- Áp dụng vào quy mô 1,5kg
2.3.3. Nghiên cứu tác d ng gi i l ou trên chuột
Mô hình gây stress cho chuột nhắt trắng bằng phƣơng pháp cô lập
Chuột bị gây stress bằng phương pháp cô lập trong 4 tuần (quy trình được áp dụng theo đề tài “Nghiên cứu hoàn chỉnh 6 mô hình dược lý thực nghiệm để đánh giá tác dụng dược lý – Đề tài cấp Bộ Y tế). Sau thời gian cô lập, chia chuột thành các nhóm thí nghiệm như sau:
- Nhóm chứng sinh lý: uống nước cất - Nhóm chứng stress: uống nước cất
- Nhóm uống thuốc nghiên cứu: uống cao chiết Ban di thực liên tục trong 10 ngày. Tiến hành ở 2 nồng độ 240mg/kg cân nặng và 480mg/kg cân nặng.
Chuẩn bị cao thử: Cao Ban di thực được cân chính xác rồi hòa tan vào nước cất để được 1 nồng độ xác định. Từ cân nặng của chuột ta sẽ tính được số ml dung dịch cao cần dùng đối với từng con chuột. Dung dịch cao sử dụng bằng đường uống.
- Nhóm dùng sản phẩm cao chiết từ Ban Âu đã được thương mại trên thị trường châu Âu: Laif 900 Balance Filmtabletten nông độ 240mg/kg cân nặng.
Tiếp theo, đánh giá tác dụng giải lo âu bằng thử nghiệm sau đây:
Hành vi khám phá không gian (open field test)
* Nguyên lý:
Chuột có tính tò mò, luôn có xu hướng khám phá không gian mới để thu thập thông tin mới của môi trường, qua đó bảo đảm sự an toàn cho bản thân động vật. Đối với hành vi khám phá trong không gian mở là một khối hình hộp chữ nhật, chuột stress sẽ có xu hướng sử dụng thời gian nhiều hơn ở vùng ngoại vi so với vùng trung tâm.
* Phương pháp:
Chuột được đặt vào trung tâm của khối hình hộp chữ nhật. Khối hộp này có kích thước đáy là 50 × 50 cm, chiều cao là 50 cm. Đáy khối hộp được chia làm 16 ô
vuông nhỏ. Đáy khối hộp được chia làm 2 vùng là vùng trung tâm và vùng ngoại vi. Vùng trung tâm là 4 ô vuông nhỏ ở giữa. Với thời gian 10 phút, chuột được tự do khám phá không gian mới. Trong quá trình này, camera và máy tính tự động ghi lại quãng đường, thời gian và số lần tiến vào vùng trung tâm và ngoại vi.
Bài tập được thực hiện 1 lần duy nhất.
Chuột trầm cảm, lo lắng có thời gian ở vùng ngoại vi nhiều hơn, và ở vùng trung tâm ít hơn.
*Xử lý kết quả:
- Kết quả thực nghiệm được biểu diễn dưới dạng: giá trị trung bình cộng/trừ độ lệch chuẩn SD: M ± SD (M: giá trị trung bình từng lô, SD: độ lệch chuẩn)
- Các số liệu thực nghiệm được xử lý thống kê theo phương pháp thống kê sinh học, sử dụng công cụ Data analysis của Microsoft Office Excel.
Chƣơng 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. Xây dựng đƣờng chuẩn định lƣợng hypericin
Tiến hành chạy sắc ký HPLC của các dung dịch chuẩn theo điều kiện sắc ký đã nêu ở mục 2.3.1.
Kết quả được thể hiện ở bảng 3.1 và hình 3.1: