2.2.2.1. Điều kiện điện di mao quản
Phương pháp tiến hành dựa trên kỹ thuật điện di mao quản với bộ phận phát hiện detector mảng Diod (DAD). Trong quá trình tiến hành điện di mao quản có một sốđiều kiện được cốđịnh không thay đổi:
- Mao quản silica nung chảy với chiều dài 65cm (chiều dài hiệu dụng 60cm),
đường kính trong 75µm.
- Tiêm mẫu: 50mbar x 5s.
- Nhiệt độtrong cassette được ổn định ở 25oC.
Điều kiện rủa mao quản: Trong quá trình làm điện di lớp silanol của mao quản bị
ion hóa dẫn đến làm thay đổi dòng EOF làm giảm hiệu lực tách. Vậy nên cần quá trình rửa để phục hồi mao quản đảm bảo hiệu lực tách.
- Đối với mao quản mới:
+ Đầu tiên rủa nước loạiion 10 phút.
+ Bước thứ 2 rửa bằng dung dịch NaOH 1M 30 phút. + Bước thứ 3 rửa nước loạiion 15 phút.
+ Bước thứ 4 rửa bằng dung dịchNaOH 0,1M 15 phút. + Bước cuối cùng rửa bằng nước loạiion 15 phút.
- Đối với mao quản chạy ổn định:
+ Đầu ngày: Rửa mao quản 10 phút nước loạiion,chạy 5 phút dung dịchNaOH 0,1M, 10 phút nước loại ion.
+ Giữa hai lần chạy mẫu: Rửa mao quản 2 phút nước loại ion, 1 phút dung dịchNaOH 0,1M,2 phút nước loại ion,3 phút dung dịch điện ly dùng để phân tích.
+ Cuối ngày: Rửa mao quản 10 phút nước loại ion 5 phút dung dịchNaOH 0,1M, 10 phút nước loại ion. Các điều kiện chúng tôi tiến hành khảo sát gồm: - Lựa chọn bước sóng phát hiện. - Lựa chọn dung dịch điện ly nền. - Khảo sát nồng độ, pH dung dịch điện ly nền. - Khảo sát nồng độ chất chọn lọc đối quang β-CD. - Khảo sát điều kiện thế.
CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. Khảo sát các điều kiện của quá trình điện di:
3.1.1.Lựa chọn các điều kiện dung dịch điện di 3.1.1.1. Lựa chọn bước sóng.
Để lựa chọn bước sóng phát hiện thích hợp, chúng tôi tiến hành quét phổ tìm λmax của hai đồng phân đối quang của promethazin trên máy điện mao quản CE với nồng
độ 40µg/ml, trong dung dịch điện ly nền, trong vùng bước sóng từ 190-600nm. Kết quả thu được cho thấy hai đồng phân đối quang của promethazin có độ hấp thụ cực
đại ở bước sóng 249,0 nm. Vì vậy chúng tôi lựa chọn bước sóng 249nm dùng để
xây dụng quy trình thẩm định hai đồng phân đối quang của promethazin.
Hình 3.1. Phổ hấp thụ UV-VIS trên chuẩn của promethazin racemic với dung dịch
điện ly nền acid phosphoric 50 mM pH = 2,5; [-CD] = 1,0 mM.