Nghiên cứu đặc điểm phân bố của nấm trichoderma phân lập từ đất trồng chuối tại một số xã trên địa bàn huyện đại lộc, tỉnh quảng nam (tóm tắt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO ĐẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG NGU ỄN THỊ NGỌC M I NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM PHÂN BỐ CỦ NẤM TRICHODERMA PHÂN LẬP TỪ ĐẤT TRỒNG CHUỐI TẠI MỘT SỐ XÃ TRÊN ĐỊ BÀN HU ỆN ĐẠI LỘC, TỈNH QUẢNG N M Chuyên ngành: Sinh thái học Mã số: 60.42.60 T M T T LUẬN VĂN THẠC SĨ KHO HỌC Đà Nẵng – Năm 2014 Công trình hồn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: TS Đ NG Đ C ONG Phản biện 1: TS HU NH NGỌC THẠCH Phản biện 2: TS V TH B CH H U uận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm uận văn tốt nghiệp thạc sĩ Sinh th i học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 04 tháng 01 năm 2014 Có thể tìm hiểu luận văn tại:  Trung tâm Thông tin-Học liệu, Đại học Đà Nẵng  Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng MỞ ĐẦU T NH CẤP THI T CỦ Đ TÀI Trong năm gần đây, việc sử dụng c c VSV đối kh ng nhằm kiểm so t sinh học, ngăn chặn tiêu diệt c c sinh vật gây bệnh đạt nhiều thành tựu to lớn Việc p dụng c c biện ph p sinh học nơng nghiệp khuyến khích sử dụng mở rộng tồn giới góp phần không nhỏ việc hạn chế gây ô nhiễm môi trường, điều chỉnh cân sinh th i, cung cấp c c loại nông sản cho người tiêu dùng vật nuôi Nấm Trichoderma nghiên c u để sản uất en im, chất kích thích sinh trưởng đối kh ng c c vi nấm, vi khu n gây bệnh hại, bảo vệ trồng Nấm Trichoderma đối kh ng với vi nấm gây bệnh trồng thông qua c c c chế k sinh, tiết chất kh ng sinh en im phân hủy v ch tế bào nấm bệnh [26] Ở Việt Nam, năm gần đây, nhiều nghiên c u khả đối kh ng sản uất c c chế ph m từ nấm Trichoderma thu số thành công thực tế sản uất nông nghiệp Tuy nhiên, ảnh hưởng nông nghiệp truyền thống, thói quen sử dụng c c chất hóa học hiểu biết cịn hạn chế người nông dân c c chế ph m sinh học khiến cho c c chế ph m sản uất chưa sử dụng phổ biến thị trường Việc nghiên c u, sử dụng c c chủng vi nấm Trichoderma địa để sản uất c c chế ph m sinh học dùng sản uất nông nghiệp phịng trừ số bệnh hại trồng mà khơng cần nhập ngoại giúp cho việc tiết kiệm chi phí ặt kh c, cịn tạo c c chế ph m có chất lượng cao phịng, trị sâu bệnh, tiến tới thay dần biện ph p sử dụng chất ho học bảo vệ thực vật, góp phần nâng cao suất, chất lượng sản ph m nông nghiệp nhằm giải c c vấn đề môi trường nâng cao chất lượng sống người, tiến tới ây dựng nông nghiệp bền vững Chuối (Musa paradisiaca L.) loại nhiệt đới quan trọng ếp vị trí th tư sau lúa gạo, sữa lúa mì gi trị kinh tế Chuối loại thư ng mại hóa rộng rãi, đ ng vị trí th hai giới, sau cam [29] hí hậu nhiệt đới Việt Nam thuận lợi cho chuối sinh trưởng ph t triển Theo đề án quy hoạch phát triển rau hoa, cảnh đến năm 2020 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, chuối nhiều địa phư ng chọn làm trồng chủ lực [29] Huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam khu vực có diện tích chun canh chuối lớn tỉnh Quảng Nam khu vực Nam Trung Bộ Tuy nhiên năm gần đây, c c tượng thời tiết cực đoan gây ảnh hưởng đến qu trình sinh trưởng trồng tạo điều kiện thuận lợi cho c c loại bệnh hại có c c loại sâu, bệnh chuối ngày gia tăng làm giảm sản lượng chất lượng chuối, gây thiệt hại không nhỏ cho người nơng dân Với