sản xuất protease từ bacillus subtilis s5

sản xuất protease từ bacillus subtilis s5 tài liệu, giáo án, bài giảng , luận văn, luận án, đồ án, bài tập lớn về tất cả...

MỞ ĐẦU: -Protease là nhóm enzyme được ứng dụng nhiều trong lĩnh vực như: Nông nghiệp, Công nghiệp, Thực phẩm -Nghiên cứu về protease vẫn còn là một lĩnh vực mới mẻ nhưng có rất nhiều triển vọng ở nước ta. -Có thể thu nhận protease từ nhiều nguồn khác nhau như từ thực vật, từ nội tạng động vật, từ vi sinh vật. Trong đó thu nhận protease từ vi sinh vật nhất là từ vi khuẩn Bacilus Subtilis có nhiều triển vọng vì B.subtilis có khả năng sản xuất protease có hoạt tính cao và có nhiều ưu thế hơn hẳn. I/ TỔNG QUAN: 1/Sơ lược về vi khuẩn B.Subtilis: Giới: Bacteria Ngành: Firmicutes Lớp: Bacilli Bộ: Bacillales Họ: Bacillaceae Chi:Bacillus B. subtilis là trực khuẩn Gram dương có kích thước 2-3 x 0,7-0,8 µm, nội bào tử ở trung tâm có kích thước 1,5-1,8 x 0,8µm. Trực khuẩn có ở mọi nơi trong tự nhiên và khi điều kiện sống gay go, chúng có khả năng tạo ra bào tử gần như hình cầu, để tồn tại trong trạng thái "ngủ đông" trong thời gian dài. Ở điều kiện 100 o C, bào tử của B.subtilis chịu được 180 phút, có tính ổn định cao với nhiệt độ thấp và sự khô cạn, tác động của hóa chất, tia bức xạ. Loại sinh vật này có cực kỳ nhiều loài khác nhau, trong đó đa số là vô hại. Bacillus là vi khuẩn catalase dương tính, sử dụng khí oxy làm chất nhận electron khi trao đổi khí trong quá trình trao đổi chất. Qua kính hiển vi Bacillus đơn lẻ có hình dạng giống những chiếc que, phần lớn những chiếc que này có bào tử trong hình oval có khuynh hướng phình ra ở một đầu. Thường thì người ta quan sát thấy tập đoàn của giống sinh vật này rất rộng lớn, có hình dạng bất định và đang phát triển lan rộng. Hai loài được xem là quan trọng về mặt y học là Bacillus anthracis (gây ra anthrax) và Bacillus cereus (có thể gây ra một dạng bệnh từ thực phẩm tương tự Staphylococcus). Hai loài nổi tiếng làm hỏng thức ăn là Bacillus subtilis và Bacillus coagulans. B. subtilis là một sinh vật hiếu khí sống ký sinh có bào tử có thể sống sót trong độ nóng cùng cực thường thấy khi nấu ăn. Nó chính là tác nhân làm cho bánh mì hư. B. coagulans có thể phát triến đến tận mức và gây ra vị chua nặng ở thức ăn đóng hộp bị ôi (bao gồm cả các thức ăn có tính acid mà bình thường có thể khống chế sự phát triển của đa số vi khuẩn ở mức thấp nhất). Ấu trùng Paenibacillus gây ra các chứng bệnh của ong mật ở ong mật. 2/Giới thiệu chung về protease: Cấu trúc của protease Protease cần thiết cho các sinh vật sống, rất đa dạng về chức năng từ mức độ tế bào, cơ quan đến cơ thể nên được phân bố rất rộng rãi trên nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm và virus) đến thực vật (đu đủ, dứa ) và động vật (gan, dạ dày bê ). So với protease động vật và thực vật, protease vi sinh vật có những đặc điểm khác biệt. Trước hết hệ protease vi sinh vật là một hệ thống rất phức tạp bao gồm nhiều enzyme rất giống nhau về cấu trúc, khối lượng và hình dạng phân tử nên rất