LC/MS là phương pháp mới hiện nay được sử dụng để định tính và định lượng các chất một cách chính xác. Phương pháp này có thể sử dụng để xác định chính xác cấu trúc của hợp chất bằng việc dùng năng lượng bẻ gãy phân tử để tạo ra các mảnh ion con và việc phân tích khối phổ đã được ghi lại khi bẻ gãy chúng. Do đó kết quả của phương pháp này là hoàn toàn tin cậy. Đồng thời phương pháp này cũng có độ nhạy rất cao, độ phát hiện tuyệt đối đạt đến 10-10 - 10-14 g. Phương pháp ELISA cũng có độ nhạy khá cao, độ đặc hiệu tương đối tốt, thời gian phân tích nhanh (khoảng 30 phút)
nhưng giá của các kháng thể đơn dòng rất đắt, nên chi phí phân tích cao, khả năng ứng dụng sẽ bị hạn chế. Phương pháp Mouse Bioassay (phương pháp sinh hóa trên chuột) có nhược điểm là không đặc hiệu, bởi độc tố Tetrodotoxin có nhiều dẫn chất cũng mang độc tính, hơn nữa độ nhạy lại không cao. [21]
Bản thân TTX chỉ tan được trong các acid hữu cơ yếu, nên không thể phân tích trực tiếp bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) [20]. TTX phải được tạo dẫn xuất với 2-amino-6-hydroxymethyl-8-hydroxyquinazoline [24].
Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với đặc trưng sự phân tách giữa pha động và pha tĩnh, có thể ứng dụng để phân tích TTX. Tuy nhiên, với các detector khác nhau thì phương pháp chuẩn bị, phân tích khác nhau, qua đó độ nhạy cũng khác nhau, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng cũng khác nhau [21]
Với Detector UV (DAD): điều kiện pha động thường phức tạp, độ chọn lọc thường không cao bởi trong cá Nóc có rất nhiều dẫn xuất của TTX
Với Detector huỳnh quang (FLD): phương pháp này được Yasumoto và Mitishita ứng dụng để phân tích TTX. Phương pháp này sử dụng NaOH đặc, nóng để tạo dẫn xuất sau cột với 2-amino-6-hydroxymethyl-8-hydroxyquinazoline để phát huỳnh quang. Điều này hạn chế sự phục hồi TTX và giới hạn định lượng của phương pháp kém [20].
Với Detector khối phổ (MS) mà chúng tôi áp dụng, đây là phương pháp hiện đại, có
khả năng ứng dụng cao và đang dần trở nên phổ biến để phân tích TTX. Trên thế giới đã có rất nhiều nghiên cứu sử dụng phương pháp này để phân tích TTX, tuy nhiên, chúng ta vẫn phải nghiên cứu để tìm ra phương pháp phù hợp với điều kiện mẫu, điều kiện cơ sở vật chất ở Việt Nam [21], [20].
Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC/MS) mà chúng tôi xây dựng được có độ ổn định, độ lặp lại cao, độ tuyến tính tốt, giới hạn phát hiện cũng như giới hạn định lượng nhỏ (LOD = 10ng/mL; LOQ = 25ng/mL) đáp ứng tốt khả năng định lượng hàm lượng nhỏ TTX trong mẫu cá Nóc.