độ IBA, NAA và IAA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Nhân Sâm (Panax ginseng C.A. Meyer)
Theo nguyên lý chung của nuôi cấy mô tế bào thực vật, khi sử dụng phối hợp cytokinin và auxin với nồng độ và tỷ lệ thích hợp không những nâng cao hệ số nhân chồi hơn nhiều so với môi trường chỉ có cytokinin mà còn có tác dụng tốt đến chất lượng của chồi in vitro. Nhiều kết quả nghiên cứu cũng đã khẳng định hiệu quả phối hợp của auxin và cytokinin đến hệ số nhân nhanh chồi trên nhiều đối tượng thực vật khác nhau. Trên cây địa liền (Kaempferia
galanga), Parida và cs (2010) đã chỉ ra rằng môi trường MS có bổ sung 1 mg/l BA và 0,5 mg/l IAA cho hệ số nhân nhanh chồi cao nhất [39]. Nghiên cứu nhân giống in vitro của Larraburu và cs (2012) trên cây Handroanthus
impetiginosus cũng cho thấy môi trường có bổ sung BA và IBA với nồng độ lần lượt là 20 µM và 1 µM có hệ số nhân, chiều cao chồi lớn nhất [35]. Trên cơ sở đó, tôi đã tiến hành nghiên cứu BA ở nồng độ 0,5mg/l sử dụng phối hợp với IBA, NAA và IAA ở các nồng độ thay đổi từ 0,05 đến 1,0mg/l mục đích để nâng cao hệ số nhân chồi in vitro cây Nhân Sâm, kết quả được trình bày ở bảng 4.5 và hình 4.5
Bảng 4.5: Kết quảảnh hưởng của nồng độ BA (0,5mg/l) kết hợp với các nồng độ IBA, NAA và IAA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Nhân Sâm (Panax ginseng C.A. Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy)
Chỉ số theo dõi CT Nồng độ (mg/l) Số mẫu nuôi cấy (mẫu/CT)
IBA NAA IAA Tổng chồi (chồi) Hệ số nhân (lần) Chất lượng chồi Tổng chồi (chồi) Hệ số nhân (lần) Chất lượng chồi Tổng chồi (chồi) Hệ số nhân (lần) Chất lượng chồi CT1 (Đ/C) 0 30 141 4,7 +++ 139 4,6 +++ 140 4,7 +++ CT2 0,05 30 159 5,3 +++ 156 5,2 +++ 93 3,1 +++ CT3 0,1 30 186 6,2 ++ 174 5,8 ++ 111 3,7 +++ CT4 0,5 30 171 5,7 + 159 5,3 + 144 4,8 ++ CT5 1,0 30 105 3,5 + 96 3,2 + 123 4,1 + LSD.05 CV% 0,17 0,21 0,19 1,8 2,4 2,5 Chú thích:
Môi trường bổ sung IBA và NAA cho hệ số nhân cao nhất ở CT3 (nồng độ 0,1mg/l), hệ số nhân lần lượt là 6,2 và 5,8 chồi/mẫu, chồi nhỏ và xanh. Môi trường bổ sung IAA hệ số nhân cao nhất ở CT4 (nồng độ 0,5mg/l), hệ số nhân 4,8 chồi/mẫu, chồi nhỏ và xanh.
Môi trường nền = MS (khoáng đa lượng, vi lượng, vitamin) có bổ sung thêm BA 0,5mg/l+ Inositol 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l, pH = 5,6 - 5,8.
