Hoa Lily là cõy hoa mang lại lợi nhuận lớn ở nhiều nước như Hà Lan, Nhật bản…Ở Việt Nam, hoa Lily được trồng ở Đà Lạt từ thời Phỏp thuộc. Hiện nay nhu cầu về giống hoa Lily là rất lớn. Ở Đà Lạt, những người trồng hoa phải mua củ giống từ Hà Lan, giỏ hiện tại cho một củ giống từ 7000 - 10.000 đồng tuỳ loại và màu sắc, do vậy sản phẩm của hoa thương phẩm là rất đắt. Ứng dụng kỹ thuật nuụi cấy mụ tế bào cú thể chủ động sản xuất cõy giống cũng như củ giống và là phương phỏp được ỏp dụng nhiều nơi trờn thế giới. Cú thể nuụi cấy được nhiều bộ phận khỏc nhau của hoa Lily. Một trong những phương đơn giản nhất là phương phỏp nuụi cấy vảy củ.
2.1. Giai đoạn chuẩn bị
Đõy là giai đoạn quan trọng quyết định toàn bộ quy trỡnh nhõn giống invitro. Mục đớch của giai đoạn này là phải tạo được nguyờn liệu thực vật vụ trựng để đưa vào nuụi cấy. Mẫu đưa từ bờn ngoài vào phải đảm bảo cỏc yờu cầu sau: tỷ lệ nhiễm thấp; tỷ lệ sống cao; tốc độ sinh trưởng nhanh. Kết quả của giai đoạn này phụ thuộc vào cỏch lấy mẫu, nồng độ và thời gian xử lý diệt khuẩn. Vật liệu thường được chọn và đưa vào nuụi cấy mụ hoa lily là vảy củ được tỏch từ củ mẫu lấy của cõy lily sinh trưởng và phỏt tiển khỏe khụng bị nhiễm cỏc loại sõu bệnh. Củ được làm sạch, và khử trựng bằng cỏch ngõm trong dung dịch HgCl2 1% 10 phỳt, sau đú lấy ra và rửa bằng nước cất vụ trựng 4-5 lần trước khi tỏch lấy vảy củ cấy vào mụi trường tỏi sinh hoặc mụi trường tạo callus. Toàn bộ cỏc thao tỏc được thực hiện trong tủ cấy vụ trựng
2.2. Tỏi sinh mẫu nuụi cấy
Dựng dao cấy tỏch lần lượt cỏc vảy củ đó được khử trựng sạch cấy vào mụi trường tỏi sinh mẫu, mụi trường tỏi sinh hiệu quả nhất đối với vảy lily là MS + 1ppmBA + 0,25ppmNAA
Vảy củ cũng cú thể được nuụi cấy trong mụi trường định hướng tạo callus MS + 1ppm2,4D sản phẩm thu được cấy chuyển vào mụi trường MS + 2ppmBA để tạo chồi. Cỏch nuụi cấy thứ hai thu được lượng mẫu nhiều hơn phương phỏp tỏi sinh chồi trực tiếp ở cỏch một. Chồi thu được ở giai đoạn này sẽ là nguyờn liệu cho giai đoạn nhõn nhanh chồi tiếp theo.