mong muốn tìm chủng vi nấm Trichoderma có khả đối kh ng mạnh với c c nấm gây bệnh hại để ng dụng việc sản uất chế ph m sinh học phịng trừ số bệnh chuối, góp phần ây dựng nông nghiệp sinh th i bền vững, tiến hành nghiên c u đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm phân bố nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối số xã địa bàn huyện Đại Lộc, tỉnh Quảng Nam” MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU c tiêu t ng qu t - Nghiên c u phân bố c c chủng vi nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n Đại Hiệp địa bàn huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam, c sở khoa học để sản uất chế ph m sinh học kh ng vi nấm gây bệnh chuối (Musa paradisiaca L.) 2.2 c tiêu c thể – Nghiên c u phân bố c c chủng nấm Trichoderma phân lập từ c c loại đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n Đại Hiệp huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam – X c định ảnh hưởng thành phần c giới, thời gian c c yếu tố đất pH, nhiệt độ, độ m đến phân bố khả sinh trưởng nấm Trichoderma đất trồng chuối – Tuyển chọn số chủng vi nấm Trichoderma hoạt tính đối kh ng mạnh với vi nấm gây bệnh chuối Musa paradisiaca L.) để nghiên c u ng dụng – Nghiên c u thử nghiệm dịch nuôi cấy c c chủng nấm Trichoderma kh ng vi nấm gây bệnh chuối Musa paradisiaca L.) ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng nghiên cứu – C c chủng nấm Trichoderma phân lập từ c c mẫu đất trồng chuối số ã địa bàn huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam – Nấm Fusarium gây bệnh héo rũ Colletochitrum gây bệnh th n thư chuối Musa paradisiaca L.) – Giống chuối lùn (Musa paradisiaca L.) lấy thơn ộc Bình, ã Đại Hịa, huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam 3.2 Phạm vi nghiên cứu Do thời gian có hạn nên chúng tơi tiến hành nghiên c u phạm vi sau: – X c định đặc điểm phân bố vi nấm Trichoderma c c loại đất trồng chuối lùn theo thành phần c giới, thời gian th ng , độ pH, nhiệt độ, độ m ã Đại Hịa thơn Giao Thủy, thơn ộc Bình), ã Đại Hiệp thơn Phú n thơn Quảng Đại, thơn Bàu Trịn ã Đại , thơn Phú Qu huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam – Phân lập, tuyển chọn c c chủng nấm Trichoderma có khả đối kh ng mạnh với vi nấm gây bệnh đất trồng chuối – Phân lập c c chủng vi nấm Fusarium gây bệnh héo rũ Colletochitrum gây bệnh th n thư chuối Musa paradisiaca L.) thơn ộc Bình, ã Đại Hịa, huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam – ng dụng thử nghiệm khả đối kh ng nấm Fusarium gây bệnh héo vàng chuối dịch nuôi cấy c c chủng nấm Trichoderma tuyển chọn phối trộn vào đất trước trồng – Thời gian thực hiện: từ th ng 12/2012 đến th ng 11/2013 – Thời gian thu mẫu đất, bệnh cây: th ng 12/2012 đến th ng 5/2013 PHƯ NG PH P NGHIÊN CỨU Ý NGHĨ KHO HỌC VÀ THỰC TIỄN Đ TÀI 5.1 Ý nghĩa khoa học – ết nghiên c u cung cấp thêm c c số liệu khoa học đ ng tin cậy phân bố động th i c c chủng nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối huyện Đại ộc, Tỉnh Quảng Nam – Góp phần bảo tồn nguồn gen chủng vi nấm Trichoderma địa, cung cấp nguyên liệu cho nghiên c u sâu h n sinh lí, sinh hóa, di truyền…và cở sở khoa học để ng dụng nấm đối kháng vào thực tiễn sản xuất có hiệu 5.2 Ý nghĩa thực tiễn – Tuyển chọn số chủng vi nấm Trichoderma hoạt tính mạnh, có khả kh ng vi nấm gây bệnh chuối Musa paradisiaca L.) đề