Mục tiêu của nghiên cứu là xây dựng được quy trình bào chế phytosome chứa polyphenol chiết xuất từ lá chè xanh. Khảo sát các điều kiện phản ứng tạo phức hợp giữa polyphenol (PP) với phosphatidylcholin (PC) đã lựa chọn được các thông số thích hợp là: dung môi phản ứng ethanol 60%, tỷ lệ PP/PC 1/2, nhiệt độ phản ứng 40oC, thời gian phản ứng 2 giờ.
Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ PHYTOSOME CHỨA POLYPHENOL CHIẾT XUẤT TỪ LÁ CHÈ XANH (CAMELLIA SINENSIS L.) Nguyễn Thị Thanh Hằng*, Nguyễn Thị Thanh Tâm, Vương Thị Minh Thư, Lương Thị Phương Anh Học viện Quân Y *Tác giả liên lạc: thanhhangnguyen251196@gmail.com TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế phytosome chứa polyphenol chiết xuất từ chè xanh Khảo sát điều kiện phản ứng tạo phức hợp polyphenol (PP) với phosphatidylcholin (PC) lựa chọn thơng số thích hợp là: dung mơi phản ứng ethanol 60%, tỷ lệ PP/PC 1/2, nhiệt độ phản ứng 40oC, thời gian phản ứng Dịch sau phản ứng phun sấy thu phytosome (PHY) dạng bột khơ, màu vàng nhạt, kích thước tiểu phân khoảng vài micromet, hàm lượng PP tổng 271,02 ± 13,92 mg/g, hàm lượng PP dạng phức hợp 251,60 ± 12,91 mg/g, hiệu suất nạp thuốc 85,69 ± 4,40% Các phổ DSC, FTIR, nhiễu xạ tia X chứng minh tạo phức hợp PP PC Từ khóa: Chè xanh, polyphenol, phytosome STUDY ON PREPARATION OF PHYTOSOME CONTAINING POLYPHENOL FROM GREEN TEA LEAVES (CAMELLIA SINENSIS L.) Nguyen Thi Thanh Hang*, Nguyen Thi Thanh Tam, Vuong Thi Minh Thu, Luong Thi Phuong Anh Vietnam Military Medical University *Corresponding Author: thanhhangnguyen251196@gmail.com ABSTRACT The aim of this study is to establish the procedure for preparation of phytosome containing polyphenol from green tea leaves The reaction conditions between polyphenol (PP) and phosphatidylcholine (PC) to create the PP-PC complex were optimized The suitable parameters were chosen as follows: The reaction solvent was ethanol at 60%, the ratio of PP/PC was 1/2, reaction temperature was at 40oC, reaction time was hours The final solution was spray-dried to obtain phytosome (PHY) in the form of light yellow powder, the particle size was about a few micrometers, the total content of PP was 271.02 ± 13.92 mg/g, the content of PP in the complex was 251.60 ± 12.91 mg/g, and the drug entrapment (%) was 85.69 ± 4.40% The complexity between PP and PC was demonstrated by DSC, FTIR, X-ray diffraction Keywords: Green tea, polyphenol, phytosome dụng có lợi cho sức khỏe như: Điều trị hội chứng chuyển hóa (tiểu đường, béo phì), số bệnh lý tim mạch, phịng ngừa nhiễm độc gan, ức chế nhiều dòng tế bào ung thư người, kháng khuẩn, kháng virus, tăng cường miễn TỔNG QUAN Chè xanh (Camellia Sinensis L.) chứa polyphenol bao gồm flavanol, flavandiol, flavonoid acid phenolic, Hầu hết polyphenol chè xanh (GTP) catechin, có tác 11 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 dịch,…Tuy nhiên, GTP hấp thu chậm qua đường tế bào, có sinh khả dụng thấp theo đường uống, chất cấu trúc phân tử khó thấm qua màng ruột, không ổn định đường tiêu hóa phần bị vi khuẩn đường ruột phân hủy, mà Epigallocatechin gallat (EGCG) Epigallocatechin (EGC) tinh khiết hấp thu mức 2,0% Phytosome (PHY) phức hợp hoạt chất có nguồn gốc dược liệu phospholipid PHY có ưu điểm bật làm tăng