Khảo sát lựa chọn tốc độ dòng
Tiến hành sắc ký với điều kiện sắc ký đã chọn với tốc độ dòng thay đổi 1,3ml/phút; 1,5 ml/phút; 1,7 ml/phút và 1,9 ml/phút nhằm chọn tốc độ dòng thích hợp đảm bảo việc chất phân tách tốt và định lượng các curcumionoid đồng thời rút ngắn thời gian phân tích, áp suất cột lại không quá cao.
Nhận xét và kết luận: Tốc độ dòng 1,7 ml/phút là tốt nhất vì cho thời gian
phân tích hợp lý, các pic có khả năng tách tốt mà áp suất cột không quá cao. Vì vậy chúng tôi lựa chọn tốc độ dòng là 1,7 ml/phút.
Khảo sát lựa chọn tỷ lệ thành phần pha động
Khảo sát khả năng tách 3 thành phần của curcuminoid là C, DMC, BDMC trong mẫu phân tích với những hệ pha động sau: ACN – dung dịch A.acetic4% với lần lượt các tỷ lệ là 40:60, 50:50, 60:40.
Kết quả được trình bày ở bảng 3.2.
Bảng 3.2. Kết quả khảo sát tỷ lệ pha động
STT ACN : dung dịch A.acetic 4% (tt/tt)
Thời gian lưu (phút)
C DMC BDMC
1 40:60 11,394 10,275 9,263
2 50:50 8,748 7,886 7,106
Hình 3.2. Sắc ký đồ của curcuminoid ở hệ pha động ACN : A.acetic 4% (40:60)
Hình 3.3. Sắc ký đồ của curcuminoid ở hệ pha động ACN : A.acetic 4% (50:50)
Hình 3.4. Sắc ký đồ của curcuminoid ở hệ pha động ACN : A.acetic 4% (60:40)
Nhận xét và kết luận: Từ kết quả ở bảng 3.2 thấy hệ dung môi ACN: dung
dịch A.acetic 4% = 50:50 (tt/tt) có khả năng tách tốt nhất, pic sắc nét, chân pic gọn, các pic tách rời nhau và thời gian phân tích hợp lý. Vì vậy, chúng tôi lựa chọn pha động có tỷ lệ ACN: dung dịch A.aceticvới tỷ lệ50:50 (tt/tt).