uất c c biện ph p kiểm so t sinh học phòng trừ nấm bệnh, góp phần nâng cao suất, chất lượng tr i chuối thư ng ph m thị trường – Sử dụng chủng nấm Trichoderma địa để sản uất chế ph m sinh học phòng trừ bệnh hại chuối Musa paradisiaca L phù hợp với điều kiện địa phư ng, góp phần ây dựng nông nghiệp sinh th i bền vững BỐ CỤC Đ TÀI uận văn dài 88 trang, bao gồm chư ng chính, phần mở đầu phụ lục CHƯ NG TỔNG QU N TÀI LIỆU 1.1 KH I QU T V NẤM TRICHODERMA 1.1.1 Vị trí chi Trichoderma hệ thống phân o i Hiện nay, Việt Nam nấm Trichoderma phân loại thuộc ngành nấm ycota, lớp nấm bất toàn Deuteromycetes, nấm oniliales, họ oniliaceae, chi Trichoderma Hệ thống phân loại chấp nhận sử dụng phổ biến [19] 1.1.2 Đặc điểm hình thái, sinh trưởng nấm Trichoderma a Đặc điểm cấu tạo hình thái b Sự sinh trưởng nấm Trichoderma 1.1.3 Cơ chế kiểm soát sinh học nấm Trichoderma C chế kiểm so t sinh học nấm Trichoderma loại nấm gây bệnh thông qua c chế: kí sinh lên c thể nấm bệnh; tiết chất kháng nấm bệnh; cạnh tranh dinh dưỡng, không gian sống với nấm bệnh; thúc đ y ph t triển gia tăng s c đề kh ng trồng Những c chế không t ch biệt nhau, c chế đối kh ng thực tế loại c chế 1.1.4 M t số nghiên cứu ứng ụng nấm Trichoderma ột nghiên c u ng dụng Trichoderma spp quan tâm nhiều khả kiểm so t sinh học khả đối kh ng số nấm gây bệnh thực vật 1.1.5 Tình hình nghiên cứu nấm Trichoderma giới Việt Nam a Tình hình nghiên cứu giới b Tình hình nghiên cứu Việt Nam 1.2 TỔNG QU N V CÂ CHUỐI Chuối Musa paradisiaca L.) lồi thực vật có hoa họ Musaceae oài Carl von Linné miêu tả khoa học năm 1753 Có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới Đông Nam Á Úc Ngày nay, trồng khắp vùng nhiệt đới Chuối loại tr i sử dụng rộng rãi giới 1.3 KH I QU T V BỆNH TRÊN CÂ CHUỐI 1.3.1 Bệnh h o vàng o nấm Fusarium Bệnh nấm Fusarium thuộc họ Tuberculariaceae, Moniliales, lớp Nấm bất toàn (Deuteromycetes) [39] 1.3.2 Bệnh thán thư nấm Colletotrichum Bệnh nấm Colletotrichum thuộc họ elanconiaceae, Melanconiales thuộc lớp Nấm túi (Ascomycetes) gây nên 1.4 SỰ PHÂN BỐ CỦ VSV TRONG ĐẤT 1.4.1 Phân ố VSV th o đặc điểm tính chất đất 1.4.2 Phân ố VSV theo mùa 1.4.3 Phân ố VSV th o nhiệt đ 1.4.4 Phân ố VSV th o đ ẩm 1.5 VỊ TR ĐỊ LÝ VÀ ĐI U KIỆN TỰ NHIÊN HU ỆN ĐẠI LỘC, TỈNH QUẢNG N M 1.5.1 Vị trí địa ý Đại ộc huyện nằm phía Bắc Quảng Nam có diện tích 58.554 ha, có 18 đ n vị hành cấp ã, có thị trấn 17 xã [79] 1.5.2 Điều kiện tự nhiên * Địa hình, địa mạo * C c nguồn tài nguyên đất * h i qu t v c c địa điểm nghiên cứu Huyện Đại ộc có h n 700 đất trồng chuối theo hướng chuyên canh hóa, nhiều ã Đại Hoà, Đại n, Đại Hiệp, Đại Cường, Đại Thắng, Đại Phong oại chuối trồng nhiều Đại ộc chuối lùn, chuối cau chuối mốc Trong ã có diện tích đất trồng chuối lớn ã Đại Hoà, Đại n, Đại Hiệp Tuy nhiên, theo thống kê từ c c vườn chuối tỉ lệ chuối bị nhiễm bệnh héo vàng th n thư có tượng gia tăng, đặc biệt vào th ng 8, th ng hàng năm, có n i tỉ lệ chuối nhiễm bệnh lên tới 70 tổng số vườn Hiện chưa có thuốc đặc trị cho bệnh chuối, chủ yếu sử dụng c c loại thuốc hóa học để trị bệnh, tốn hiệu phòng trị không cao Biện ph p hữu hiệu đào bỏ toàn cụm chuối bị bệnh, trồng hoàn toàn Tuy nhiên, cụm chuối ph t triển tốt vụ nhiễm bệnh trở lại Trị bệnh cho chuối vấn đề nhân dân quyền huyện Đại ộc quan tâm V 10 c Phương ph p th t nh đối kháng Trichoderma chủng nấm gây bệnh chuối – trường thử tính đối kh ng (môi trường gi đỗ 2.2.4 Phương pháp khảo sát khả đối kháng ịch nu i cấy Trichoderma chủng nấm gây bệnh h o vàng chuối – Nguyên tắc: thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với cơng th c lần lặp lại CT1: Cây chuối Đất Dịch MT nuôi cấy nấm không bổ sung nấm Trichoderma CT2: Cây chuối CT3: Cây chuối sung nấm Trichoderma CT4: Cây chuối Đất Đất Nấm bệnh Dịch MT nuôi cấy nấm không bổ Nấm bệnh Đất Dịch MT nuôi cấy có bổ sung nấm Trichoderma.