4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.Kiểm tra dạng CMS bằng chỉ thị phân tử DNA
Hiện nay, có bốn dạng bất dục ựực tế bào chất là CMS-T (Taxas), CMS-C (Charrua), CMS-S (USDA), CMS-O (Parvez A et al., 2007). Tương ứng mỗi dòng bất dục ựực ựều có gen duy trì và phục hồi tương ứng. Trong công tác chọn tạo giống ngô lai ba dòng các nhà chọn tạo giống thường quan tâm ựến bất dục ựực dạng CMS-T, CMS-S, CMS-C (Liu et al., 2002) do có tắnh bất dục ổn ựịnh.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng các dòng CMS nhập nội từ Mỹ. đó là các dòng C437JA, C836A, C437R và C437K. Mỗi dòng bất dục ựực ựều có gen duy trì và phục hồi tương ứng. Do ựó ựể phát hiện các dòng duy trì và phục hồi trong tập ựoàn các dòng ngô tự phối thì việc xác ựịnh dạng CMS là rất quan trọng.
M 1 2 3 4
398
Hình 4.1. Kắch thước ựoạn băng DNA khi nhân bằng các mồi phát hiện dạng CMS
Ghi chú: Giếng 1- M: 1kb; giếng 2: C437JA; giếng 3: C836A; giếng 4 và 5 là C437R và C437K
398 bp 799 bp
để xác ựịnh các dạng CMS chúng tôi dùng các chỉ thị phân tử là các mồi cmsC, cmsS, cmsT ựể phát hiện các dạng CMS. Sau khi tiến hành phản ứng PCR và chạy ựiện di chúng tôi thu ựược kết quả như sau:
- Sau khi dùng mồi phát hiện dạng CMS-C: dòng C437JA nhân ựược ựoạn có kắch thước 398bp.
-Sau khi dùng mồi phát hiện dạng CMS-S: dòng C836A nhân ựược ựoạn DNA có kắch thước 799bp.
- Dùng mồi phát hiện dạng CMS-T: Không nhân ựược ựoạn DNA nào.
Theo Liu et al., 2002 thì ựoạn 398bp, 440bp và799 bp là các ựoạn DNA ựược nhân lên của các CMS dạng C, T và S khi nhân bằng các mồi phát hiện các dạng CMS. Như vậy dựa vào kết quả nhân PCR khi sử dụng các mồi phát hiện các dạng CMS thì dòng C437JA là dòng CMS dạng C ; dòng C836A là dòng CMS dạng S; hai dòng C437R và C437K không có vạch băng nào ựược nhân lên có thể nó là CMS dạng O. Tuy nhiên dạng này chưa phát hiện ựược chỉ thị phân tử (Parvez A et al., 2007), mặt khác dạng CMS-O tắnh bất dục không ổn ựịnh. Do vậy trong nghiên cứu này chúng tôi tập trung nghiên cứu tìm và phát hiện các gen duy trì và phục hồi hữu dục cho các dạng CMS- C và CMS-S.