XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÀM SẠCH QUA CỘT MIỄN DỊCH ÁI LỰC VÀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO DETECTOR HUỲNH QUANG

TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA Dự thảo - TCVN:2018 Xuất lần THỨC ĂN CHĂN NUÔI – XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÀM SẠCH QUA CỘT MIỄN DỊCH ÁI LỰC VÀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO DETECTOR HUỲNH QUANG Animal feeding stuffs – Determination of Ochratoxin A in animal feed by immunoaffinity column clean-up and High Performance Liquid Chromatography with fluorescence detection HÀ NỢI – 2018 Lời nói đầu TCVN :2018 xây dựng dựa theo EN 16007; TCVN :2018 Viện Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN :2018 Dự thảo Thức ăn chăn nuôi – Xác định Ochratoxin A thức ăn chăn nuôi bằng phương pháp làm qua cột lực miễn dịch sắc ký lỏng hiệu cao detector huỳnh quang Animal feeding stuffs - Determination of Ochratoxin A in animal feed by immunoaffinity column clean-up and High Performance Liquid Chromatography with fluorescence detection Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định Ochratoxin A (OTA) thức ăn chăn ni có thành phần bản ngũ cốc, sử dụng phương pháp làm cột lực miễn dịch sắc ký lỏng hiệu cao detector huỳnh quang CHÚ THÍCH: nờng độ khối lượng OTA đã thẩm định khoảng 39 µg/kg to 338 µg/kg Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên bản nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên bản nhất, bao gờm cả sửa đổi, bổ sung (nếu có) ISO 1042, Dụng cụ thủy tinh phịng thí nghiệm - Bình định mức vạch (ISO 1042: 1998) TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987), Nước dùng để phân tích phịng thí nghiệm – Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Chiết OTA khỏi mẫu thử bằng hỗn hợp metanol - dung dịch nước natri bicarbonate % Dịch chiết lọc, pha loãng với PBS và làm bằng cách sử dụng cột sắc ký lực miễn dịch (IAC) Tách rửa OTA khỏi cột IAC đầu tiên bằng metanol sau bằng nước nước, dịch tách rửa thêm nước đến đủ thể tích đã định tiến hành lượng định bằng phương pháp HPLC với detector huỳnh quang 4 Thuốc thử Trong trình phân tích, trừ có quy định khác, sử dụng thuốc thử loại phân tích Các dung mơi phải có chất lượng HPLC chất lượng tốt 4.1 Metanol, CH3OH, loại kỹ thuật 4.2 Metanol, CH3OH, loại HPLC 4.3 Nước, nước (loại TCVN (ISO 3696) nước (loại TCVN ISO 3696) tương đương 4.4 Kali clorua, KCI 4.5 Natri clorua, NaCl 4.6 Dinatri hydrogenphosphate dodecahydrate, Na2HPO4.12 H2O 4.7 Acetonitrile, CH3CN, loại HPLC 4.8 Axit acetic đậm đặc (băng), CH3COOH, tối thiểu 96 % 4.9 Dung dịch acetonitril/axit acetic băng, acetonitrile (4.7) axit axetic băng (4.8) theo tỷ lệ 99/1 (thể tích) 4.10 Toluene, C6H5CH3, loại phân tích 4.11 