khó tách ra dưới dạng tinh thể đồng nhất. Nhóm enzyme protease xúc tác quá trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit (-CO- NH-)n trong phân tử protein, polypeptit đến sản phẩm cuối cùng là các axit amin. Mô hình enzyme Protease thủy phân phân tử Protein Sơ đồ phân loại protease Protease được phân chia thành hai loại: endopeptidase và exopeptidase. * Dựa vào vị trí tác động trên mạch polypeptide, exopeptidase được phân chia thành hai loại: + Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu N tự do của chuỗi polypeptide để giải phóng ra một amino acid, một dipeptide hoặc một tripeptide. + Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu C của chuỗi polypeptide và giải phóng ra một amino acid hoặc một dipeptide. * Dựa vào động học của cơ chế xúc tác, endopeptidase được chia thành bốn nhóm: + Serin proteinase: là những proteinase chứa nhóm –OH của gốc serine trong trung tâm hoạt động và có vai trò đặc biệt quan trọng đối với hoạt động xúc tác của enzyme. Nhóm này bao gồm hai nhóm nhỏ: chymotrypsin và subtilisin. Nhóm chymotrypsin bao gồm các enzyme động vật như chymotrypsin, trypsin, elastase. Peptidase (Protease) (E.C.3.4) Exopeptidase (E.C. 3.4.11-17) Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) Aminopeptidase Carboxypeptidase Serine proteinase Cystein proteinase Aspartic proteinase Metallo proteinase Nhóm subtilisin bao gồm hai loại enzyme vi khuẩn như subtilisin Carlsberg, subtilisin BPN. Các serine proteinase thường hoạt động mạnh ở vùng kiềm tính và thể hiện tính đặc hiệu cơ chất tương đối rộng. + Cysteine proteinase: Các proteinase chứa nhóm –SH trong trung tâm hoạt động. Cystein proteinase bao gồm các proteinase thực vật như papayin, bromelin, một vài protein động vật và proteinase ký sinh trùng. Các cystein proteinase thường hoạt động ở vùng pH trung tính, có tính đặc hiệu cơ chất rộng. + Aspartic proteinase: Hầu hết các aspartic proteinase thuộc nhóm pepsin. Nhóm pepsin bao gồm các enzyme tiêu hóa như: pepsin, chymosin, cathepsin, renin. Các aspartic proteinase có chứa nhóm carboxyl trong trung tâm hoạt động và thường hoạt động mạnh ở pH trung tính. + Metallo proteinase: Metallo proteinase là nhóm proteinase được tìm thấy ở vi khuẩn, nấm mốc cũng như các vi sinh vật bậc cao hơn. Các metallo proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính và hoạt độ giảm mạnh dưới tác dụng của EDTA. Ngoài ra, protease được phân loại một cách đơn giản hơn thành ba nhóm: - Protease acid: pH 2-4 - Protease trung tính: pH 7-8 - Protease kiềm: pH 9-11 Protease của động vật hay thực vật chỉ chứa một trong hai loại endopeptidase hoặc exopeptidase, riêng vi khuẩn có khả năng sinh ra cả hai loại trên, do đó protease của vi khuẩn có tính đặc hiệu cơ chất cao, cho sản phẩm thuỷ phân triệt để và đa dạng, chúng có khả năng phân hủy tới 80% các liên kết peptide trong phân tử protein. Các protease trung tính tạo ra dịch thủy phân protein thực phẩm ít đắng hơn so với protease động vật và tăng giá trị dinh dưỡng, có khả năng ái lực cao