- Bào chế L-AMB theo phương pháp trình bày ở mục 2.3.1.
- Đồng nhất và làm giảm KTTP theo phương pháp đồng nhất hóa và đùn áp suất cao được mô tả ở mục 2.3.1.
- Lọc tiệt khuẩn qua màng 0,2 µm.
- Hút chính xác mỗi 2 ml hỗn dịch liposome sau khi giảm KTTP, cho vào lọ thủy tinh dung tích 10 ml, đông khô theo quy trình.
2.3.2.2. Khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố thuộc về công thức và qui trình đông khô L-AMB
* Khảo sát tá dược:
- Khảo sát tác dụng của tá dược bảo vệ trong quá trình đông lạnh :
+ Hỗn dịch liposome tạo thành được đóng băng trong quá trình đông lạnh có mặt các tá dược khác nhau là saccarose và mannitol. Tỷ lệ khối lượng của lipid:đường được thay đổi để lựa chọn tỷ lệ phù hợp. Glycerin cũng được thêm vào với các tỷ lệ 1%; 2%
+ Quy trình đông lạnh: Mẫu được làm lạnh với tốc độ 0,5oC/phút từ nhiệt độ phòng tới 0oC; tốc độ làm lạnh 0,25oC/phút từ 0oC tới -50oC; rồi được giữ ở đó 8h. Sau khi kết thúc quá trình đông lạnh mẫu được để rã đông ở nhiệt độ phòng
- Khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ tá dược : đông khô L-AMB với các tỷ lệ đường bảo vệ khác nhau rồi đánh giá để lựa chọn tỷ lệ phù hợp.
* Khảo sát qui trình đông khô : Khảo sát nhiệt độ của quá trình làm khô sơ cấp : tiến hành khảo sát ở 2 nhiệt độ là -15oC và -35oC
2.3.3. Phương pháp đánh giá một số đặc tính của L-AMB và L-AMB đông khô