Dung dịch Toluene/Axit acetic, Toluene (4.10)/axit axetic băng (4.8) với tỷ lệ 99/1 (thể tích) 4.12 Hydro cacbonat natri, NaHCO3, độ tinh khiết tối thiểu 99 % 4.13 PBS đậm đặc, muối đệm phosphate Hoà tan thành phần sau 1800 ml nước (nước loại TCVN): - g KCl (4.4); - 160 g NaCl (4.5); - 72 g Na2HPO4.12H2O (4.6) 4.14 PBS sẵn sàng để sử dụng Pha loãng 100 ml dung dịch PBS (4.13) đến 1000 ml với nước (nước loại TCVN ) Điều chỉnh pH 7,4 bằng HCl mol/l thêm nước đủ 2000 ml (nước loại TCVN ) Viên nén PBS, viên muối đệm phosphate, Một viên nén PBS hòa tan 200 ml nước (nước loại TCVN ) thu dung dịch đệm phosphat 0,01 mol/lit, kali clorua 0,0027 mol/lit natri clorua 0,137 mol/lit, pH 7,4, 25 °C (ví dụ Sigma P4417) 4.15 Dung dịch nước natri hydro cacbon 3% Cho 30 g natri hydro cacbonat (4.12) vào 1000 ml nước (nước loại TCVN ) 4.16 Dung môi chiết, metanol/dung dịch nước natri hydro cacbonat 3% theo tỷ lệ 50/50 (thể tích) Cho 500 ml metanol (4.1) vào 500 ml dung dịch nước natri hyđro cacbonat 3% (4.15) Trộn 4.17 Dung dịch nước axit axetic băng Cho 30 ml acxit acetic băng (4.8) vào 870 ml nước (nước loại TCVN ) lọc 4.18 Pha động HPLC, acetonitrile/metanol/dung dịch nước axit axetic băng theo tỷ lệ 35/35/30 (thể tích) Trộn 1050 ml metanol (4.2) với 1050 ml acetonitrile (4.7) 900 ml dung dịch nước axit axetic băng (4.17) Trộn khử bọt khí 4.19 OTA, ochratoxin A OTA tinh khiết dạng tinh thể, dạng màng khô, dạng bột dung dịch 4.20 Dung dịch chuẩn OTA gốc Chuẩn bị từ OTA (4.19) dung dịch 20 μg/ml dung dịch toluene/axit axetic (4.11) Để xác định nờng độ xác, thực đo dựng đờ thị mật độ quang dung dịch khoảng bước sóng giữa 300 nm 370 nm dùng cuvet thạch anh cm đối chiếu với dung dịch axit toluene/axitc axetic (4.11), sử dụng máy đo quang phổ UV (5.21) Xác định bước sóng mà có hấp thụ tối đa Tính nờng độ khối lượng OTA, ρota, micrograms mililit bằng cơng thức (1): đó: Amax mức hấp thụ cực đại xác định theo đờ thị hấp thụ (ở đây: bước sóng 333 nm); M khối lượng phân tử mol, tính bằng gam mol, OTA (M = 403,8 g/mol); c hệ số hấp thụ phân tử, tính bằng mét vuông mol, OTA dung dịch toluene/axit axetic (4.11), (ở đây: 544 m2/mol); b chiều dài đường quang cuvet thạch anh, tính bằng cm 4.21 Nitơ 4.22 Dung dịch OTA gốc pha loãng để hiệu chuẩn Chuẩn bị 10 ml dung dịch chuẩn OTA gốc pha loãng để dựng đồ thị hiệu chuẩn bằng cách pha loãng 100 lần dung dịch chuẩn OTA gốc (4.20) với pha động (4.18) Để thực việc này, dùng pipet lấy 100 μl dung dịch OTA gốc cho vào bình (ống) định mức thể tích, làm bay dung dịch gốc bằng cách nhe nhàng thổi nitơ (4.21) 40ºC hoàn thành đủ đến vạch bằng pha động (4.18) CHÚ THÍCH: Để hịa tan hồn tồn OTA pha động, đầu tiên cho pha động vào bình định mức khoảng 1/3 thể tích, làm cho OTA tan sau cho thêm