Development and Biology No 37 (2001) Pg 374- 379 116 Hink W F., Strauss E M and Ramoska W.A (1977) Propagation of Autographa californica nuclear polyhedrosis virus in cell culture: Method for infection cells Journal of Invertebrate Pathology No 30 185- 191 117 Phejun M Kanokwan P., Lertwerawat Y., Ketunuti U And Morakot T (2003) Production of baculovirus for biopesticide in insect cell culture Proceeding of The 13th annual meeting of the Thai society for biotechnology 2003 252- 260 118 Huda N.; Sajap A S and Lau W H (2012) Stability of Spodoptera litura nucleopolyhedrosis virus in Sodium Dodecyl Sulphate African Journal of Biotechnology Vollume 11 No 16 3877- 3881 119 Nazli H., Sajap A.S and Lau W.H (2012) Stability of Spodoptera litura nucleo polyhedrosis virus in sodium dodecyl sulphate African Journal of Biotechnology Volume 11 No 16 3877- 3881 120 Salama, M.S., A El-Salam, A.M.E., D M Mahmoud and Samah M.M.A (2017) Effect of ultra violet radiations on insecticidal activity of Spodoptera littoralis multinucleocapsid nuclear polyhedrosis virus against Spodoptera littoralis Boisd (Lepidoptera: Noctuidae) Bioscience Research Vol 14(3): 645-652 121 Winardo D and Soebandrijo (2006) Effectiveness of NPV formulated with different carriers to Spodoptera litura F and Helicoverpa armigera Hubner on coton Annual Reports of Indonesian Tobacco and Fiber Crops Research Institute Page 214- 234 144 PHỤ LỤC Phụ lục Ảnh hưởng nhiệt độ đến mật độ tế bào nuôi cấy II Phụ lục Ảnh hưởng mức pH đến mật độ tế bào III Phụ lục Ảnh hưởng tỉ lệ FBS bổ sung vào môi trường IV Phụ lục Mật độ tế vào thể vùi trình lây nhiễm NPV V I Ph ụ lục Ảnh hưởng nhiệt độ đến mật độ tế bào nuôi cấy II Phụ lục Ảnh hưởng mức pH đến mật độ tế bào III Phụ lục Ảnh hưởng tỉ lệ FBS bổ sung vào môi trường IV Phụ lục Mật độ tế vào thể vùi trình lây nhiễm NPV V VI VII ... cứu 43 2.1.2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 43 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 44 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 44 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 44 2.3 Nội dung nghiên cứu 44 2.4 Phương pháp nghiên cứu. .. 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 35 1.2.2.1 Nghiên cứu sâu khoang hại trồng 35 1.2.2.2 Nghiên cứu NPV sâu hại 36 1.2.2.3 Nghiên cứu nuôi nhân tế bào côn trùng 37 1.2.2.4 Nghiên cứu phát triển sinh... sở khoa học đề tài nghiên cứu 1.2 Tổng quan tài liệu 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 1.2.1.1 Nghiên cứu sâu khoang hại trồng 1.2.1.2 Nghiên cứu NPV sâu hại 1.2.1.3 Nghiên cứu phát triển sinh