2.3. Giai đoạn nhõn nhanh chồi
Mục đớch của giai đoạn này là tạo hệ số cao nhất. Chớnh vỡ thế giai đoạn này được coi là giai đoạn then chốt của quỏ trỡnh nuụi cấy. Chồi tỏi sinh lily tỏi sinh được tỏch và cấy chuyển sang mụi trường nhõn nhõn tối ưu MS + 1ppmBA + 0,25ppmNAA. Sau khoảng 6 tuần thu được cỏc cụm chồi, chồi sẽ được tỏch khỏi cụm và cấy chuyển vào mụi trường nhõn nhanh lần tiếp theo để thu được hệ số nhõn chồi cao. Số lần cấy chuyển nờn giới hạn trong 4-5 lần. Nếu số lần cấy chuyển quỏ nhiều chất lượng chồi lily sẽ giảm, xuất hiện cỏc chồi dị dạng chất lượng kộm
2.4. Tạo cõy hoàn chỉnh
Khi đạt được kớch thước nhất định cỏc chồi được chuyển sang mụi trường ra rễ. Thường sau 2-3 tuần, cỏc chồi riờng lẻ này sẽ ra rễ và trở thành cõy hoàn chỉnh. Ở giai đoại này người ta bổ sung vào mụi trường nuụi cấy cỏc chất điều hoà sinh trưởng thuộc nhúm auxin, là nhúm hormon thực vật quan trọng cú chức năng tạo rễ phụ từ mụ nuụi cấy. Trong nhúm này cỏc chất IAA, IBA, NAA, 2.4-D được nghiờn cứu và sử dụng nhiều nhất để tạo rễ cho chồi. Trường hợp của cõy hoa lily, sau 6 tuần nuụi cấy trờn mụi trường nhõn nhanh chồi được tỏch và cấy chuyển vào mụi trường tạo cõy hoàn chỉnh MS + 0,25ppm NAA, sau 4 tuần cú thể đưa ra huấn luyện tại vườn ươm
Ngoài phương phỏp định hướng tạo chồi. Quỏ trỡnh nuụi cấy vảy củ cũng rất hiệu quả khi định hướng tạo củ lily và mụi trường thớch hợp nhất cho quỏ trỡnh tạo củ là:
MS+90g/l Saccarose + 0,01mg/l NAA + 0,4mg/l BAP+ Agar. Mụi trường tốt nhất cho quỏ trỡnh nuụi lớn củ là:
MS+120g/l đường+ 0,2mg/l NAA+ 0,03mg/l BAP+ 100ml/l CW+1g/l THT+ Agar.
2.5. Giai đoạn đƣa cõy ra vƣờn ƣơm
Cõy mụ Lily ra rễ đạt chiều cao 6-8 cm, lấy cõy ra ngoài rữa sạch agar và trồng vào Giỏ thể: cỏt, trấu hun, 1 cỏt: 2 trấu hun, 1 đất bột: 1 trấu hun: 1 phõn hữu cơ vi sinh. Tưới nước dạng phun sương trong tuần đầu tiờn và giữ ẩm bằng cỏch che bao Nylon. Sử dụng NPK phun lờn lỏ để cung cấp thờm nguồn dinh dưỡng cho cõy. Sau 4 tuần cõy hỡnh thành lỏ mới, khi đú tiến hành chuyển cõy ra bầu đất, đến thỏng thứ 3 cú thể chuyển cõy mụ trồng ra ngoài đồng ruộng.
Đõy là giai đoạn cuối cựng của quỏ trỡnh và nú quyết định khả năng ứng dụng của quỏ trỡnh nhõn giống invitro trong thực tiễn sản xuất. Đõy là giai đoạn chuyển cõy từ mụi trường dị dưỡng sang mụi trường tự dưỡng hoàn toàn. Do đú phải đảm bảo cỏc điều kiện ngoại cảnh thớch hợp để cõy cú thể đạt tỷ lệ sống cao trong vườn ươm cũng như trong ruộng sản xuất.
Bài tập 1: Thực hành pha chế cỏc loại mụi trường vi nhõn giống cho hoa lily
- Cỏch thức: chia cỏc nhúm nhỏ (5 – 10 học viờn/nhúm), mỗi nhúm nhận
nhiệm vụ pha chế một loại mụi trường vi nhõn giống cho hoa lily
- Thời gian hoàn thành: 3 giờ/1 nhúm - Hỡnh thức trỡnh bày: thực hành tại chỗ
- Phương phỏp đỏnh giỏ: kỹ năng vận dụng lý thuyết vào thực hành của
mỗi học viờn trong nhúm và thỏi độ thực hành của học viờn.
- Kết quả sản phẩm cần đạt được:
+ Pha chế được mụi trường vi nhõn giống cho hoa lily theo đỳng quy trỡnh + Mụi trường sau khi pha chế đủ tiờu chuẩn để sử dụng
Bài tập 2: Thực hành nuụi cấy khởi đầu hoa lily?
- Cỏch thức: chia cỏc nhúm nhỏ (5 – 10 học viờn/nhúm), mỗi nhúm nhận
nhiệm vụ nuụi cấy khởi đầu cho 5 củ mẫu
- Thời gian hoàn thành: 3 giờ/1 nhúm - Hỡnh thức trỡnh bày: thực hành tại chỗ
- Phương phỏp đỏnh giỏ: kỹ năng vận dụng lý thuyết vào thực hành của
mỗi học viờn trong nhúm và thỏi độ thực hành của học viờn.