vào đến vạch lắc 4.23 Các dung dịch hiệu chuẩn Từ dung dịch chuẩn OTA gốc pha loãng để hiệu chuẩn (4.22) chuẩn bị sáu dung dịch hiệu chuẩn với nồng độ bằng cách cho thể tích dung dịch chuẩn OTA gốc pha loãng Bảng vào bình định mức hồn thành đủ đến vạch bằng pha động (4.18) Bảng – Các dung dịch hiệu chuẩn (4.23) được khuyến cáo để xác định OTA Thứ tự bình dung dịch OTA gốc pha Thể tích bình định dung dịch hiệu loãng để hiệu chuẩn mức (5.5) chuẩn (4.22) (µl) 50 10,0 250 10,0 500 10,0 10 750 10,0 15 000 10,0 20 250 10,0 25 4.24 IAC với kháng thể đặc hiệu cho OTA Nồng độ OTA (ng/ml) (ml) IAC chứa kháng thể đặc hiệu cho OTA Các cột OTA phải có tổng dung tích không nhỏ 100 ng OTA Mức độ thu hồi OTA không nhỏ 85% áp dụng mức ng OTA 50 ml hỗn hợp gồm phần thể tích dung mơi chiết (4.16) 96 phần thể tích PBS Sẵn sàng để sử dụng (4.14) 4.25 Dung dịch thêm chuẩn OTA dung dịch aceticitril/axit axetic băng theo tỷ lệ 99/1 (v/v) Nồng độ OTA dung dịch thêm chuẩn phụ thuộc vào mức yêu cầu Thể tích dung dịch cấy nên khoảng 500 μl Dung dịch cấy chuẩn bị từ dung dịch chuẩn OTA gốc (4.20) bằng cách tương tự chuẩn bị dung dịch chuẩn OTA pha loãng để hiệu chuẩn (4.22) Thiết bị, dụng cụ Sử dụng trang thiết bị thí nghiệm thơng thường thiết bị, dụng cụ sau: 5.1 Dụng cụ thủy tinh phịng thí nghiệm thơng thường, ống đong định mức, cốc, pipet định mức 5.2 Cân phân tích, cân đến 0,1 mg 5.3 Máy lắc ngang đứng 5.4 Hệ thống hút chân không SPE tự động 5.5 Bình định mức (loại A, TCVN (ISO 1042), ml, 10 ml, 100 ml 5.6 Giấy lọc gấp nếp trước, giữ hạt 30 μm 5.7 Các bình có nút vặn, 250 ml 500 ml 5.8 Phễu thủy tinh, đường kính cm 5.9 Bể chứa, polypropylene, thích hợp để gắn đỉnh cột IAC, dung tích từ 50 đến 75 ml 5.10 Xiranh bằng chất dẻo, ml 5.11 Micropipet hiệu chuẩn, 100 μl, 500 μl 1000 μl (thể tích thay đổi) 5.12 Hệ thống lọc dung môi hút chân không, phù hợp với lọc 47 mm 5.13 Bộ lọc vi sợi thủy tinh, giữ hạt 1,6 μm 5.14 Máy trộn vortex 5.15 Hợp chứa lọc ống bơm HPLC, nylon kích thước lỗ 0,45 μm 5.16 Bể siêu âm 5.17 Lọ thủy tinh màu hở phách, dung tích khoảng ml có nắp vặn tương đương 5.18 Hệ thống HPLC Hệ thống HPLC bao gồm: - Bơm không xung, tốc độ bơm 0,5 ml/min đến 1,5 ml/min; - Hệ thống bơm mẫu, bằng tay lấy mẫu tự động, có kim thích hợp để bơm 100 μl đến 300 μl; - Detector huỳnh quang, thích hợp để đo bước sóng kích thích 333 nm phát xạ 467 nm; - Bộ máy vi tính 5.19 Cợt phân tích HPLC pha đảo, C18 cột -RP phù hợp phép tách hiệu quả OTA từ thành phần khác; Cột có đầy đủ đặc tính kích thước đặc tính pha tĩnh dài 250 mm x đường kính 4,6 mm x kích thước hạt μm 5.20 Cợt trước (cợt bảo vệ), có cùng vật liệu pha tĩnh cột phân tích, đường kính 4,0 mm, pha tĩnh với cỡ hạt μm 5.21 Máy đo quang phổ UV Chuẩn bị mẫu 6.1 Chiết OTA - Cân 