...
Hình 1.1. Cấu tạo phân tử DNA tái tổ hợp
1.3. Quy trình tạo DNA tái tổ hợp
Quy trình công
nghệ tạo DNA tái tổ
hợp gồm 4 bước:
- Tách đoạn gen.
- Ghép đoạn gen với
vector.
- Nhân dòng phân tử ... Khái niệm
DNA tái tổ hợp là một
phân tử DNA nhỏ, được
lắp ráp từ các đoạn DNA
lấy từ thể truyền và gen
cần chuyển.
Năm 1973, Staley Cohen
và Annie Chang đã tạo ra
những phân tử...
... vector này vào E. coli (chủng K12 71/18 hoặc JM 103 cho các vector
pUR, chủng M5219 cho các vector pEX). Kiểm tra các khuẩn lạc đơn mang đoạn DNA ngoại lai mong
muốn bằng cách tách chiết DNA (DNA ... thao tác tiếp theo của cDNA. Do tính linh hoạt của chúng, các vector này thay thế cho lgt10 và
lgt11 và được xem là vector thích hợp để xây dựng các thư viện cDNA. Vector lZAPII cũng tương...
...
đoạn cDNA nhờ DNA ligase sẽ được cắt hạn chế để tạo ra đầu so le tương đồng với hai
đầu của vector. Phản ứng gắn giữa đoạn cDNA có mang linker ở hai đầu với vector cũng
được xúc tác nhờ DNA ligase.
Lysosome. ... chuỗi xoắn kép DNA- DNA, DNA- RNA hoặc
RNA-RNA thông qua các mối liên kết hydrogen. Sự bắt cặp đó mang tính đặc hiệu:
guanine bắt cặp với cytosine, còn adenine bắt cặp với...
... cho kỹ thuật DNA tái tổ hợp sau này.
Nối sai
Nối sai
DNA sẽ được
xen vào
DNA được cắt
vớiEcoRI
Các đầu dính
Tái tổ hợp DNA
+ DNA ligase
DNA
tái tổ hợp
Hình 10.3 Hai phân tử DNA khác nhau ... được gọi là DNA ngoại lai (foreign DNA) .
2.2. Hai loại vector thông dụng
Vector là phân tử DNA có kích thước bé hoặc vừa phải, đóng vai trò là
vật trung gian mang truyền đo...
... mapping).
2. Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA
Đoạn DNA được tổng hợp dựa trên khuôn mẫu mRNA được gọi là
cDNA (complementary DNA) . ba
như sau:
- .
- - 2 (Mg
2+
.
- .
mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... tích DNA) .
AAAAAA 3’ mRNA
AAAAAA 3’ mRNA
TTTTTT 5’ sợi cDNA thứ nhất
TTTTTT 5’
AAAAAA 3’
TTTTTT 5’
AAAAAA 3’
TTTTTT 5’ cDNA sợi đôi
Nuclease S1
DNA polymerase I
Tổng hợp...
...
Hình 2.8. Vector EMBL 3. Vector này được thiết kế từ phage mang các vị trí
nhận biết cho ba enzyme SalI, BamHI và EcoRI.
3. Gắn đoạn DNA vào vector
3.1. Gắn các đoạn cDNA
đư
, chẳng ...
(homopolymetric tailing)
(linkers và adapter)
.
vector. Sợi đ
(ví dụ: đoạn Klenow của DNA polymerase
I của E. coli
ase 3’ -
(polymerase 5’ 3’
.
.
3.1.2. Các adapter
vector DNA ....
... cho kỹ thuật DNA tái tổ hợp sau này.
Nối sai
Nối sai
DNA sẽ được
xen vào
DNA được cắt
vớiEcoRI
Các đầu dính
Tái tổ hợp DNA
+ DNA ligase
DNA
tái tổ hợp
Hình 10.3 Hai phân tử DNA khác nhau ... được gọi là DNA ngoại lai (foreign DNA) .
2.2. Hai loại vector thông dụng
Vector là phân tử DNA có kích thước bé hoặc vừa phải, đóng vai trò là
vật trung gian mang truyền đo...
... cho kỹ thuật DNA tái tổ hợp sau này.
Nối sai
Nối sai
DNA sẽ được
xen vào
DNA được cắt
vớiEcoRI
Các đầu dính
Tái tổ hợp DNA
+ DNA ligase
DNA
tái tổ hợp
Hình 10.3 Hai phân tử DNA khác nhau ... được gọi là DNA ngoại lai (foreign DNA) .
2.2. Hai loại vector thông dụng
Vector là phân tử DNA có kích thước bé hoặc vừa phải, đóng vai trò là
vật trung gian mang truyền đo...