đối với các amino acid ưa béo và thơm. 3/Đặc tính của enzyme protease chiết tách từ B.subtilis S5: Khối lượng phân tử 20.000-30.000. Protease của Bacillus ưa kiềm có điểm đẳng điện bằng 11. Ổn định trong khoảng pH 6-12 và hoạt động trong khoảng pH rộng 7-12 . Có pHopt :6.0÷6.5, topt: 55 o C và không bền ở nhiệt độ từ 60 o C trở lên. Muối ăn có thể làm giảm hoạt tính của protease B.Subtilis S5 và nồng độ muối ăn càng cao thì mứa độ giảm hoạt tính càng mạnh. Các chất làm giảm hoạt độ của protease DC (dịch chiết ) và CPE (chế phẩm enzyme ) là: Zn 2+ , Cd 2+ , Ba 2+ , Cu 2+ , Pb 2+ , Hg 2+ , CN - , H 2 O 2 , EDTA, trong đó Hg 2+ và EDTA làm giảm tới trên 90%, còn Mg 2+ và Mn 2+ làm tăng nhẹ hoạt độ CPE, 2- Mecraptoethanol và L-cystein làm tăng rõ rệt hoạt độ của protease CPE nhưng ảnh hưởng rất ít đến hoạt độ protease DC. Protease CPE tủa bởi ethanol nồng độ 75%. Protease B.Subtilis S5 kém bền với nhiệt so với các protease tứ thực vật và bển hơn protease nấm mốc. 4/Phương pháp và điều kiện nuôi cấy: a/Phương pháp: Nuôi cấy bán rắn trong điều kiện có thông gió và giữ ẩm theo ba phương pháp: • Phương pháp 1: bề mặt khay nuôi không phủ vải ẩm • Phương pháp 2: bề mặt các khay nuôi được phủ vải ẩm • Phương pháp 3: bề mặt khay nuôi phủ vải ẩm và sau bốn giờ nuôi phun hơi nước qua máy thổi khí vào phòng nuôi để tạo độ ẩm Ảnh hưởng của phương pháp giữ ẩm tới hoạt độ protease B.Subtilis S5 thu được trong canh trường . Từ kết quả trên ta thấy phương pháp phủ vải ẩm trên bề mặt canh trường nuôi và phủ vải ẩm là phương pháp thích hợp nhằm giữ ẩm cho canh trường nuôi B.Subtilis S5 để sản xuất protease. b/Điều kiện nuôi cấy: Môi trường nuôi cấy: Bột bắp, cám gạo, khô dầu lạc và khoáng chất như:NaCl, CaCO 3 , DAP. Nhiệt độ nuôi ban đầu là 30-32 o C. Ảnh hưởng của thông gió tới hoạt độ protease thu được. Thời gian (giờ) 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 Hoạt độ protease ( UI/g ) 5.0 8.0 12.5 17.5 23.5 31.5 33.2 33.1 32.0 29.5 Ảnh hưởng của thời gian tới hoạt độ protease thu được. Thời gian nuôi cấy 41 giờ trong điều kiện thông gió và giữ ẩm. pH: 7 II/QUY TRÌNH: Phương pháp Hoạt độ protease ( UI/g canh trường) Trạng thái của canh trường 1 20.2 Bề mặt canh trường bị khô, nứt, vi khuẩn mọc trắng phía dưới còn ở phía trên thì không mọc. 2 21.1 Tương tự như trên 3 28.2 Bề mặt canh trường không bị khô, khối canh trường nóng, ẩm, mềm, vi khuẩn mọc trắng cả trên và dưới. Phương pháp Hoạt độ protease ( UI/g canh trường) Trạng thái của canh trường Không thông gió 19.3 Nhiệt độ canh trường nuôi có thể lên đến 55 o C, vi khuẩn phát triển kém, canh trường rời rạc. Thông gió 28.6 Nhiệt độ canh trường nuôi tối đa lên tới 45 o C, vi khuẩn mọc trắng cả trên và dưới, canh trường dẻo dính. 1/Quy trình: Gồm 2 giai đoạn: Giai đoạn nuôi cấy và giai đoạn tinh sạch. Giai đoạn nuôi cấy và thu canh trường Protease Nước 80% so với nguyên liệu Bột bắp+khô dầu lạc+cám gạo Khoáng hỗn hợp Hấp 100 o C trong 2 giờ Làm nguội đến 37 o C Đổ lên khay Nuôi 41 giờ ở nhiệt độ Đánh tơi Thu bột