25,0 g, xác đến 0,1 g, mẫu thử cho vào hộp chứa đủ lớn có nắp, ví dụ: Bình dung tích 500 ml có nắp vặn xốy (5.67) CHÚ THÍCH 1: Các mẫu đưa nghiên cứu liên phịng thí nghiệm [3] nghiền nhỏ đến kích thước hạt khoảng 0,5 mm - thêm 200,0 ml dung mơi chiết (4.16), đóng chặt nắp lắc mạnh bằng tay vài giây; vật liệu phân tán (kiểm tra trực quan) - đặt hộp chứa lên máy lắc (5.3) 40 min, chọn tốc độ cho thành phần trộn mà khơng tích tụ lại phần bình Giải pháp khác để thay cho máy lắc dùng máy đánh mẫu siêu âm xử lý 15 min; trường hợp lắc nhanh hộp chiết bằng tay vài giây - Để yên mẫu cho lắng xuống sau lắc - Lọc dịch chiết qua giấy lọc gấp nếp (5.6) thu dịch chiết đã lọc đã vào bình có nắp vặn 250 ml (5.7), - Lấy khoảng 10 ml dịch chiết đã lọc cho vào hệ thống lọc hút chân không lọc qua lọc vi sợi thủy tinh (5.13) có sử dụng hút chân không nhe (5.12) Hủy bỏ lượng dịch chiết lọc tất cả phần dịch chiết đã lọc cịn lại thu vào bình có nắp vặn 250 ml (5.7) có dịch chiết xuốt để phân tích tiếp Tiến hành cơng đoạn làm qua cột IAC (6.2) CHÚ THÍCH 2: Khơng sử dụng chân không mạnh lúc bắt đầu lọc để không làm vẩn đục dịch chiết sau lọc 6.2 Làm dung dịch thử - Dùng IAC (cột lực miễn nhiễm 4.24) cho dịch chiết; - Gắn cột vào bể chứa (5.9), không tháo dung dịch bảo quản cột khỏi cột; - Cho 4,00 ml dịch chiết đã lọc hai lần vào bình định mức 100 ml (5.5), hoàn thành đủ đến vạch bằng PBS sẵn sàng để sử dụng (4.14) lắc; - Cho 50,0 ml dịch chiết đã pha loãng vào bồn chứa đã gắn cột IAC; Lượng dịch tương đương với 2,00 ml dịch chiết đã lọc hai lần chưa pha loãng; - Mở lỗ thoát cột IAC; - Cho dịch chiết qua cột IAC nhờ trọng lực với tốc độ dịng chảy ổn định tồn dịch chiết hết qua cột miễn dịch lực mẻ dung môi cuối cùng chạm đáy cột; - Sau dịch chiết đã chảy hết hoàn toàn qua cột, rửa cột IAC bằng 10 ml nước (nước loại TCVN ); đảm bảo rằng nước có pH trung tính; - Thổi khơng khí qua IAC (ví dụ sử dụng ống bơm lớn nối với cột) để thổi nước dư thừa; - Đặt bình định mức (5.5) phía IAC thêm 0,75 ml metanol (4.2) vào IAC; - Thu dịch rửa giải vào bình định mức ml; - Sau những giọt metanol cuối cùng qua IAC, metanol lại IAC khoảng min; sau cho thêm 0,75 ml metanol (4.2) nữa vào cột tiếp tục lấy thu lấy eluate thoát ra, cho thêm 0,50 ml nước (nước loại TCVN ); - Cẩn thận thổi khơng khí qua IAC để thu hời tối đa lượng metanol nước đã thêm vào cột; - Thêm 1,5 ml dung dịch axit acetic băng (4.17) vào bình định mức; - Thêm nước (nước loại TCVN ) vào đầy đến vạch bình định mức lắc bằng máy vortex Trong trường hợp dịch chiết mẫu bị đục, tiến hành lọc dịch thử qua hộp chứa lọc ống bơm HPLC (5.15) với ống bơm nhựa (5.10) Dịch sử dụng trực tiếp dung dịch thử CHÚ THÍCH: Thay cho quy trình lực miễn nhiễm cách làm rửa giải Có thể thực việc bằng