2. Mục đích nghiên cứu Error! Bookmark not defined.
2.3.2.1.Thí nghiệm 1: Tạo vật liệu invitro chồi đỉnh Đinh lăng
Đỉnh sinh trưởng cây Đinh lăng đã khử trùng sơ bộ được sử dụng làm nguyên liệu cho thí nghiệm này theo các công thức bảng 2.1.
Bảng 2.1. Các công thức thí nghiệm xác định hiệu quả của chất khử trùng.
Công thức Chất xử lý/thời gian
ĐC Xử lý sơ bộ
T1 Xử lý sơ bộ + Sục trong ô zôn/60 phút (ô zôn được tạo bằng máy BKOzone H01, Viện Vật Lý Đại học Bách khoa)
T2 Xử lý sơ bộ + cefotaxim 500mg.L-1/lắc 300 vòng/phút trong 24 giờ T3 Xử lý sơ bộ + Povidon I ốt 10% (v/v)/20 phút T4 Xử lý sơ bộ + Javen 5% (v/v)/10 phút T5 Xử lý sơ bộ + Javen 5% (v/v)/20 phút T6 Xử lý sơ bộ + Javen 5% (v/v)/30 phút T7 Xử lý sơ bộ + Javen 10% (v/v)/10 phút T8 Xử lý sơ bộ + Javen 10% (v/v)/20 phút T9 Xử lý sơ bộ + Javen 10% (v/v)/30 phút T10 Xử lý sơ bộ + Javen 15% (v/v)/10 phút T11 Xử lý sơ bộ + Javen 15% (v/v)/20 phút T12 Xử lý sơ bộ + Javen 15% (v/v)/30 phút
Mẫu cấy sau khi được khử trùng trong tủ cấy sẽ được cắt theo từng đốt đều nhau dài khoảng 0,5 – 1 cm, thấm khô mẫu rồi cấy vào các bình tam giác chứa môi trường MS cơ bản (Murashige và Skoog, 1962). Đặt trên giàn nuôi cấy theo dõi tỷ lệ mẫu nhiễm, tỷ lệ mẫu sạch, tỷ lệ mẫu sống sau 30 ngày nuôi cấy.
Chỉ tiêu theo dõi:
24
- Tỷ lệ mẫu sống (%): (Tổng số mẫu sống / Tổng số mẫu cấy vào)x100 - Tỷ lệ mẫu chết (%): (Tổng số mẫu chết / Tổng số mẫu cấy vào)x100 - Hiệu quả khử trùng (%): Tỷ lệ mẫu sống - Tỷ lệ mẫu chết.
- Quy trình đơn giản tạo vật liệu in vitro cây Đinh lăng.
2.3.2.2. Thí nghiệm 2: Nhân nhanh cây Đinh lăng bằng phương pháp tạo đa chồi (Ảnh hưởng của BAP đến khả năng tạo đa chồi).
Sau khi xác định được công thức khử trùng tạo chồi Đinh lăng in vitro và nuôi cấy trong môi trường MS ở thí nghiệm 1 sau 30 ngày nuôi cấy, chúng tôi bổ sung BAP với nồng độ thay đổi từ 0 – 3,5 mg/l vào môi trường MS để xác định ảnh hưởng của BAP đến khả năng tạo đa chồi cây Đinh lăng (đánh giá sau 8 tuần nuôi cấy). Dựa vào tài liệu tham khảo và quá trình thí nghiệm thăm dò nồng độ BAP được chia theo các mức sau:
Bảng 2.2. Công thức thí nghiệm xác định ảnh hưởng của BAP đến khả năng tạo đa chồi cây Đinh lăng.
Công thức Thành phần môi trường
CT1 MS (Đối chứng) CT2 MS + 1,0 mg/l BAP CT3 MS + 1,5 mg/l BAP CT4 MS + 2,0 mg/l BAP CT5 MS + 2,5 mg/l BAP CT6 MS + 3,0 mg/l BAP CT7 MS + 3,5 mg/l BAP
Chỉ tiêu theo dõi: Hệ số nhân chồi = ∑ chồi tạo thành / ∑ chồi đưa vào