việc
Dung dịch đệm Tris 50mM: cân khoảng 1,5 g Tris vào cốc có mỏ, hòa tan bằng nước, chuyển vào bình định mức 250 ml, bổ sung nước tới vạch, lắc đều.
Dung dịch điện ly nền Tris 50 mM chứa CM-β-CD 8mM, pH 4,0: pha dung dịch đệm Tris 50 mM, điều chỉnh bằng acid phosphoric đặc tới pH 4,0. Cân chính xác khoảng 0,0616 g CM-β-CD cho vào bình định mức 5 ml, bổ sung đệm Tris 50 mM, pH 4,0 tới vạch, lắc đều.
Dung dịch NaOH 1 M: cân khoảng 4 g NaOH cho vào cốc có mỏ 100ml, hòa tan bằng nước, thêm nước tới vạch.
Dung dịch NaOH 0,1 M: cân khoảng 0,4 g NaOH cho vào cốc có mỏ 100 ml, hòa tan bằng nước, thêm nước tới vạch.
Dung dịch chuẩn gốc Atenolol 1000 ppm: cân chính xác khoảng 25 mg Atenolol khan vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 20 ml dung dịch đệm Tris 50 mM, siêu âm 15 phút, sau đó bổ sung đệm vừa đủ. Bảo quản ở 4oC, tránh ánh sáng. Các dung dich phân tích được chuẩn bị bằng cách pha loãng dung dịch chuẩn gốc bằng dung dịch đệm Tris 50 mM đến nồng độ yêu cầu.
Với mỗi chế phẩm viên nén chứa Atenolol 50mg: cân chính xác 20 viên tính khối lượng trung bình viên, nghiền mịn. Cân chính xác lượng bột viên tương ứng với 25 mg Atenolol cho vào bình định mức 25 ml, cho khoảng 20 ml đệm Tris, siêu âm 15 phút, sau đó bổ sung đệm vừa đủ, lọc thu lấy dịch lọc. Hút 500 μl dịch lọc cho vào bình định mức 5 ml, bổ sung đệm Tris 50 mM đến vạch, lắc đều.
Dung dịch placebo: cân khoảng 0,1 g placebo cho vào bình định mức 25 ml, cho khoảng 20 ml đệm Tris, siêu âm 15 phút, sau đó bổ sung đệm vừa đủ,
lọc thu lấy dịch lọc. Hút 500 μl dịch lọc cho vào bình định mức 5 ml, bổ sung đệm Tris 50 mM đến vạch, lắc đều.
Tất cả các dung dịch đều được lọc qua màng lọc 0,2 μm trước khi điện di.
2.3.2. Khảo sát và lựa chọn điều kiện điện di
Tạ Mạnh Hùng [7] đã khảo sát các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình điện di gồm: thành phần dung dịch điện di, loại tác nhân chọn lọc đối quang, pH dung dịch đệm, hiệu điện thế và nồng độ Atenolol trong mẫu phân tích. Dựa vào kết quả của đề tài này, chúng tôi đưa ra điều kiện điện di như sau:
Phương pháp được tiến hành trên hệ thống điện di mao quản với detector mảng diod.
Nhiệt độ mao quản 250C, tiêm mẫu 50mbar x 3s, bước sóng phát hiện 194 nm.
Nồng độ Atenolol racemic trong mẫu phân tích khoảng 100ppm (tương ứng với khoảng 50ppm mỗi đơn đồng phân).
Dung dịch điện ly nền: Đệm Tris 50mM, pH 4,0 chứa CM-β-CD 8mM.
Trước khi sử dụng lần đầu tiên, cột mao quản mới được rửa sạch với methanol trong 15 phút, tiếp theo là dung dịch acid hydrocloric 0,1 M trong 15 phút, và dung dịch NaOH 1M trong 30 phút.
Hàng ngày, vào thời điểm đầu ngày các mao quản được rửa sạch bằng dung dịch NaOH 0,1 M 15 phút, nước 5 phút, và với dung dịch điện ly nền (BGE) 15 phút.
Giữa mỗi lần chạy, chương trình luyện cột (preconditioning) được thực hiện với nước trong 5 phút, dung dịch NaOH 0,1 M trong 4 phút, nước 2 phút, và BGE 4 phút.
Thời điểm cuối ngày, mao quản được rửa với dung dịch NaOH 0,1 M trong 30 phút, nước 30 phút, sau đó thổi khí 2 phút.
Chúng tôi tiến hành điện di dung dịch chuẩn Atenolol racemic 100 ppm với điều kiện điện di trên, sử dụng các cột mao quản khác nhau với chiều dài hiệu dụng và đường kính trong khác nhau.
2.3.2.2. Lựa chọn hiệu điện thế áp vào hai đầu mao quản
Vì trong đề tài này sau khi lựa chọn được cột mao quản chúng tôi phải tiến hành khảo sát lại hiệu điện thế áp vào hai đầu mao quản.
Thay đổi hiệu điện thế áp vào hai đầu mao quản từ 15 đến 25 kV (∆E= 5 kV) và tiến hành phân tích mẫu, lựa chọn hiệu điện thế phù hợp.