chuẩn bị mẫu tự động, với điều kiện thể tích aliquots khơng thay đổi 6.5 Quy trình thêm chuẩn Để xác định độ thu hồi, thêm dung dịch chuẩn OTA gốc vào mẫu thức ăn chăn nuôi không chứa OTA dung dịch pha loãng Mức thêm chuẩn phải phù hợp nồng độ dung dịch sử dụng 500 µl Để yên mẫu thêm chuẩn khoảng 30 để đảm bảo dung môi bay Tiến hành đo 7.1 Điều kiện hoạt động HPLC Sử dụng thiết bị nêu 5.18, điều kiện sau đã chứng minh cho kết quả đạt yêu cầu: - Pha động: 4.18; - Tốc độ dòng: từ 0,7 ml/min đến 1,5 ml/min; - lượng bơm: 100 μl - cột RP-HPLC, (5.19); - cột tiền (cột bảo vệ): C18 (5.20); - detector huỳnh quang: Bước dóng kích thích λ: 333 nm (5.18); - bước sóng phát xạ λ: 467 nm; - Khơng kiểm sốt nhiệt độ 7.2 Xác định OTA dung dịch thử nghiệm Bơm xuất dung dịch hiệu chuẩn (4.23) dung dịch mẫu (6.2) vào máy sắc ký, áp dụng cùng điều kiện hoạt động 7.3 Hiệu chuẩn Dựng đường chuẩn, lấy tín hiệu (diện tích pic chiều cao pic) tất cả dung dịch hiệu chuẩn đã xác định giá trị nồng độ OTA tương ứng Không sử dụng giá trị trung bình nhiều lần bơm Với ước lượng hời qui tuyến tính đờ thị nối điểm tọa độ để vẽ đường đồ thị hiệu chuẩn Thực kiểm tra giao điểm độ tuyến tính 7.5 Nhận biết pic Việc nhận biết pic OTA dung dịch thử bằng cách đối chiếu thời gian lưu dung dịch thử với thời gian lưu dung dịch hiệu chuẩn Tín hiệu (diện tích pic chiều cao pic) OTA dung dịch thử phải nằm khoảng hiệu chuẩn Nếu tín hiệu OTA dung dịch thử vượt tín hiệu cao dung dịch hiệu chuẩn, cần pha loãng dung dịch thử để đưa nồng độ dung dịch thử vào khoảng tuyến tính nờng độ dung dịch hiệu chuẩn sau tiến hành phân tích lại hai lần (bơm mẫu hai lần) Hệ số pha loãng phải hợp lại đưa vào tính tốn sau Xác định nờng đợ Sử dụng độ dốc ước tính giao điểm từ hời quy tuyến tính (7.3) để tính nờng độ OTA (cT (OTA)) dung dịch thử (6.2) sau: Để tính phần khối lượng (cSMP) chất phân tích vật liệu ban đầu, sử dụng cơng thức sau: Trong đó: cT nờng độ tính OTA, đã điều chỉnh theo pha loãng cần (ng/ml); W khối lượng vật liệu thử (mẫu) đã lấy để chiết (25,0 g); Solvent tổng thể tích dung mơi chiết (200,0 ml); Aliquot phần dịch chiết đã sử dụng để rửa cột IAC (2,0 ml), (4 ml/100 ml x 50 ml = ml); Elution thể tích cuối cùng đạt sau tách rửa (elution) từ cột IAC (5,0 ml); Nếu khối lượng vật liệu thử thể tích quy định trước giữ nguyên, phương trình (3) giản lược thnh: cSMP = cT ì 20 (àg/kg) ụ chum (4) 9.1 Nghiên cứu cộng tác Chi tiết việc nghiên cứu liên phịng thí nghiệm độ xác phương pháp thể [1] Các giá trị thu từ nghiên cứu liên phịng thí nghiệm khơng áp dụng cho dải nờng độ mẫu khác với dải nồng độ mẫu đã nêu 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử độc lập, cùng chất liệu thử, cùng kỹ thuật viên thực hiện, sử dụng cùng thiết bị khoảng thời gian ngắn, vượt giới hạn lặp lại r không % trường hợp Bảng – Độ chụm dữ liệu lặp lại x = 39 µg/kg r = 4,54 µg/kg x = 62 µg/kg r = 5,8 µg/kg x = 150 µg/kg r = 18,5 µg/kg x = 240 µg/kg r = 27,7 µg/kg x = 338 µg/kg r = 44,8 µg/kg Mối tương quan giữa r x ước lượng cách đầy đủ bằng công thức sau: r = 2,8 × 0,045 x x có nghĩa độ lệch chuẩn lặp lại tương đối không đổi phạm vi làm việc 9.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử độc lập, cùng chất liệu thử nghiệm hai phịng thí nghiệm khác vượt giới độ tái lập R không quá % trường hợp Bảng – Độ chụm dữ liệu tái lập x = 39 µg/kg R = 14,8 µg/kg x = 62 µg/kg R = 24,9 µg/kg x = 150 µg/kg R = 61,2 µg/kg x = 240 µg/kg R = 93,8 µg/kg x = 338 µg/kg R = 144 µg/kg Mối tương quan giữa R vàx ước lượng cách đầy đủ bằng công thức sau: R = 2,8 × 0,147 x x có nghĩa độ lệch chuẩn tái lập tương đối không đổi phạm vi làm việc 10 Báo cáo kết thử nghiệm Báo cáo kết quả thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để xác định đầy đủ mẫu (loại mẫu, mẫu gốc, mẫu định; b) viện dẫn tiêu chuẩn c) ngày lấy mẫu kiểu loại xử lý mẫu (nếu biết) d) ngày nhận mẫu; e) ngày phân tích; f) kết quả kiểm tra thu đơn vị biểu thị kết quả ; g) độ lặp lại đã kiểm tra; h) tình bất thường quan sát thấy trình thử nghiệm; i) thao tác không qui định phương pháp coi tùy chọn, mà ảnh hưởng đến kết quả Phụ lục A (tham khảo) Ví dụ sắc đồ Hình A.1 – Ví dụ sắc đồ (200g/kg OTA thức ăn chăn nuôi) Phụ lục B (tham khảo) Kết hợp tác nghiên cứu liên phòng thí nghiệm Các dữ liệu nêu Bảng B.1 Bảng B.2 thu nghiên cứu liên phịng thí nghiệm [1] theo Hướng dẫn AOAC cho thủ tục nghiên cứu hợp tác để thẩm định đặc tính phương pháp phân tích [2], [3] Mẫu thử mơ tả Bảng B.3 Bảng B.1 – Đặc tính hiệu từ nghiên cứu hợp tác OTA thức ăn chăn nuôi Chỉ tiêu Bộ mẫu (nc = ô nhiễm tự nhiên) Ochratoxin A Năm thực nghiên cứu hợp tác 4(nc) 5(nc) 6(nc) 2007 Số phịng thí nghiệm 29 Số lượng mẫu (mẫu kép) 1 1 1 Số phịng thí nghiệm cịn lại sau loại bỏ 29 28 26 28 29 29 Số phịng thí nghiệm ngoại lệ n.a 0 Số kết quả chấp nhận 29 28 26 28 29 29 Giá trị trung bình (µg/kg) n.d 62 240 39 150 338 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, (µg/kg) n.a 2,07 9,91 1,62 6,60 16,6 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr, (%) n.a 3,33 4,12 4,15 4,40 4,47 Giới hạn độ lặp lại r, (r = 2,8 x sr) (µg/kg) n.a 5,80 27,7 4,54 18,5 44,8 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, (µg/kg) n.a 8,90 33,5 5,30 21,9 51,2 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, (%) n.a 14,3 13,9 13,6 14,6 15,2 HORATR (Tính tốn sửa đổi theo n.a 0,6 0,7 0,6 0,7 0,8 n.a 24,9 93,8 14,8 61,3 143 - 82 79 - - - ngoại lệ Thompson [4]) Giới hạn tái lập, R (R = 2,8 x sR) (µg/kg) Độ thu hời (%) Bộ mẫu mẫu trắng; mẫu tăng cường; mẫu 