canh trường chứa protease Xay mịn Giống B.Subtilis S5 dùng để sx enzyme Giống B.Subtilis S5 S5 Hoạt hóa giống Nhân giống Sấy khô ở 50 o C Chế phẩm enzyme thô đem sử dụng Bã Thức ăn gia súc Ethanol 75% Enzyme bán tinh khiết Nước 4-5 phần Nghiền mịn Trích ly Lọc Kết tủa Thu nhận kết tủa Sấy kết tủa Sắc kí lọc gel Enzyme tinh khiết bột canh trường chứa protease Quá trính tinh sạch enzyme Chất trợ nghiền Giải thích quy trình: a/nuôi cấy: Nhân giống B.Subtilis S5: giống B.Subtilis S5 phân lập từ tự nhiên và được bảo quản ở 5 o C trên môi trường giữ giống có thành phần: agar 2%, cao thịt 0,5%, peptone 0,5%, NaCl 0,25%. Chuyển giống B.Subtilis S5 vào môi trường hoạt hóa có thành phần: agar 2%, cao thịt 0,5%, pepton 0,5%, NaCl 0,25%, tinh bột 1% và nước chiết giá đậu xanh(200g/lít). Sau khi hoạt hóa 48 giờ, cấy giống sang môi trường nhân giống có thành phần: dịch chiết cám 20%, dịch thủy phân khô dầu lạc 10%, NaCl 0,36%, MgSO 4 0,05%, CaCO 3 0,6%, pH = 7.Trước khi cấy giống, hấp và khử trùng môi trường nhân giống bằng hơi bão hòa ở áp suất 1atm trong thời gian 30 phút. Quá trình nhân giống tiến hành trên máy lắc với tốc độ 200 vòng/phút, sau 24 giờ kiểm tra giống đang lắc cấy trên môi trường hoạt hóa sau 24 giờ thấy giống mọc tốt, đều không có khuẩn lạc là được. Sau khi nhân giống ly tâm thu B.Subtilis S5 dùng để sản xuất enzyme. Sản xuất protease từ B.Subtilis S5: Môi trường nuôi B.Subtilis S5 sản xuất protease (152,19kg/mẻ) có thành phần như sau: bột bắp xay mịn 70kg, cám gạo 30kg, khô dầu lạc (45% protein) 50kg, NaCl 540g, CaCO 3 900g, DAP 750g, pH = 7. Khoáng DAP pha trong 80% nước so với nguyên liệu, điều chỉnh pH= 7, trộn với nguyên liệu sau đó hấp ở 100 o C trong 2 giờ, làm nguội đến nhiệt độ 37 o C và cấy giống theo tỉ lệ 5% so với nguyên liệu. Sau khi đã trộn giống, môi trường được trải đều ra các khay với chiều dài 2-3cm, mỗi khay khoảng 12 kg, rồi được đưa vào phòng nuôi cấy, đặt trên những giá đỡ. Các giá đỡ này được thiết kế sao cho lượng không khí được lưu thông thường xuyên. Phòng nuôi cấy phải có hệ thống điều chỉnh nhiệt độ và độ ẩm không khí. Trong quá trình nuôi cấy, ta hoàn toàn không cần điều chỉnh pH. Môi trường bán rắn là môi trường tĩnh nên sự thay đổi pH ở một vùng nào đó ít khi ảnh hưởng đến toàn bộ khối môi trường. Trong quá trình sản xuất bề mặt các khay nuôi được phủ vải ẩm và sau 4 giờ nuôi bắt đầu phun hơi nước để tạo độ ẩm cho phòng nuôi vào khoảng 90÷100%. Nuôi trong điệu kiện thông gió với mục đích đuổi CO 2 , giải nhiệt và cung cấp oxy cho vi khuẩn. Sau 41 giờ nuôi ở nhiệt độ phòng thu canh trường chứa enzyme. b/thu nhận sản phẩm: Kết thúc quá trình nuôi cấy ta thu nhận được bột canh trường chứa enzym protease, chế phẩm này được gọi là chế phẩm enzym thô (vì ngoài thành phần enzym ra, chúng còn chứa sinh khối VSV, thành phần môi trường và nước trong môi trường). Để đảm bảo cho chế phẩm enzym protease không bị mất hoạt tính nhanh người ta thường sấy khô chế phẩm enzym đến một độ ẩm thấp ( thiết bị sấy thường dùng ở đây là máy