3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ựề tài
1.2. VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ VỊT
Virus gây bệnh dịch tả vịt là loại DNA virus thuộc họ Herpesvirideae nhóm Herpesvirus. Virus chỉ có một serotyp ựược biết ựến nhưng có nhiều chủng có ựộc lực khác nhau tồn tại trong tự nhiên (Nguyễn Như Thanh, 2001). Theo Li H., Liu S., Kong X. (2006) virus gây bệnh dịch tả vịt có thể ựược phân loại vào phân họ Alphaherpesvirinae trong họ Herpesviridaẹ
1.2.1. Hình thái, kắch thước
Virus dịch tả vịt có hình thái gần tròn, có lớp vỏ bọc bên ngoài và có một lõi ở giữạ
Về kắch thước, virus hoàn chỉnh (có màng nhân bao quanh) có ựường kắnh trung bình 60nm. Virus chưa hoàn chỉnh (không có màng nhân bao quanh) có ựường kắnh trung bình là 100nm. Virus có ựường kắnh tăng dần khi cấu trúc dần ựược hoàn thiện. Ở những tế bào ựược gây nhiễm virus, sau 24 giờ thấy các hạt vùi trong nhân và nguyên sinh chất. đó là những tập hợp không có hình thù, trông
giống như bụị Trong nhân, hạt virus có ựường kắnh là 93,5 nm; trong nguyên sinh chất có ựường kắnh là 136 nm và thành thục ở không bào với ựường kắnh 250 nm.
Theo Trần Minh Châu (1980), ở Việt Nam, virus dịch tả vịt cường ựộc chủng 769 có hình thái và cấu trúc giống như virus mà Proctor S.M., Pearson G.L., Leibovitz L. (1975) ựã mô tả.
Virus dịch tả vịt qua ựược lọc Chamberland, Berkefeld nhưng không qua ựược màng lọc Seitz. Bằng phương pháp lọc qua màng lọc; Hess và Dardini (1968) ựã nhận xét, virus dịch tả vịt nhược ựộc chủng Jansen và virus cường ựộc có kắch thước 150 - 250 nm.
1.2.2. Sức ựề kháng
Với nhiệt ựộ, ở 220C virus giảm dần tắnh gây nhiễm ựến 30 ngày thì chết. Virus bị mất hoạt tắnh ở 500C sau 2 giờ 30 phút. Nếu ựược sấy khô bằng CaCl2
thì sau 9 ngày virus bị chết. (Hess, 1968). Theo Nguyễn Vĩnh Phước (1978) ở 00C - 40C virus không bảo quản ựược 3 tháng nhưng ngâm trong dung dịch Glyxerin 50% thì virus giữ ựược ựộc lực trong thời gian trên. Theo Nguyễn Như Thanh (2001) trong ựiều kiện lạnh từ -100C ựến -200C, virus có thể tồn tại rất lâụ Làm ựông khô các chất chứa virus không những có thể giữ virus nhiều năm mà còn không làm mất ựộc lực của virus.
Với pH môi trường, virus ổn ựịnh ở pH từ 5 - 10 và bị bất hoạt khi pH < 3 hoặc pH > 10.
Với một số nhân tố hoá học, virus dịch tả vịt rất nhạy cảm với ete và chloroform. Dưới tác dụng của 2 chất này, virus bị phá huỷ. Kunst (1967) cho rằng Natri lauryl sulfate, Natridesoxycholate, Zephirol, Saponin có ảnh hưởng tới virus. Theo Nguyễn Thát (1975) thì cồn 750 diệt virus trong 5-30 phút, acid phenic 0,5% diệt virus sau 30 phút. NaOH 2% và NH4OH 0,5% ở 220C cũng giết chết virus sau 30 phút.
Với một số enzym, virus dịch tả vịt bị các men Trypsin, Chimotrypsin, Lypase của tuỵ phá huỷ (Dardini ẠH. and W.R. Hess, 1968).