+ Nấm bệnh 2.2.5 Phương pháp ây ệnh nhân t o xác định chủng nấm gây ệnh * Phương pháp lây bệnh vào đất * Phương pháp lây bệnh 2.2.6 Phương pháp x í số iệu C c số liệu luận văn l phần mềm SPSS Statistical Package for the Social Sciences Sử dụng phép thử Ducan để kiểm định m c độ có nghĩa c c nghiệm th c 11 CHƯ NG K T QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BIỆN LUẬN 3.1 THÀNH PHẦN VÀ SỰ PHÂN BỐ CỦA NẤM TRICHODERMA TRÊN ĐẤT TRỒNG CHUỐI TẠI HU ỆN ĐẠI LỘC, TỈNH QUẢNG N M 3.1.1 Phân p nấm Trichoderma từ m u đất trồng chuối t i huyện Đ i L c, tỉnh Quảng Nam Trong 54 mẫu đất c định có 34 mẫu đất có diện nấm Trichoderma phân lập 36 chủng nấm Trichoderma ết cụ thể trình bày qua bảng 3.1: ảng Sự diện nấm Trichoderma c c mẫu đất trồng chuối huyện Đại Lộc, tỉnh QN STT Địa điểm Đ i Hòa Đ i An Đ i Hiệp Lo i đất Tổng s m u đất Số m u đất c Tri 6 6 6 6 54 3 3 34 Thịt TB Thịt nh C t pha Thịt TB Thịt nh C t pha Thịt TB Thịt nh C t pha TỔNG T ệ số m u đất c Tri 100 67 50 83 67 50 50 50 50 63 Số chủng 3 3 36 Từ kết bảng 3.1 hình 3.1 cho thấy 54 mẫu đất (gồm đât thịt trung bình, thịt nh cát pha) trồng chuối huyện Đại Lộc có 34 mẫu có diện nấm Trichoderma, chiếm t lệ 63 tổng số mẫu phân lập 12 Như vậy, c c chủng nấm Trichoderma phân lập từ c c loại đất trồng chuối khu vực huyện Đại ộc, tỉnh QN có khả phân bố rộng c c loại đất có điều kiện sinh th i kh c đa dạng thành phần 3.1.2 Các chủng nấm Trichoderma phân l p từ đất trồng chuối t i m t số xã địa bàn huyện Đ i L c, tỉnh Quảng Nam Kết thành phần chủng nấm Trichoderma phân bố số mẫu đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam trình bày qua bảng 3.2: Bảng 3.2 Số lượng hiệu chủng nấm Trichoderma phân lập đất trồng chuối huyện Đại Lộc, tỉnh QN Địa điểm Th i gian Xã Đ i Hịa Xã Đ i An SLC Kí hiệu SLC Tháng 12 DHO.01, 02 Tháng DHO.03, 04 Tháng Tháng Kí hiệu Xã Đ i Hiệp SLC Kí hiệu DA.01 DHI.01 DA.02, 03 DHI.02 DHO.05–07 DA.04 DHI.03 DHO.08–10 DA.05–07 DHI.04,05 Tháng DHO.11–13 DA.8–10 DHI.06,07 Tháng DHO.14, 15 DA.11,12 DHI.08,09 Qua hai bảng 3.2 cho thấy thành phần chủng nấm Trichoderma phân bố đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n, Đại Hiệp huyện Đại ộc, tỉnh QN đa dạng, cụ thể là: Xã Đại Hiệp có chủng, ã Đại n có 12 chủng ã Đại Hịa có 15 chủng * Kết theo dõi phát triển 36 chủng nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh QN sau ngày nuôi cấy môi trường gi đỗ trình bày bảng 3.3 hình 3.2: 13 – Nhóm 1: gồm chủng Trichoderma (DHO.01, DHO.03, DHO.05 – 07, DHO.09 – 11, DHO.13, DHO.14, DA.01, DA.04 – 06, D 08, D 09, D 11, D 12, DHI.03, DHI, 05, DHI.08, DHI.09 có hệ sợi ph t triển mạnh không sinh sắc tố môi trường nuôi cấy PD môi trường gi đỗ – Nhóm 2: gồm chủng nấm Trichoderma (DHO.02, DHO.04, DHO.08, DHO.12, DHO.15, DA.02, DA.03, DA.07, DA.10, DHI.01, DHI.02, DHI.04, DHI.06, DHI.07) có hệ sợi nấm sinh