sinh khả dụng thay đổi tính chất phân bố vào pha dầu nước PHY giúp bảo vệ hoạt chất chống lại phân hủy gây enzyme vi khuẩn đường ruột, có khả hướng đến đích trị liệu, làm tăng thời gian bán thải, Do đó, GTP bào chế dạng PHY khắc phục nhược điểm nhóm Trên thực tế, PHY chè xanh chứng minh cải thiện sinh khả dụng, tăng tác dụng chống oxy hóa điều trị bệnh lý tim mạch, tăng hiệu giảm cân số BMI người béo phì Tuy nhiên, nghiên cứu bào chế PHY chè xanh hạn chế Nghiên cứu tiến hành nhằm xây dựng quy trình bào chế đánh giá số tiêu chất lượng PHY chứa PP chiết xuất từ chè xanh Kỷ yếu khoa học Thiết bị Thiết bị chiết siêu âm SM-30 (Hàn Quốc), máy quang phổ Labomed 2960 (Mỹ), máy cô quay chân không Buchi (Thụy Sĩ), thiết bị phun sấy LPG-5 (Trung Quốc) Phương pháp nghiên cứu Phương pháp điều chế dịch chiết chè xanh Lá chè xanh rửa sạch, sau diệt men vi sóng: Sử dụng lị vi sóng Sanyo, chế độ lượng cao, thời gian vi sóng 120 giây, lượng mẫu: 100g nguyên liệu/lần Nguyên liệu sau diệt men sấy khô tủ sấy 60ºC đến hàm ẩm nhỏ 10% Nghiền mịn rây qua rây 1mm Chiết siêu âm 70oC, dung môi ethanol 60%, tỷ lệ dung môi/dược liệu 10/1, thời gian 90 phút, lực siêu âm 60Hz Làm lạnh nhanh dịch chiết, lọc thu lấy phần dịch trong, định lượng polyphenol toàn phần UV-Vis, dùng acid gallic làm chất chuẩn đối chiếu Mỗi mẻ tiến hành với 3kg nguyên liệu Bào chế phytosome phương pháp bốc dung môi Cân khoảng 100g dịch chiết chè xanh Hòa tan PC 100ml ethanol 60% Trộn hai dung dịch trên, khuấy từ gia nhiệt nhiệt độ thời gian thích hợp, tùy theo khảo sát Bốc dung môi qua thể rắn máy cô quay chân không Sấy sản phẩm 50ºC đến đạt hàm ẩm 3% Nghiền mịn, rây qua rây 180, bảo quản lọ thủy tinh sẫm màu Xác định hàm lượng PP dạng phức hợp hiệu suất phytosome hóa Cân xác khoảng 200mg PHY cho vào bình nón 250ml, thêm 100ml nước cất, siêu âm 90 phút nhiệt độ phòng, thêm tiếp 100 ml ethylacetat (loại polyphenol tự do), khuấy từ với tốc độ 4000 vòng/phút 30 phút Chuyển dịch lỏng sang bình gạn, để NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên vật liệu thiết bị Nguyên liệu Lá chè xanh (phần già) thu hái khu vực huyện Ba Vì, thành phố Hà Nội; Acid gallic chuẩn (>98,5%), phosphatidylcholin đậu nành (PC) thuốc thử Folin Ciocalteu hãng Sigma Aldrick; số dung mơi hóa chất đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích DĐVN IV 12 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học tách lớp hoàn toàn gạn lấy pha ứng phun sấy với thơng số: nước, pha lỗng đến nồng độ thích hợp Nhiệt độ phun sấy 120 ± 2ºC, tốc độ để làm phản ứng màu với thuốc thử cấp dịch 30 ml/phút, áp lực khí nén đầu Folin Ciocalteu đo quang bước phun 0,2 MPa Tiến hành phun sấy sóng 765 nm Hàm lượng polyphenol tương tự với mẫu dịch chiết chè xanh dạng phức hợp sản phẩm (mg/g): thu bột cao khô (GT-SD) làm lượng polyphenol (mg) dạng phức mẫu đối chiếu hợp/khối lượng sản phẩm (g) Hiệu Đánh giá khả tạo phức suất PHY (%): Khối lượng polyphenol phosphatidylcholin polyphenol tạo phức hợp × 100/khối Tiến hành quét nhiệt vi sai (DSC), đo lượng polyphenol đưa vào quang phổ hồng ngoại (FTIR), Xác định độ tan bão hòa nhiễu xạ tia X mẫu PC, PHY bột Độ tan bão hòa PHY nước, GT-SD, từ đánh giá khả tạo acid pH = 1,2 đệm phosphast pH 6,8 phức hợp polyphenol PC xác