sấy chân không). Độ ẩm cần đạt được sau khi qúa trình sấy kết thúc là nhỏ hơn10% độ ẩm. Để đảm bảo hoạt tính enzym không thay đổi người ta thường sấy ở nhiệt độ 38-40 o C . Enzyme protease của B.Subtilis sẽ bị bất hoạt nếu nhiệt độ lên đến 60-70 o C. Tùy theo mục đích sử dụng ta có thể dùng chế phầm thô này ngay không cần phải quá trình tinh sạch. Trong những trường hợp cần thiết khác, ta phải tiến hành làm sạch enzym. Để sản xuất enzym tinh khiết người ta phả tiến hành như sau: Toàn bộ khối lượng enzym thô protease được đem đi nghiền nhỏ.Mục đích của qúa trình nghiền là vừa phá vỡ thành tế bào vừa làm nhỏ các thành phần của chế phẩm thô. Khi thành tế bào được phá vỡ ,các enzym nội bào chưa thoát ra khỏi tế bào sẽ dễ dàng thoát khỏi tế bào. Phần lớn enzym protease ngoại bào khi được tổng hợp và thoát khỏi tế bào ngay lập tức thấm vào thành phần môi trường. Khi ta nghiền nhỏ, enzym thoát ra khỏi các thành phần này dễ dàng hơn. Trong khi nghiền người ta thường sử dụng những chất trợ nghiền trong trường hợp này đượcdùng là cát thạch anh và bột thủy tinh. Các chất này là những chất vô cơ không tham gia vào phản ứng và khả năng tăng mức độ ma sát trước khi sử dụng cát thạch anh và bột thủy tinh phải được rửa sạch, sấy khô ở nhiệt độ lớn hơn 100 o C để loại bỏ nước và tiêu diệt VSV. c/Trích ly: Sau khi nghiền mịn, người ta cho nước vào để trích ly enzym protease. Các loại enzyme thủy phân có khả năng tan trong nước nên người ta thường dùng nước như một dung môi hòa tan. Cứ một phần chế phẩm enzym thô, người ta cho 4-5 phần nước, khuấy nhẹ và sau đó lọc lấy dịch, phần bã thu riêng dùng làm thực phẩm gia súc ( chú ý cần loại bỏ cát thạch anh và bột thủy tinh ra khỏi hỗn hợp bã rồi mới cho gia súc ăn). Dịch thu nhận được vẫn ở dạng chế phẩm enzym thô vì trong đó có chứa nước, các chất hòa tan khác từ khối môi trường nuôi cấy. Việc tiếp theo là làm sao tách enzym ra khỏi vật chất này. d/Quá trình kết tủa enzym protease: Để làm việc trên người ta tiến hành kết tủa enzym nhờ những tác nhân gây tủa.Trong công nghệ tinh chế enzym, người ta thường dùng cồn và sunfat amon. Hai tác nhân kết tủa này dễ tìm kiếm và giá rẻ so với những tác nhân gây tủa khác. Trong khi tiến hành kết tủa, người ta phải làm lạnh cả dung dịch enzym thô và cả những tác nhân kết tủa để tránh làm mất hoạt tính enzym. Khi đổ chất làm kết tủa enzym vào dung dịch enzym thô phải hết sức từ từ để tránh hiện tượng biến tính. Trong qúa trình kết tủa người ta dùng cồn hoặc sulfat amon với liều lượng như sau: Cứ một phần dung dịch enzym thô người ta cho 2 đến 2,5 lần cồn hoặc sulfat amon. Khi cho chất kết tủa vào dung dich enzym thô, người ta tiến hành khuấy nhẹ, sau đó để yên trong điều kiện nhiệt độ lạnh (thường từ 4-7 o C) theo thời gian, các enzym sẽ được tạo kết tủa và lắng xuống đáy, người ta tiến hành gạn và lọc thu nhận kết tủa ở dạng paste (độ ẩm lớn hơn 70%W). Ở trạng thái này enzym rất dễ bị biến tính vì còn nhiều nước để dễ bảo quản người ta sấy kết tủa enzyme protease ở 40 o C cho đến khi độ ẩm cuối cùng đạt 5-8% W ( thiết bị sấy thường dùng là máy sấy phun sương). Trong nhiều trường hợp chế phẩm enzym protease ở dạng kết tủa vẫn hoàn toàn chưa sạch về mặt hóa học vì trong đố còn chứa 1 số enzym ngoài enzym ta quan tâm. Máy sấy phun sương Máy sấy chân không e/Tách enzyme: Đã tách chế phẩm protease B.Ssubtilis S5 qua cột lọc gel sephadex G-75 thu được bốn đỉnh protein kí hiệu: I, II, III, IV và xác định đặc tính của protease tách được như sau: Tóm tắt quá trình tinh sạch protease Sau khi qua cột lọc gel thu được hai dỉnh chính có hoạt độ protease là P-I và P-II , trong đó P-II chiếm tới 84,3% hoạt độ lên cột và có độ tinh sạch gấp 15 lần DC ban đầu. Kết quả nghiên cứu cho thấy ion Ca 2+ và Mg 2+ ở nồng dộ 10 -3 M làm giảm hoạt độ P-I, nhưng Ca 2+ lại không ảnh hưởng đén hoạt độ P-II. Mn 2+ không ảnh hưởng tới hoạt độ P-I nhưng lại tăng hoạt độ P-II P-II có pH opt là 6,0 và t opt 55 o C.Các chất làm giảm hoạt độ P-II là: Zn 2+ , Cd 2+ , Ba 2+ , Cu 2+ , Hg 2+ , CN - , Fe 2+ , H 2 O 2 và EDTA, trong đó Hg 2+ , H 2 O 2 và EDTA làm giảm Mẫu Protein(mg) Hoạt độ protease Độ sạch (lần) UI % Hoạt độ riêng (UI/mg protein) Được 192.55 8.28 100.00 0.043 1.0 CPE 21.33 6.63 80.07 0.311 7.2 P-I 1.48 0.18 2.17 0.122 2.8 P-II 8.69 5.59 67.51 0.643 15.0 [...]... Trong cơng nghiệp sữa, protease được dùng trong sản xuất phomat nhờ hoạt tính làm đơng tụ sữa của chúng Protease từ một số vi sinh vật như A candidus, P roquerti, B mesentericus,… được dùng trong sản xuất pho mát Trong cơng nghiệp sản xuất bánh mì, bánh quy protease làm giảm thời gian trộn, tăng độ dẻo và làm nhuyễn bột, tạo độ xốp và nở tốt hơn Trong sản xuất bia, chế phẩm protease có ý nghĩa quan... cả các protease bổ sung vào chất tẩy dùng trên thị trường đều là serine protease được sản xuất từ các chủng Bacillus (Rao et al., 1998; Thangam and S., 2002), và chủ yếu là từ B subtilis Trên thế giới, mỗi năm người ta đã sử dụng 89% enzyme này cho ngành cơng nghiệp tẩy rửa Trong đó hai cơng ty lớn là Novo Nordisk và Genencor Internatinal mỗi năm đã cung cấp cho tồn cầu hơn 95% lượng enzyme protease. .. thủy phân dùng làm chất dinh dưỡng, chất tăng vị trong thực phẩm và sản xuất một số thức ăn kiêng Trong chế biến thuỷ sản: Khi sản xuất nước mắm (và một số lồi mắm) thường thời gian chế biến thường là dài nhất, hiệu suất thuỷ phân (độ đạm) lại phụ thuộc rất nhiều địa phương, phương pháp gài nén, ngun liệu cá Nên hiện nay quy trình sản xuất nước mắm ngắn ngày đã được hồn thiện trong đó sử dụng chế phẩm... phosphaste hoặc sulphate Protease và tạp chất PEG PPB Trộn đều Sau khi phân tách PEG: polyethylene glycol PPB: potassium phosphate buffer          tạp chất Phương pháp tách hệ hai pha nước Kết quả ngiên cứu cho thấy: Nước cất là dung mơi thích hợp nhất để chiết rút protease Dùng ethanol ở nồng độ 75% để tủa thu chế phẩm protease Có thể bảo quản chế phẩm protease từ B .Subtilis S5dưới dạng đơng khơ... trắng Sản xuất keo động vật, chất giặt tổng hợp để giặt tẩy các chất bẩn protein, sản xuất mỹ phẩm,… 4/Trong