3.3.2.1. Bố trí điều tra tình hình nhiễm sán dây ở chó
Bố trí thu thập mẫu theo phương pháp lấy mẫu phân tầng (Nguyễn Như Thanh, 2001) [14]. Mổ khám, kiểm tra nội tạng và thu thập sán dây của chó tại các địa phương tiến hành mổ khám dê.
3.3.2.2. Phương pháp xác định tình hình nhiễm sán dây ở chó
* Phương pháp mổ khám, thu thập và định loại sán dây ở chó
Để tìm sán dây ký sinh ở hệ tiêu hoá, tiến hành mổ khám chó theo phương pháp mổ khám phi toàn diện cơ quan tiêu hoá, thu thập mẫu sán dây ký sinh ở ruột của chó (Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008) [6].
Sán dây sau khi thu thập được làm chết tự nhiên trong nước lã, sau khi làm sạch bằng nước cất bảo quản trong cồn 70º. Phân loại sơ bộ các loài sán dây đã thu thập được dưới kính lúp và kính hiển vi, căn cứ vào hình thái, cấu tạo của sán dây trưởng thành theo khoá định loại của Phan Thế Việt và cs (1977) [18], Nguyễn Thị Kỳ (2003) [4]. Việc xác định chính xác thành phần loài sán dây ở đường tiêu hoá chó được thực hiện ở Viện sinh thái và Tài nguyên sinh vật.
- Định loài sán dây: Định loài sán dây theo hệ thống phân loại của Schulz và Gvozdev, 1970 trên tiêu bản nhuộm Carmin (Phan Thế Việt 1977 và cs [18], Nguyễn Thị Kỳ 2003 [4]).
Làm tiêu bản tạm thời (làm tiêu bản trong): Sử dụng hỗn hợp dung dịch gồm: glyxerin + axit lactic + nước cất theo tỷ lệ 1:1:1. Phương pháp này có thể quan sát cấu tạo sơ bộ của đầu, giúp cho việc định loài sán dây được nhanh chóng.
Làm tiêu bản cốđịnh:
Quy trình nhuộm như sau:
+ Tách mẫu: tách những sán mà cơ thể có đầy đủ các bộ phận (đầu, cổ, thân).
+ Chọn những mẫu đẹp nhất có cấu tạo đầy đủ (đầu, cổ, thân, đốt già) + Rửa mẫu trong nước cất với thời gian 10 – 15 phút.
+ Ép mẫu: đặt mẫu vào giữa hai lam kính để ép cho mẫu thẳng, các mẫu khác làm tương tự, sau đó đặt các mẫu chồng lên nhau, ngâm trong nước với thời gian 15 phút, sau đó mở ra từ từ.
(Trường hợp mẫu tươi: thu mẫu, rửa nhẹ nhàng cho sạch, gắp từng con đặt cẩn thận lên lam kính cho thẳng rồi đặt lam kính khác lên; tiếp tục với những mẫu khác như vậy. Sau đó đặt chồng lên nhau trong một chậu nhựa có nắp đậy,cho cồn 70º vào ngập mẫu, để trong 10 ngày nhấc ra cho vào chậu nước 5 – 10 phút để sán tự bong ra, gắp cho vào cồn 70º, sau 1 tuần đem nhuộm).
+ Mẫu sán lấy ra từ cồn 70º được cho vào thuốc nhuộm Carmin từ 10 – 15 phút, rồi chuyển sang cồn 70º, 80º, 96º, 100º với thời gian 15 – 30 phút (tùy kích thước từng mẫu); rồi làm trong bằng xylen.
+ Chuẩn bị lamen và lam kính, nhỏ 1 – 2 giọt Baume – Canada lên lam kính, sau đó lấy que gắp gắp sán đặt lên giọt Baume – Canada, đậy lamen lên. Sau một ngày đem ra soi kính hiển vi.
+ Sau khi làm xong mẫu, điền đầy đủ thông tin về mẫu lên lam kính.
- Phương pháp xác định cường độ nhiễm sán dây:
Cường độ nhiễm sán dây được xác định bằng số lượng sán dây ký sinh/chó bằng phương pháp mổ khám, thu thập và đếm số lượng sán ký sinh ở mỗi chó.
3.3.2.3. Phương pháp xác định mối tương quan giữa tỷ lệ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở dê và tỷ lệ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó
Xác định tỷ lệ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở dê và tỷ lệ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó tại từng xã, sau đó nhập số liệu vào phần mềm Minitab 14.0 để xác định hệ số tương quan và vẽ đồ thị.
3.3.3. Phương pháp nghiên cứu biện pháp phòng chống bệnh do Cysticercus tenuicollis
* Thử nghiệm thuốc tẩy sán cho chó
Xét nghiệm mẫu phân chó tại một số địa phương bằng phương pháp lắng cặn Benedek. Chọn 40 chó có cường độ nhiễm cao để thử nghiệm hiệu lực thuốc tẩy. Sử dụng 2 loại thuốc Niclosamid (100 mg/kg TT),Praziquantel (10 mg/kg TT) để tẩy sán dây cho chó. Sau 15 ngày kiểm tra lại phân chó để đánh giá hiệu lực của thuốc:
- Nếu số lượng sán dây bình quân/lần thải phân không giảm so với trước khi dùng thuốc thì đánh giá thuốc không có hiệu quả với sán dây.
- Nếu thấy đốt sán dây nhưng số lượng bình quân/lần thải phân giảm, thì đánh giá thuốc có hiệu lực nhưng chưa triệt để.
- Nếu không thấy đốt sán dây trong phân, thì đánh giá là thuốc có hiệu lực tẩy sán dây triệt để.
Chúng tôi dùng thuốc tẩy sán dây cho 40 chó ở 2 xã theo sơ đồ sau:
Địa phương (xã) Tên thuốc và liều lượng Đường cho thuốc Số chó dùng thuốc (con) Thời gian xét nghiệm phân sau tẩy (ngày)
Tân Phú Niclosamid(100 mg/kg TT) Uống 10 15 Praziquantel (10 mg/kg TT) Uống 10 15 Tân Hương Niclosamid (100 mg/kg TT) Uống 10 15 Praziquantel (10 mg/kg TT) Uống 10 15 * Đề xuất biện pháp phòng chống bệnh do ấu trùng Cysticercus tenuicollis
- Dựa trên kết quả nghiên cứu về tình hình nhiễm, kết quả thử nghiệm thuốc điều trị bệnh sán dây cho chó, xây dựng biện pháp phòng chống bệnh cho ấu trùng Cysticercus tenuicollis gây ra ở dê tại huyện Phổ Yên, tỉnh Thái Nguyên.