trưởng yếu mơi trường nuôi cấy PD môi trường gi đỗ 3.1.3 Sự phân bố nấm Trichoderma theo thành phần giới đất ết phân bố nấm Trichoderma theo thành phần c giới đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n, Đại Hiệp huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam trình bày bảng 3.4, 3.5, 3.6, 3.7và hình 3.4: Bảng 3.7 Số lượng nấm Trichoderma đất trồng chuối theo thành phần giới Lo i đất SL Trichoderma TS TB (x 104 CFU/g) Thịt TB Thịt nhẹ Cát pha 37,67ab 32,45ab 18,49a Ghi chú: Các chữ giống theo sau chữ số hàng khơng khác biệt ý nghĩa mức α =0,05 theo trắc nghiệm Duncan Từ kết bảng 3.4, 3.5, 3.6, 3.7 hình 3.4 cho thấy số lượng nấm Trichoderma 1g đất loại đất khác kh c Sự sai kh c c c chủng nấm Trichoderma phải chịu t c động số yếu tố đất như: thành phần c giới, độ 14 m, nhiệt độ, độ pH ảnh hưởng yếu tố thời gian Ngoài ra, chế độ canh tác q trình chăm bón người dân gây ảnh hưởng đến phân bố nấm Trichoderma đất Như vậy, phân bố nấm Trichoderma phụ thuộc vào hàm lượng c c chất dinh dưỡng độ tho ng khí c c loại đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n, Đại Hiệp huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam Nấm Trichoderma phân bố nhiều đất thịt trung bình (37,67 x 104 CFU/g sau đến đất thịt nh (32,45 x 104 CFU/g) đất cát pha (18,49 x 104 CFU/g) * Đồng thời, tiến hành phân lập 34 mẫu đất trồng chuối có diện nấm Trichoderma lấy ã thuộc huyện Đại ộc, tỉnh QN thu kết số lượng nấm Trichoderma theo khu vực lấy mẫu trình bày bảng 3.8 hình 3.5: Bảng 3.8 Số lượng Trichoderma trung bình địa điểm thu mẫu huyện Đại Lộc, tỉnh QN STT Địa điểm SL Trichoderma TB (x 104 CFU/g) Xã Đại Hòa 31,04bc Xã Đại n 29,42a Xã Đại Hiệp 28,14b Qua kết bảng 3.8 hình 3.5 cho thấy phân bố nấm Trichoderma phụ thuộc lớn vào khu vực lấy mẫu c c chế độ canh t c kh c Tuy nhiên, chuối trồng có t n l lớn nên độ che phủ đất cao Nếu trồng en canh c c loại ưa s ng vườn chuối làm giảm suất trồng en canh, không đem lại hiệu kinh tế cho người dân Vì vậy, cần có c c phư ng th c canh t c phù hợp với điều kiện địa phư ng 15 qu trình sinh trưởng chuối để kích thích sinh trưởng vi nấm Trichoderma, đồng thời giúp tăng suất chuối cải thiện đời sống người dân từ c c trồng vườn chuối 3.1.4 Sự phân ố nấm Trichoderma theo th i gian ết nghiên c u phân bố nấm Trichoderma đất trồng chuối theo thời gian loại đất thể bảng 3.9 hình 3.6, 3.7 cụ thể sau: Bảng 3.9 Sự phân bố nấm Trichoderma theo th i gian c c loại đất trồng chuối huyện Đại Lộc, tỉnh QN ST Tháng Th.12 Th.01 Th.02 Th.03 16,4ab 17,77b 50,37a 63,1bc 70,83a 8,83a 12,07c 20,63b 38,53c 54,03b 60,6ab 3,10a 9,17a 12,40b 26,43a 28,60a 31,23b 6,5a 12,55b 16,93b 38,44b 48,58b 54,22ab T Lo i đất Thịt TB 7,57b Thịt nhẹ Cát pha SL Trichoderma TB (x 104 CFU/g) Th.04 Th.05 Như vậy, phân bố nấm Trichoderma đất trồng chuối thay đổi theo c c yếu tố môi trường th ng kh c nhau, phân bố nhiều vào th ng 5/2013 (54,22 x 104 CFU/g), vào th ng 12/2012 6,5 x 104 CFU/g) 3.1.5 Sự phân bố nấm Trichoderma theo pH ết nghiên c u ảnh hưởng độ pH đến khả phân bố nấm Trichoderma đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh QN trình bày bảng 3.10 hình 3.8: 16 Bảng 3.10 Số lượng Trichoderma phân bố theo p đất trồng chuối huyện Đại Lộc, tỉnh QN pH SL Trichoderma TS TB (x 104 CFU/g) 5,0 – 5,5 5,51 – 6,50 6,51 – 7,50 58,9a 30,36b 8,82b Qua kết bảng 