- Kết quả cần đạt được:
+ Chọn được củ lily đạt tiờu chuẩn để nuụi cấy + Thực hiện nuụi cấy khởi đầu đỳng với quy trỡnh + Mẫu sau khi cấy đảm bảo tỷ lệ sống và tỷ lệ vụ trựng
Bài tập 3: Thực hành nhõn nhanh chồi hoa lily?
- Cỏch thức: chia cỏc nhúm nhỏ (5 – 10 học viờn/nhúm), mỗi nhúm nhận
nhiệm vụ cấy chuyền, nhõn nhanh 5 bỡnh mẫu
- Thời gian hoàn thành: 3 giờ/1 nhúm - Hỡnh thức trỡnh bày: thực hành tại chỗ
- Phương phỏp đỏnh giỏ: kỹ năng vận dụng lý thuyết vào thực hành của
mỗi học viờn trong nhúm và thỏi độ thực hành của học viờn.
- Kết quả cần đạt được:
+ Chọn được bỡnh mẫu đạt tiờu chuẩn để nhõn nhanh + Thực hiện nhõn nhanh chồi đỳng với quy trỡnh
+ Mẫu sau khi cấy đảm bảo hệ số nhõn, chất lượng chồi, tỷ lệ sống và tỷ lệ vụ trựng
Bài tập 4: Thực hành tạo cõy hoàn chỉnh cho chồi hoa lily nuụi cấy?
- Cỏch thức: chia cỏc nhúm nhỏ (5 – 10 học viờn/nhúm), mỗi nhúm nhận
- Thời gian hoàn thành: 3 giờ/1 nhúm - Hỡnh thức trỡnh bày: thực hành tại chỗ
- Phương phỏp đỏnh giỏ: kỹ năng vận dụng lý thuyết vào thực hành của
mỗi học viờn trong nhúm và thỏi độ thực hành của học viờn.
- Kết quả cần đạt được:
+ Chọn được bỡnh mẫu đạt tiờu chuẩn
+ Thực hiện tạo cõy hoàn chỉnh đỳng với quy trỡnh
+ Mẫu sau khi cấy đảm bảo tỷ lệ ra rễ, số lượng rễ, chất lượng rễ, tỷ lệ sống và tỷ lệ vụ trựng
Bài tập 5: Thực hành ra cõy và chăm súc mầm hoa lily tại vườn ươm?
- Cỏch thức: chia cỏc nhúm nhỏ (5 – 10 học viờn/nhúm), mỗi nhúm nhận
nhiệm vụ ra cõy và chăm súc cho 5 bỡnh lily đó cú cõy hoàn chỉnh
- Thời gian hoàn thành: 3 giờ/1 nhúm - Hỡnh thức trỡnh bày: thực hành tại chỗ
- Phương phỏp đỏnh giỏ: kỹ năng vận dụng lý thuyết vào thực hành của
mỗi học viờn trong nhúm và thỏi độ thực hành của học viờn.
- Kết quả cần đạt được:
+ Chọn được bỡnh cõy hoàn chỉnh đạt yờu cầu ra cõy
+ Thực hiện ra cõy và chăm súc cõy mầm ở vườn ươm đỳng với quy trỡnh + Cõy mầm sau khi ra cõy đảm bảo tỷ lệ sống và chất lượng cõy con xuất vườn
D. Ghi nhớ: Cần chỳ ý một số nội dung trọng tõm:
- Mụi trường vi nhõn giống hoa lily - Quy trỡnh vi nhõn giống hoa lily
Bài 4: Vi nhõn giống hoa hồng mụn Mó bài: MĐ 05 – 04
Mục tiờu
- Thành thạo cỏc bước cụng việc thực hiện trỡnh tự cỏc giai đoạn vi nhõn giống cõy hoa hồng mụn theo đỳng quy trỡnh
A. Giới thiệu quy trỡnh vi nhõn giống hoa hồng mụn
B. Cỏc bƣớc tiến hành vi nhõn giống hoa hồng mụn