Lấy 2g bột củ Nưa rồi cho vào bình nón dung tích 50ml. Thêm 20ml ethanol 90%. Đun cách thủy sôi trong vài phút. Lọc nóng. Dịch chiết đem tiến hành các phản ứng định tính.
Phản ứng mở đóng vòng lacton
Tiến hành:
Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1ml dịch chiết: Ống 1 thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10%. Ống 2 để nguyên.
Đun cả 2 ống nghiệm đến sôi. Để nguội rồi quan sát: Ống 1 có tủa vàng.
Ống 2 trong.
Thêm vào cả 2 ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cất. Lắc đều rồi quan sát: Ống 1 trong.
Ống 2 đục.
Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, quan sát: Ống 1 đục.
Ống 2 trong. (phản ứng âm tính). Phản ứng diazo hóa
Tiến hành:
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ. Thêm vào 2ml dung dịch NaOH 10%. Đun cách thủy đến sôi rồi để nguội. Nhỏ vào giọt thuốc thử diazo.
Kết quả:
Mẫu N2: Không xuất hiện màu đỏ (phản ứng âm tính).
Mẫu N6: Không xuất hiện màu đỏ (phản ứng âm tính).
Quan sát huỳnh quang của các vết coumarin dưới ánh sáng tử ngoại khi tác dụng với dung dịch kiềm (phản ứng chuyển từ đồng phân cis sang đồng phân trans dưới tác dụng của tia tử ngoại)
Tiến hành:
Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy thấm. Nhỏ tiếp vài giọt dung dịch NaOH 5%. Sấy nhẹ. Che một phần diện tích dịch chiết trên giấy lọc bằng một miếng kim loại (chìa khóa, đồng xu…) rồi chiếu tia tử ngoại trong một vài phút. Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp dưới đèn tử ngoại.
Kết quả:
Mẫu N2: Phần không bị che có huỳnh quang không sáng hơn phần bị che (phản ứng âm tính).
Mẫu N6: Phần không bị che có huỳnh quang không sáng hơn phần bị che (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: Trong củ của hai loài Nưa không chứa coumarin.