3.10 hình 3.8 cho thấy độ pH đất ảnh hưởng lớn tới khả phân bố nấm Trichoderma, c c loại đất chua có độ pH thấp 5,0 – 5,5, lượng Trichoderma tổng số cao (58,9 x 104 CFU/g gấp lần so với đất trung tính pH 6,51 – 7,5 (8,82 x 104 CFU/g Đất chua có pH 5,51 – 6,5 có lượng Trichoderma tổng số đạt trung bình 30,36 104 CFU/g) Như vậy, nấm Trichoderma phân bố nhiều c c loại đất trồng chuối có độ pH thấp 5,5 giảm dần độ pH tăng 3.1.6.Sự phân bố nấm Trichoderma theo nhiệt đ đ ẩm a Sự phân bố nấm Trichoderma theo nhiệt độ Kết phân bố nấm Trichoderma theo nhiệt độ đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh QN trình bày bảng 3.11 hình 3.9: Bảng 3.11 Số lượng Trichoderma phân bố theo nhiệt độ đất trồng chuối huyện Đại Lộc, QN Nhiệt đ (oC) SL Trichoderma TS TB (x 10 CFU/g) 18,9 – 20 20,1 – 25 25,1 – 28 10,38a 21,44ab 50,34a Qua kết bảng 3.11 hình 3.9 cho thấy đất trồng chuối huyện Đại ộc thời gian nghiên c u khoảng nhiệt độ từ 17 18,9 – 28oC, mẫu đất có nhiệt độ khác số lượng phân bố nấm Trichoderma kh c Số lượng nấm Trichoderma phân bố nhiều nhiệt độ từ 25,1 – 28oC, có trung bình 50,34 x 104 CFU/g Sau đến khoảng nhiệt độ từ 20,2 – 25oC, có trung bình 21,44 x 104 CFU/g Nấm Trichoderma phân bố khoảng nhiệt độ 18,9 – 20, với trung bình 10,38 x 104 CFU/g b Sự phân bố nấm Trichoderma theo độ ẩm Kết phân bố nấm Trichoderma theo độ m đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh QN trình bày bảng 3.12 hình 3.10 Bảng 3.12 Sự phân bố nấm Trichoderma theo độ ẩm đất trồng chuối huyện Đại Lộc, tỉnh QN Đ ẩm (%) SL Trichoderma TS TB (x 104 CFU/g) < 30 34,08a 31 – 35 13,76b 36 – 40 41,83b 41 – 45 55,58ab 46 – 50 35,33bc 51 – 55 37,85a 56 – 60 12,95bc > 60 12,07bc Qua kết bảng 3.12 hình 3.10 cho thấy thời gian nghiên c u, độ m trung bình đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam từ 25 – 64 phân bố nấm Trichoderma c c điều kiện m độ kh c kh c 18 Số lượng nấm Trichoderma phân bố nhiều độ m từ 41 – 45% (55,58 x 104 CFU/g), thấp độ m > 60% (12,07 x 104 CFU/g) Nấm Trichoderma phân bố nhiều đất có độ m 36 – 55% (35,33 – 55,58 x 104 CFU/g) Ở c c mẫu đất có độ m kh c, lượng Trichoderma phân bố thay đổi từ 12,95 – 41,43 x 104 CFU/g 3.2 PHÂN LẬP C C CHỦNG VI NẤM GÂ BỆNH H O VÀNG VÀ TH N THƯ TRÊN CÂ CHUỐI Sau thu thập c c mẫu đất c c khu vực có chuối nhiễm bệnh c c phận rễ, thân, l , chuối có triệu ch ng nhiễm bệnh héo vàng th n thư thơn ộc Bình, ã Đại Hịa, huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam th ng 12/2012 Đây thời điểm dịch bệnh bùng ph t chuối thơn ộc Bình Chúng tơi tiến hành phân lập c c mẫu bệnh thu thập môi trường W đặc trưng cho nấm mốc gây bệnh thu chủng nấm tạm kí hiệu NB1 NB2 Dựa vào đặc điểm hình th i khu n lạc quan s t cuống sinh bào tử bào tử kính hiển vi, p dụng khóa phân loại nấm mốc Bùi Xuân Đồng 1984 [7] khóa phân loại nấm bệnh hại trồng Vũ Triệu ân 2007 [20], c định chủng nấm NB1 gây bệnh héo vàng chuối nấm Fusarium, chủng nấm NB2 gây bệnh th n thư chuối nấm Colletotrichum Sau phân lập, tiến hành nhân sinh khối c c chủng nấm gây bệnh Sau ngày nhân sinh khối môi trường hạt thóc, cho thấy c c chủng vi nấm gây bệnh ph t triển mạnh, bao trùm toàn môi trường nuôi cấy, chu n bị lây bệnh nhân tạo cho c c công th c thực nghiệm 19 3.3 KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA CÁC CHỦNG NẤM TRICHODERMA PHÂN LẬP ĐỐI VỚI NẤM