định cách cho dư PHY lượng mẫu vào ml môi trường, lắc Đánh giá số tiêu chất lượng xoáy giờ, để ổn định 24 phytosome Ly tâm với tốc độ 2500 vòng/phút Tính chất hình thái: Mơ tả cảm 10 phút Hút phần dịch quan chụp hiển vi điện tử quét pha loãng với nước đến nồng độ thích (SEM); hàm ẩm: theo DĐVN IV hợp, đem định lượng (PL9.6); định hàm lượng PP tổng Phương pháp bào chế phytosome, bột UV-Vis; hiệu suất nạp thuốc (%): cao khô chè xanh phun sấy lượng polyphenol dạng phức hợp × Làm phản ứng tạo phức hợp 100/lượng PP tổng polyphenol (PP) PC với thơng Phân tích thống kê số liệu số thu từ khảo sát bào chế PHY Các số liệu xử lý thống kê bằng bốc dung môi Dịch sau phản phần mềm Microsoft Excel 2013 Bảng Hàm lượng polyphenol toàn phần dịch chiết chè xanh Hàm Khối Dung lượng Hàm lượng lượng môi Mật độ Hệ số pha Nồng độ chất polyphenol cân pha quang lỗng (µg/ml) rắn (mg/g) (mg) (ml) (%) 1012 0,372 39,30 703,51 1008 1016 2,76 50 0,351 10 0,392 Trung bình ± SD Dịch chiết chè xanh có hàm lượng chất rắn 2,76% hàm lượng PP 702,83 ± 33,93 mg/g tính theo acid gallic/chất rắn khô dịch chiết Do vậy, dịch chiết sử dụng để 37,20 668,56 41,30 736,41 702,83 ± 33,93 bào chế PHY mà không cần cô đặc để tránh phân hủy hoạt chất, Vũ Thị Quỳnh cộng sử dụng cao bạch có hàm lượng flavonoid 261 mg/g để bào chế PHY 13 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học nén đầu phun 0,2 bar; phương pháp DSC, nhiễu xạ tia X, FTIR bước đầu chứng minh có liên kết hóa học PP với PC; phytosome polyphenol có hàm lượng PP tổng 271,02 ± 13,92mg/g phương pháp dạng phức hợp 251,60 ± 12,91mg/g, hiệu suất PHY hóa 85,69 ± 4,40% KẾT LUẬN Đã xây dựng quy trình bào chế phytosome polyphenol với thông số phản ứng dung môi ethanol 60%, tỷ lệ PP/PC 1/2, nhiệt độ phản ứng 40°C, thời gian giờ; thông số phun sấy tạo bột khô nhiệt độ phun sấy 120 ± 2ºC, tốc độ cấp dịch 30 ml/phút, áp lực khí TÀI LIỆU THAM KHẢO AMINL T., BHAT S V (2012) Review on Phytosome Technology as a Novel Approach to Improve The Bioavailability of Nutraceuticals International Journal of Advancements in Research & Technology, Vol (3) CHACKO S.M., THAMBI P T., KUTTAN R., NISHIGAKI I (2010) Beneficial effects of green tea: A literature review Chinese Medicine 2010, 5:13 NGUYỄN HOÀNG HIỆP, NGUYỄN ĐỨC CƯỜNG, PHAN THỊ THU HẰNG, NGUYỄN TRỌNG ĐIỆP (2016) Ảnh hưởng thơng số quy trình đến chiết xuất polyphenol từ chè xanh (Camellia sinensis L.) phương pháp chiết siêu âm Tạp chí Y Dược học quân sự, số chuyên đề dược năm 2016 PHẠM THỊ MINH HUỆ, NGUYỄN THANH HẢI, VÕ XUÂN MINH (2015) Phytosome: Giải pháp tăng sinh khả dụng cho hoạt chất có nguồn gốc dược liệu Tạp chí Dược học, số 465, tr 2-7 14 ... nghiên cứu bào chế PHY chè xanh hạn chế Nghiên cứu tiến hành nhằm xây dựng quy trình bào chế đánh giá số tiêu chất lượng PHY chứa PP chiết xuất từ chè xanh Kỷ yếu khoa học Thiết bị Thiết bị chiết. .. sấy LPG-5 (Trung Quốc) Phương pháp nghiên cứu Phương pháp điều chế dịch chiết chè xanh Lá chè xanh rửa sạch, sau diệt men vi sóng: Sử dụng lị vi sóng Sanyo, chế độ lượng cao, thời gian vi sóng... HẰNG, NGUYỄN TRỌNG ĐIỆP (2016) Ảnh hưởng thơng số quy trình đến chiết xuất polyphenol từ chè xanh (Camellia sinensis L.) phương pháp chiết siêu âm Tạp chí Y Dược học quân sự, số chuyên đề dược năm