Ở môi trường ngoài, với ựiều kiện nhiệt ựộ phòng thắ nghiệm, virus có thể tồn tại tới 30 ngày (OIE, 2006). Trong ựiều kiện tự nhiên, virus có thể tồn tại một thời gian khá dài, 5 ngày kể từ khi con vật cuối cùng chết vẫn có thể làm lây bệnh cho vịt khoẻ nếu nhốt chúng vào chuồng cũ (Trần Minh Châu, 1987).
1.2.3. độc lực
đã xác ựịnh ựược một số chủng virus dịch tả vịt có ựộc lực khác nhau: - Hà Lan có chủng O ựộc lực mạnh nhất, sau ựó ựến các chủng W59, W60, N (Jansen, 1968).
- Việt Nam có chủng 769, 880 có ựộc lực mạnh nhất, sau ựó là các chủng NH, NB, C, T (Trần Minh Châu, 1987).
Nguyễn đức Hiền (2005) phân lập một chủng virus gây bệnh dịch tả vịt ở Cần Thơ và cho biết chủng virus này có ựộc lực cao, có khả năng gây bệnh và gây chết vịt ở phòng thắ nghiệm khi tiêm bắp với liều 103ELD50/ml.
Năm 2005, tác giả Nguyễn Ngọc điểm (2005) cũng ựã phân lập thành công chủng virus cường ựộc dịch tả vịt VG-2004. Qua bước ựầu khảo sát ựặc tắnh sinh học của chủng virus này tác giả cho biết virus dịch tả vịt chủng VG- 2004 có ựộc lực mạnh hơn virus dịch tả vịt chủng 769 do tác giả Trần Minh Châu phân lập.
1.2.4. đặc tắnh nuôi cấy
Virus dịch tả vịt không có khả năng gây ngưng kết hồng cầu, không hấp thụ hồng cầụ Trong tế bào phôi gà, vịt bị nhiễm virus, virus hình thành tiểu thể bao hàm. Trong môi trường nuôi cấy tế bào, virus có khả năng hình thành Plaguẹ Khi có mặt bổ thể, kháng thể dịch tả vịt có khả năng làm tan tế bào xơ phôi vịt bị nhiễm virus.
* Nuôi cấy trên phôi
Theo Jansen (1968) virus dịch tả vịt sau khi ựã tiêm truyền trên phôi vịt sẽ dễ dàng thắch nghi trên phôi gà.
kinh nghiệm thì virus dịch tả vịt của Việt Nam có vẻ như khó nuôi cấy trên phôi gà (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978).
Về khả năng nhân lên trên phôi của virus dịch tả vịt, Trần Minh Châu (1980) cho rằng màng nhung niệu là ựường tiêm truyền tốt nhất. Theo Nguyễn Như Thanh (2001), nuôi cấy virus trên màng niệu ựệm hoặc xoang niệu mô của thai vịt ấp 12 ngày, thai sẽ chết sau 4- 6 ngày với các bệnh tắch xuất huyết trên da vùng lưng, rìa cánh, ựầu; gan và quả tối có ựiểm xuất huyết và hoại tử. Một số phôi có biểu hiện phù, một số phôi có hiện tượng màng nhung niệu sưng dàỵ
Virus dịch tả vịt có thể cảm nhiễm với phôi ngỗng ấp 12 ngày tuổi và giết chết phôi sau 3-5 ngàỵ Virus cường ựộc dịch tả vịt ắt mẫn cảm ở những lần cấy truyền ựầu tiên trên phôi gà. đối với phôi gà 9-10 ngày tuổi phải tiếp truyền virus sau ắt nhất 12 ựời liên tiếp virus mới thắch nghị
Qua nhiều lần cấy truyền virus trên phôi vịt, phôi gà ựộc lực của virus sẽ giảm dần với vịt. Người ta sử dụng những chủng virus nhược ựộc này qua phôi gà, phôi vịt ựể chế tạo vacxin.