FUSARIUM (GÂY BỆNH HÉO VÀNG), NẤM COLLETOTRICHUM (GÂY BỆNH TH N THƯ Chúng tiến hành c định khả đối kh ng 36 chủng vi nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n, Đại Hiệp thuộc huyện Đại ộc, tỉnh QN với chủng nấm bệnh NB1 – Fusarium NB2 – Colletotrichum Thí nghiệm thực đồng loạt đĩa petri đường kính 10cm , c c chủng nấm ni chủng môi trường gi đỗ, điều kiện thí nghiệm đồng nhiệt độ 25 – 30oC 3.3.1 Khả đối kháng chủng nấm Trichoderma phân l p nấm Fusarium (gây bệnh héo vàng) chuối Qua kết thu từ bảng Phụ lục , bảng 3.14 hình 3.13 cho thấy c c chủng nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối hầu hết có khả đối kh ng với nấm bệnh NB1 – Fusarium Tuy nhiên, có kh c biệt hiệu c chế c c chủng nấm nghiên c u nấm bệnh NB1 Cụ thể là: Trong 36 chủng nấm Trichoderma tiến hành nghiên c u có chủng nấm có khả đối kh ng mạnh, hiệu c chế nấm bệnh đạt 80% Trong chủng DHO.12, DA.08) chiếm 5,56 kh ng nấm bệnh mạnh nhất, đạt m c , chủng DHO.03, DHO.07, DHO 10, DA.04, DHI.08 chiếm 13,89 kh ng m c có khả có khả đối ; 23 chủng chiếm 63,89% có khả đối kh ng m c ++; chủng DHO.08, DHO.13, DA.10) chiếm 8,33 có khả 20 đối kh ng m c chiếm 8,33 chủng DHO.04, DA.02, DHI.07) có hiệu c chế nấm bệnh < 40 m c0 3.3.2 Khả đối kháng chủng nấm Trichoderma phân l p nấm Colletotrichum (gây bệnh thán thư chuối Qua bảng Phụ lục , bảng 3.15 hình 3.15 cho thấy, khả đối kháng c c chủng nấm Trichoderma nấm Colletotrichum mạnh h n so với nấm Fusarium Cụ thể: 36 chủng nấm Trichoderma nghiên c u có 10 chủng mạnh, chủng DHO.07, DHO.12, DA.08) chiếm 8,33 nấm m c +++ hiệu c chế 90 có khả kh ng ; chủng DHO.03, DHO.09, DHO 10, DA.01, DA.04, DHI.05, DHI.08 chiếm 19,44 đối kh ng m c +++ hiệu c chế 80 – 90%); 23 chủng chiếm 63,89 đối kh ng nấm bệnh m c ++ hiệu c chế 60– 80%); chủng DA.02, DHI.07 chiếm 5,56 m c đối kh ng yếu với nấm bệnh chủng (DHO.04) chiếm 2,87 có hiệu c chế 22 m c0 Như vậy, qua qu trình nghiên c u quan s t thí nghiệm, chúng tơi nhận thấy chủng nấm Trichoderma (DHO.03, DHO.07, DHO.10, DHO.12, DA.04, DA.08, DHI.08)có khả ph t triển hệ sợi nhanh, tốc độ kí sinh tiêu diệt hai loại nấm bệnh cao Chúng chọn hai chủng nấm DHO 07 DHO.12 chủng nấm có khả đối kh ng mạnh hai loại nấm bệnh hiệu đối kh ng >90%) làm đối tượng tiếp tục nghiên c u 21 3.4 K T QUẢ KIỂM TR KHẢ NĂNG ĐỐI KH NG CỦ C C CHỦNG NẤM TRICHODERMA VỚI NẤM BỆNH FUSARIUM TRÊN CÂ CHUỐI Do thời gian điều kiện làm luận văn có hạn nên chúng tơi tiến hành thử nghiệm s khả đối kh ng dịch nuôi cấy chủng nấm DHO.07 DHO.12 nấm Fusarium gây bệnh héo vàng chuối đất thịt nh TP Đà Nẵng Giống chọn giống chuối lùn lấy thôn ộc Bình, ã Đại Hịa, huyện Đại ộc, tỉnh QN Chúng tơi tiến hành thí nghiệm lây bệnh nhân tạo chuối lùn với công th c – Giai đo n 1: kết chưa lây nhiễm nấm bệnh cho thấy chuối công th c thí nghiệm ph t triển tốt, l nhanh, khơng có có biểu bị bệnh – Giai đo n 2: sau lây nhiễm nấm bệnh Fusarium, nấm bệnh đưa vào đất CT2, CT3 CT4 Chỉ tiêu theo d i ghi nhận tỉ lệ bị nhiễm bệnh, m c độ bị tổn thư ng l , thân chuối sau lây nhiễm nấm bệnh sau 10 20 ngày Qua kết bước đầu nghiên c u thử nghiệm dịch MT ni cấy có bổ sung nấm Trichoderma lên chuối c ch phối trộn vào đất trước gieo trồng cho thấy có khả đối kh ng, phòng ngừa lây nhiễm nấm bệnh Fusarium gây bệnh héo vàng chuối tốt 22 K T LUẬN VÀ KI N NGHỊ K T LUẬN Qua kết nghiên c u