+++ Chồi tốt: mập, xanh
++ Chồi trung bình: nhỏ, xanh + Chồi yếu: nhỏ, xanh nhạt
Hệ số nhân (lần) 4,7 5,3 6,2 5,7 3,5 5,2 5,8 5,3 3,2 4,7 3,1 3,7 4,8 4,1 4,6 0 1 2 3 4 5 6 7 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 Công thức HSN IBA HSN NAA HSN IAA
Hình 4.5.a: Hệ số nhân chồi cây Nhân Sâm (Panax ginseng C.A. Meyer)
trên môi trường bổ sung BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA và IAA (sau 30 ngày nuôi cấy)
Hình 4.5.b: Chồi cây Nhân Sâm (Panax ginseng CA. Meyer) trên môi
trường kết hợp BA (0,5mg/l) với các nồng độ IBA, NAA và IAA sau 30 ngày nuôi cấy
1. Công thức 3: BA 0,5mg/l kết hợp với IBA 0,1mg/l chồi nhỏ và xanh 2. Công thức 3: BA 0,5mg/l kết hợp với NAA 0,1mg/l chồi nhỏ và xanh 3. Công thức 4: BA 0,5mg/l kết hợp với IAA nồng độ 0,5mg/l chồi nhỏ và xanh Đối với IBA: Giá trị LSD.05 đạt 0,17 các CT2, CT3, CT4 có sự sai khác có ý nghĩa so với công thức đối chứng ở mức độ tin cậy 95%. CT5 có sự sai khác không có ý nghĩa so với công thức đối chứng ở mức độ tin cậy 95%. Kết
quả trên cho thấy, khi tăng nồng độ IBA từ 0 - 0,1mg/l hệ số nhân tăng, nồng độ IBA 0,5 - 1,0mg/l hệ số nhân chồi có xu hướng giảm. Nồng độ IBA 0,1mg/l (CT3) cho hệ số nhân cao nhất 6,2 chồi/mẫu, chất lượng chồi trung bình (hình 1). Hệ số nhân chồi thấp nhất ở CT5 (nồng độ IBA 1,0mg/l) hệ số nhân đạt 3,5 chồi/mẫu, chất lượng chồi yếu.
Với giá trị LSD.05 đạt 0,21 các CT2, CT3, CT4 có sự sai khác có ý nghĩa so với công thức đối chứng ở mức độ tin cậy 95%. CT5 có sự sai khác không có ý nghĩa so với công thức đối chứng ở mức độ tin cậy 95%. Trong đó, CT3 (nồng độ NAA 0,1mg/l) cho hệ số nhân chồi cao nhất 5,8 chồi/mẫu, chất lượng chồi trung bình, chồi nhỏ và xanh (hình 2). Nồng độ NAA khi vượt quá 0,1mg/l thì hệ số nhân chồi có xu hướng giảm, cụ thể ở CT4 (nồng độ NAA 0,5mg/l) hệ số nhân đạt 5,3 chồi/mẫu, CT5 (nồng độ NAA 1,0mg/l) hệ số nhân chỉ đạt 3,2 chồi/mẫu, chất lượng chồi yếu.
Qua bảng 4.5 và hình 4.5 cho thấy, bổ sung nồng độ IAA vào môi trường MS + BA 0,5mg/l không có hiệu quả trong nâng cao hệ số nhân chồi. Với giá trị LSD.05 đạt 0,19 các công thức 2, công thức 3, công thức 5 có sự sai khác không có ý nghĩa so với công thức đối chứng ở mức độ tin cậy 95%. Công thức 4 hệ số nhân cao hơn so với đối chứng nhưng không đáng kể.
Kết luận: Sự kết hợp giữa BA với IBA, NAA cho hệ số nhân cao hơn so với kết hợp với IAA.
Kết quả trên có thể giải thích IBA và NAA là auxin được tổng hợp nhân tạo nên hoạt tính cao hơn không bị tác động của enzyme IAA oxydase, vì thế IBA và NAA bền hơn so với IAA [16].
Có nhiều nghiên cứu công bố môi trường nhân nhanh có sự kết hợp giữa BA với IBA và BA với NAA cho hệ số nhân chồi cao. Kết quả của tôi phù hợp với các nghiên cứu đó. Trên đối tượng Sâm Cau (Curculigo orchiodes Gaertn) số chồi đạt lớn nhất trên môi trường MS bổ sung IBA 1mg/l + BA 2,5mg/l (với 17,9 chồi/mẫu cấy) [22].
Dương Tấn Nhựt và cs (2009) [15], nghiên cứu Sâm Ngọc Linh (Panax
vietnamensis Ha et Grushv.) trên môi trường MS bổ sung BA 1,0mg/l + NAA 1,0mg/l + đường 50g/l khả năng tái sinh chồi từ mô sẹo cao nhất. Môi trường 1/2 MS bổ sung BA 1mg/l + NAA 0,5mg/l + đường 50g/l + than hoạt tính 2,0g/l là tốt nhất trong giai đoạn tăng trưởng chồi.
Kết luận: Môi trường tối ưu cho quá trình nhân nhanh chồi là: môi trường MS bổ sung BA (0,5mg/l) kết hợp với IBA nồng độ 0,1mg/l hệ số nhân đạt cao nhất 6,2 chồi/mẫu, chồi xanh nhỏ.