- Khảo sát một số phƣơng pháp loại bớt tạp chất: Phƣơng pháp kết tủa tạp chất bằng nhiệt, phƣơng pháp tủa tạp chất bằng ethanol và phƣơng pháp kết hợp nhiệt độ và ethanol.
2.2.3. Điều chế cao khô
- Điều chế cao khô bằng phƣơng pháp phun sấy. - Đánh giá một số chỉ tiêu chất lƣợng cao khô.
2.2.4. Phân lập puerarin
- Phân lập puerarin và chứng minh cấu trúc sản phẩm.
2. 3. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.3.1. Phương pháp xác định hàm lượng isoflavonoid toàn phần trong sắn dây
- Sử dụng phƣơng pháp đo quang [7], [ 8], [ 14], [ 15], [ 17], [ 18]. Tiến hành:
- Chuẩn bị mẫu thử:
+ Mẫu thử là sắn dây tươi: Cân chính xác khoảng 10 g dƣợc liệu, thêm 100 ml ethanol 70%, xay mịn bằng máy xay sinh tố. Chuyển hết vào bình định mức 500 ml, thêm ethanol 70% đến vừa đủ, siêu âm 30 phút trong bể siêu âm. Sau đó để lắng 15 phút ở điều kiệ phòng, gạn lấy phần trong. Lấy chính xác 5 ml dịch trong vừa gạn vào bình định mức 100 ml, thêm 5 ml ethanol 96% và nƣớc cất vừa đủ, lắc đều.
+ Mẫu thử là dịch chiết: Tùy vào loại dịch chiết mà pha loãng đến nồng độ nằm trong khoảng nồng độ tuyến tính, bƣớc cuối cùng thêm ethanol để đƣợc nồng độ ethanol trong mẫu là 10% (nhƣ mẫu đối chiếu và mẫu trắng).
+ Mẫu thử là cao khô toàn phần: Cân chính xác khoảng 0,1 g cao cần xác định hàm lƣợng, hòa tan bằng ethanol 96%, chuyển vào bình định mức 50 ml, thêm ethanol 96% đến vừa đủ, lắc đều. Lấy chính xác 10,0 ml dung dịch vừa pha vào bình định mức 50 ml, thêm cồn 96% đến vừa đủ, lắc đều. Lấy chính xác 5,0 ml dung dịch vừa pha vào bình định mức 50 ml, thêm nƣớc cất đến vừa đủ, lắc đều.
- Chuẩn bị mẫu đối chiếu:
+ Cân chính xác 12,1 mg puerarin 82,31% (tƣơng đƣơng 10,0 mg puerarin) vào bình định mức 50 ml, hòa tan bằng ethanol 96%, thêm ethanol 96% đến vừa đủ, lắc đều. Lấy chính xác 10,0 ml dung dịch vừa pha vào bình định mức 50 ml, thêm cồn 96% đến vừa đủ, lắc đều. lấy chính xác 5,0 ml dung dịch vừa pha vào bình định mức 50 ml, thêm nƣớc cất đến vừa đủ, lắc đều.
- Mẫu trắng:
+ Lấy chính xác 5 ml ethanol 96% vào bình định mức 50 ml, thêm nƣớc cất đến vạch, lắc đều.
- Các mẫu sau khi pha đƣợc lọc qua màng lọc 0.45 µm, sau đó đem đo quang tại bƣớc sóng 250 nm, mỗi mẫu đo 3 lần lấy kết quả trung bình.
Hàm lƣợng isoflavonoid toàn phần trong sắn dây đƣợc tính theo công thức:
Trong đó:
- X: là hàm lƣợng isoflavonoid toàn phần trong sắn dây (%). - AT: là mật độ quang của mẫu thử.
- AC: là mật độ quang của mẫu đối chiếu. - CC: là nồng độ chất đối chiếu (mg/ml). - m: khối lƣợng mẫu thử cân đƣợc (g). - V: thể tích mẫu thử (ml).
- K: là độ pha loãng của mẫu thử.