Mô hình gây tự kỷ cho chuột thử nghiệm bằng Valproate (VPA). * Phương pháp tiến hành:
Chuột nhắt trắng Swiss albino đực và cái được ghép cùng chuồng (khoảng 6 đực và 6 cái) để thụ tinh. Phôi thai chuột ngày đầu tiên gọi là E0, ngày thứ 12, 13 gọi là E12, 13. Ngày đầu tiên chuột con được sinh ra gọi là PND0. Chuột cái mang thai ngày thứ E12-13, chuột được tiêm VPA liều 500 mg/kg. Sau khi chuột con được sinh ra đến ngày thứ 12
Chuột được chia làm 4 nhóm:
- Nhóm chứng sinh lý: uống nước muối sinh lý 0,9% từ ngày PND12 cho đến PND 40
- Nhóm chứng bệnh lý: Được tiêm VPA (500 mg/kg) ngày E12 và uống nước nước muối sinh lý 0,9% từ ngày PND12 cho đến PND 40
- Nhóm 3: Được tiêm VPA (500 mg/kg) ngày E12 và uống BM liều 27 mg/kg từ ngày PND12 cho đến PND 40
- Nhóm 4: Được tiêm VPA (500 mg/kg) ngày E12 và uống BM liều 54 mg/kg từ ngày PND12 cho đến PND 40
Tiếp theo, nghiên cứu khả năng cải thiện hội chứng tự kỷ với các tiêu chí sau:
- Đánh giá tác dụng trên khả năng vận động của chuột bằng máy đếm
vận động tự nhiên hồng ngoại .
- Đánh giá tác dụng cải thiện tương tác xã hội bằng bài tập hành vi
Hình 2.1: Sơ đồ thiết kế thử nghiệm
2.3.2.1. Đánh giá tác dụng trên khả năng vận động của chuột bằng máy đếm vận động tự nhiên hồng ngoại . động tự nhiên hồng ngoại .
* Thử nghiệm đánh giá khả năng vận động tự nhiên.
Chuột được đặt vào khối hình hộp chữ nhật có kích thước 40x40x32cm, tường bằng nhựa polyvinyl chloride. Với thời gian 5 phút, chuột được tự do hoạt động. Trong quá trình này, camera và máy tính tự động ghi lại số lần vận động theo chiều dọc (rearing) của chuột.
Bài tập được thực hiện 1 lần duy nhất.
Chỉ tiêu đánh giá: Chuột tự kỷ có số lần vận động ít hơn. Do đó, nếu cao
RĐB có tác dụng cải thiện khả năng vận động tự nhiên, chuột sẽ có xu hướng tăng số lần vận động theo chiều dọc.
Tiêm VPA ( 500 mg/kg: i.p) Social interaction Locomotor activity
Uống cao BM liều 27 và 54 mg/kg
P12 P0
2.3.2.2. Đánh giá tác dụng cải thiện tương tác xã hội bằng bài tập hành vi cộng đồng . đồng .
* Bài tập hành vi cộng đồng.
Hệ thống thí nghiệm gồm một bể nhựa trong suốt (30 x 100 cm) được ngăn thành 3 khoang, gồm khoang ở giữa (30 x 20cm), khoang phải bằng khoang trái (30 x 40 cm). Ba khoang này được nối với nhau bằng hai cửa nằm trên bề mặt sàn (10 x 10 cm). Tại khoang phải và trái có chứa một hộp lưới 10 x 10 x10 cm). Phía trên hộp lưới được đậy nắp và quây kín để tránh chuột trèo lên. Phía trên hộp nhựa 100 cm là một camera ghi lại hành vi của chuột.
Chuột thí nghiệm được đặt vào khoang giữa, và được tự do đi lại giữa các khoang trong vòng 5 phút để làm quen với môi trường mới. Sau đó chuột bị đưa vào khoang giữa. Một chuột khỏe mạnh được nhốt trong hộp lưới tại ngăn bên phải. Hộp lưới bên trái để trống. Sau đó, chuột thí nghiệm được tự do đi lại trong cả 3 khoang và tiếp xúc với chuột khỏe mạnh được nhốt trong hộp lưới tại ngăn bên phải trong vòng 10 phút. Camera theo dõi thời gian chuột ở trong mỗi ngăn.
Bài tập được thực hiện 1 lần duy nhất.
Chú ý:
- Giữa các lần tập cần lau sạch mê lộ bằng ethanol 70%. - Chuột trong hộp lưới phải cùng giới với chuột thử nghiệm.
Chỉ tiêu đánh giá: Chuột là động vật có tính cộng đồng rất cao. Chúng luôn có nhu cầu tiếp xúc với đồng loại. Hành vi này thay đổi rất lớn đối với chuột bị tự kỷ. Chuột tự kỷ có xu hướng ít tiếp xúc với đồng loại hơn, số lần vào ra các khoang giảm. Do đó, nếu cao rau đắng biển có tác dụng cải thiện tương tác xã hội, chuột sẽ có xu hướng kéo dài thời gian tiếp xúc với đồng loại.