chăn ni: Protease của nấm mốc và vi khuẩn phối hợp với amylase tạo thành hỗn hợp enzyme dùng làm thức ăn gia súc có độ tiêu hóa cao, có ý nghĩa lớn trong chăn ni gia súc và gia cầm 6/Chất tẩy rửa: Protease là một trong những thành phần khơng thể thiếu trong tất cả các loại chất tẩy rửa, từ chất... cho việc bổ sung protease nào vào chất tẩy rửa là pI của chúng Một protease phù hợp khi pI của nó trùng với pH của dung dịch chất tẩy rửa Subtilisin đáp ứng được đầy đủ những u cầu khắt khe trên Chất tẩy rửa đầu tiên có chứa enzyme vi khuẩn được sản xuất vào năm 1956 với tên BIO-40 Đến năm 1963, Novo Industry A/S đã giới thiệu alcalase dưới tên thương mại là BIOTEX được chiết xuất từ B licheniformis... mềm thịt (enzyme, muối, bột ngọt) • Tiêm dung dịch enzyme vào thịt • Tiêm dung dịch enzyme vào con vật trước khi giết mổ Sử dụng protease để sản xuất dịch đạm: từ Streptomyces fradiae tách được chế phẩm keratineza thuỷ phân được keratin rất có giá trị để sản xuất dịch đạm từ da, lơng vũ Nếu dùng axit để thuỷ phân sẽ mất đi hồn tồn các axit amin chứa lưu huỳnh, nếu dùng kiềm để thuỷ phân sẽ bị raxemic... 1994) Sản xuất thuốc Sản xuất xà phòng TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT 1 Trần Xn Ngạch (2007), Cơng nghệ enzym, Trường Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng 2 Nguyễn Trọng Cẩn, Nguyễn Thị Hiền, Đỗ Thị Giang, Trần Thị Luyến (1998), Cơng nghệ enzyme, Nhà xuất bản nơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh 3 Lương Đức Phẩm (2004), Cơng nghệ vi sinh vật, Nhà xuất bản Nơng nghiệp, Hà Nội 4 Lưu Thị Nguyệt Minh(2007), “Phân tách Protease. .. vi sinh vật để sản xuất vaccine, kháng sinh, Do protease kiềm từ Bacillus được tạo thành với lượng lớn, có đặc tính bền vững, hoạt động tốt với nhiệt độ và pH cao nên chúng được ứng dụng ở nhiều ngành cơng nghiệp khác nhau như: xử lý phim X-quang đã qua sử dụng để nhằm thu hồi bạc (Fujiwara et al., 1991; Ishikawa et al., 1993), làm nước mắm cá (Rebeca et al., 1991), xử lý chất thải từ động vật giáp... Sau khi ngừng q trình ni sấy khơ ở nhiệt độ 50 oC thu được canh trường chứa protease B .Subtilis S5 có hoạt độ enzyme là 33UI/g Hoạt độ protease( UI/g CT) 1,63 Hàm lượng protein (mg Pr /g CT) 94,92 Hoạt độ riêng (UI/mg Pr) 0,017 Hoạt độ protease của canh trường vi khuẩn là 1,63UI/gCT (giá trị trung bình) Tác nhân tủa Hoạt độ protease( UI/g CT) Hàm lượng protein (mg Pr /g CT) Hoạt độ riêng (UI/mg Pr) Ethanol . của protease CPE nhưng ảnh hưởng rất ít đến hoạt độ protease DC. Protease CPE tủa bởi ethanol nồng độ 75%. Protease B .Subtilis S5 kém bền với nhiệt so với các protease tứ thực vật và bển hơn protease. được. Sau khi nhân giống ly tâm thu B .Subtilis S5 dùng để sản xuất enzyme. Sản xuất protease từ B .Subtilis S5: Môi trường nuôi B .Subtilis S5 sản xuất protease (152,19kg/mẻ) có thành phần như. 41 giờ ở nhiệt độ Đánh tơi Thu bột canh trường chứa protease Xay mịn Giống B .Subtilis S5 dùng để sx enzyme Giống B .Subtilis S5 S5 Hoạt hóa giống Nhân giống Sấy khô ở 50 o C Chế phẩm