trên, rút số kết luận sau: 1.1 Từ 54 mẫu đất trồng chuối c c loại ã Đại Hòa, Đại n, Đại Hiệp thuộc huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam c định 34 mẫu đất có diện nấm Trichoderma, phân lập 36 chủng nấm Trichoderma, đó: ã Đại Hòa: 15 chủng chiếm t lệ 41,7% tổng số chủng, ã Đại n: 12 chủng chiếm t lệ 33,3%, ã Đại Hiệp: chủng chiếm t lệ 25% 1.2 Sự phân bố nấm Trichoderma đất trồng chuối, theo thành phần c giới đất, độ pH, thời gian, nhiệt độ độ m khác khác nhau: – Theo thành phần c giới đất: c c loại đất trồng chuối ã Đại Hòa, Đại n, Đại Hiệp huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam, nấm Trichoderma phân bố nhiều đất thịt trung bình (37,67 x 104 CFU/g), sau đến đất thịt nh (32,45 x 104 CFU/g) đất cát pha (18,49 x 104 CFU/g) – Theo thời gian: phân bố nấm Trichoderma đất trồng chuối có thay đổi theo th ng Số lượng nấm Trichoderma phân bố đất trồng chuối vào th ng 12/2012 (6,5 x 104 CFU/g), nhiều tháng 5/2013 (54,22 x 104 CFU/g), – Theo pH: nấm Trichoderma phân bố nhiều c c loại đất trồng chuối có độ pH 5,0 – 5,5 Độ pH đất tăng lượng nấm Trichoderma giảm 23 – Theo nhiệt độ: nấm Trichoderma đất trồng chuối phân bố nhiều khoảng nhiệt độ từ 25 – 28oC giảm dần c c loại đất có nhiệt độ thấp 250C – Theo độ m: Nấm Trichoderma phân bố nhiều c c loại đất trồng chuối có độ m khoảng 36 – 55% Đất có độ m cao 60%) số lượng nấm Trichoderma giảm h n 1.3 Từ c c mẫu đất, c c phận rễ, thân, l chuối, phân lập c định chủng nấm gây bệnh héo vàng bệnh th n thư chuối là: chủng NB1 – Fusarium chủng NB2 – Colletotrichum 1.4 X c định khả đối kh ng 36 chủng nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối số ã thuộc huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam với nấm bệnh Fusarium Colletotrichum Tiến hành chọn chủng DHO.07 DHO.12 có hiệu đối kh ng chủng nấm bệnh (trên 90% để tiếp tục nghiên c u 1.5 Tiến hành thử nghiệm s dịch nuôi cấy c c chủng nấm Trichoderma đối kh ng mạnh với nấm bệnh Fusarium điều kiện tự nhiên đạt hiệu tốt Là c sở khoa học để ng dụng sản uất chế ph m sinh học có khả phịng tr nh nấm vi nấm Fusarium gây héo vàng bệnh chuối KI N NGHỊ 2.1 Tiếp tục nghiên c u thành phần đặc điểm phân bố nấm Trichoderma đất trồng chuối địa phư ng kh c để có dẫn liệu cụ thể h n nấm Trichoderma đất trồng chuối 24 2.2 Nghiên c u c c chất mang tối ưu để tạo chế ph m có hoạt tính mạnh nhất, bảo quản lâu dài mang hiệu kinh tế cao 2.3 Thử nghiệm khả đối kh ng Trichoderma c c loài nấm kh c gây bệnh chuối khả đối kh ng chế ph m nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối lên c c trồng kh c 2.4 Nghiên c u hồn thiện quy trình sản uất chế ph m nấm Trichoderma ... ? ?Nghiên cứu đặc điểm phân bố nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng chuối số xã địa bàn huyện Đại Lộc, tỉnh Quảng Nam? ?? MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU c tiêu t ng qu t - Nghiên c u phân bố c c chủng vi nấm. .. chủng nấm Trichoderma phân l p từ đất trồng chuối t i m t số xã địa bàn huyện Đ i L c, tỉnh Quảng Nam Kết thành phần chủng nấm Trichoderma phân bố số mẫu đất trồng chuối huyện Đại ộc, tỉnh Quảng Nam. .. QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BIỆN LUẬN 3.1 THÀNH PHẦN VÀ SỰ PHÂN BỐ CỦA NẤM TRICHODERMA TRÊN ĐẤT TRỒNG CHUỐI TẠI HU ỆN ĐẠI LỘC, TỈNH QUẢNG N M 3.1.1 Phân p nấm Trichoderma từ m u đất trồng chuối t i huyện