4, bị ô nhiễm tự nhiên; n.d = không phát Mức báo cáo cho N.D (hoặc "nhỏ hơn" < LOD) có khác từ LOD đạt trường hợp; n.a = không áp dụng Bảng B.2 - Đặc tính hiệu từ nghiên cứu hợp tác OTA thức ăn chăn nuôi (đã hiệu chính độ thu hồi - chỉ để biết thông tin) Chỉ tiêu Bộ mẫu (nc = ô nhiễm tự nhiên) Ochratoxin A 4(nc) Năm thực hợp tác nghiên cứu 5(nc) 6(nc) 2007 Số phịng thí nghiệm 29 Số lượng mẫu (mẫu đúp) 1 Số phịng thí nghiệm cịn lại sau trừ ngoại lệ 26 29 30 Số phịng thí nghiệm ngoại lệ Số kết quả chấp nhận 26 29 30 Giá trị trung bình (µg/kg) 48,7 186 420 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr (µg/kg) 1,76 8,90 19,1 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSDr, (%) 3,61 4,79 4,55 Giới hạn lặp lại r, (r = 2,8 x sr) (µg/kg) 4,93 24,9 53,5 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, (µg/kg) 2,73 10,1 26,8 HORATR (Tính toán sửa đổi theo Thompson [4]) 0.3 0.3 0.4 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, (%) 5,60 5,46 6,38 Giới hạn tái lập, R (R = 2,8 x sR) (µg/kg) 7,64 28,3 75,0 CHÚ THÍCH: Các mẫu 4, bị ô nhiễm tự nhiên Các kết quả thể kết quả sau đã hiệu chỉnh cho độ thu hồi với giá trị thu hời trung bình từ mẫu mẫu (xem Bảng A) Thông tin đã bổ sung hồn tồn mục đích kiểm sốt Kết quả phải so sánh với sở điều chỉnh thu hồi Bảng B.3 - Thành phần vật liệu thử nghiệm thử nghiệm hợp tác [1] Vật liệu thử Thành phần số lượng (%) 1-3 Lúa mạch 26 %, Gạo 19 %, Hạt lanh %, Đậu nành 11 %, Bột ngô 25 %, Củ cải đường 11 % 4(nc) Mảnh yến mạch 10 % Lúa mạch % Củ cải đường % Bột ngô 54 % Hạt lanh % Gạo 24 % 5(nc) Lúa mạch 12 % củ cải đường 17 % Bột ngô 23 % Đậu nành 31 % Gạo 17 % 6(nc) Lúa mạch % Bánh sơ củ cải đường 14 % Bột ngô 40 % Hạt lanh % Gạo 14 % Mảnh ngũ cốc 22 % Thư mục tài liệu tham khảo [1] Stroka, J., Ambrosio, M., Donchva, I., Lerda, D., Mischke, C., Breidbach, A., (2009) Validation of an Analytical Method to Determine the Content of Ochratoxin A in Animal Feed - Report EUR 23657 EN -ISBN 978-92-79-11063-4, LA-NA-23657-EN-C, 10.2787/94797, JRC49205, European Commission, Brussels, Belgium [2] AOAC International 1995, AOAC Official Methods Program, p 23-51 [3] Horwitz, W (1995), Pure and Applied Chemistry, 67, p 331-343 [4] Thompson, M (2000), Analyst, 125 p 385-386 [1] Stroka, J., Ambrosio, M., Donchva, I., Lerda, D., Mischke, C., Breidbach, A., (2009) Thẩm định phương pháp phân tích để xác định hàm lượng Ochratoxin A thức ăn chăn nuôi - Báo cáo EUR 23657 EN-ISBN 978-92-79-11063-4, LA-NA-23657-EN-C, 10.2787 / 94797, JRC49205, Ủy ban Châu Âu, Brussels, Bỉ [2] AOAC International 1995, Chương trình Phương pháp thức AOAC, trang 23-51 [3] Horwitz, W (1995), Hóa học thuần túy Ứng dụng, 67, trang 331-343 [4] Thompson, M (2000), Phân tích, 125 trang 385-386