* Nuôi cấy trên tế bào
Virus dịch tả vịt có thể nuôi cấy trên môi trường tế bào phôi vịt, phôi gà một lớp và gây ra biến ựổi bệnh lý cho tế bào (Jansen, 1968). Burgess (1981) công bố virus dịch tả vịt có khả năng nhân lên trên loại tế bào xơ phôi vịt, xơ phôi ngan, gan phôi ngan, xơ phôi gà. Theo Ronald Atlanasio thì không quan sát thấy biến ựổi bệnh lý tế bào khi nuôi cấy virus trên tế bào thận lợn dòng PK 15, tế bào WI-38, RD Hela, Hep-2, Vero, LleMK, BGM và BD (Trần Minh Châu, 1987).
Ở Việt Nam, khi nghiên cứu nuôi cấy virus cường ựộc trên tế bào xơ phôi vịt, sau 36 giờ có hiện tượng tế bào co tròn lại, thoái hoá và rụng khỏi thành bình tạo thành khoảng trống, xung quanh là những hợp bào (synciticum) như những dải ựăng ten. Lớp tế bào này sẽ bị phá huỷ hoàn toàn vào ngày thứ 4. Trong các bình nuôi cấy virus ở nồng ựộ loãng, có thể phát hiện ựược Plague
(những ổ tế bào bị virus gây thoái hoá bằng cách nhuộm lớp tế bào với dung dịch fushin kiềm hoặc ựỏ trung tắnh hoặc tắm kết tinh (Nguyễn Lân Dũng, 1972) . Nếu nhuộm bằng fushin kiềm trong vài giây, sẽ quan sát thấy Plague hiện ra trên nền ựỏ, hình tròn, bờ không gọn và có ựường kắnh 1 - 2 mm (Trần Minh Châu, 1987).
Theo Dardini và Hess (1968) Plague của virus dịch tả vịt cường ựộc hình tròn, to nhỏ không ựều, có ựường kắnh từ 1- 8 mm. Plague của virus dịch tả vịt nhược ựộc thì ựều hơn, có bờ gọn và sáng, ựường kắnh là 3 - 4 mm. Nguyễn Như Thanh (2001) mô tả, với các chủng virus nhược ựộc, Plague ựều, gọn và sáng rõ, ở ngày thứ 3 có ựường kắnh 3 mm, sau 6 ngày là 4 - 7 mm và sau 14 ngày sẽ là 10 mm.
Sự xuất hiện Plague trên các môi trường nuôi cấy khác nhau là khác nhaụ Virus cường ựộc thì nhân lên và hình thành các Plague ựẹp theo thứ tự các môi trường sau: tế bào xơ phôi ngan và uyên ương, xơ phôi vịt Bắc Kinh, vịt ựen, vịt ựầu ựỏ; còn Plague trên tế bào xơ phôi vịt mốc và vịt bãi là kém nhất. Virus dịch tả vịt nhược ựộc của Hà Lan lại có thứ tự các môi trường thắch hợp khác: tế bào xơ phôi vịt Bắc Kinh, tế bào xơ phôi gà, trĩ Mông Cổ, cun cút (Ronald Atlanasio, Robert Olson, James. C. Johnson, 1980) (Trần Minh Châu, 1987). đối với virus nhược ựộc chủng Jansen, virus rất thắch ứng trên môi trường tế bào xơ phôi gà. Chỉ sau 24 giờ nuôi cấy virus, tế bào ựã bắt ựầu có hiện tượng huỷ hoạị Tế bào bị biến dạng, co tròn, phình to ra, tập trung thành từng ựám và có thể nhìn rõ dưới kắnh hiển vi quang học (Nghiên cứu của bộ môn VSV-TN trường đHNN Hà Nội).
* Nuôi cấy trên ựộng vật cảm thụ
Có thể dùng vịt con 1 ngày tuổi ựể nuôi cấy virus. 3 - 12 ngày sau vịt chết với triệu chứng, bệnh tắch ựiển hình của bệnh. Ngoài vịt con có thể dùng ngan con, ngỗng con, gà con mới nở ựể gây bệnh.
1.3. MIỄN DỊCH CHỐNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT