III. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1 Nội dung nghiên cứu:
2.Vật liệu và phương pháp nghiên cứu:
2.1 Vật liệu: gồm tủ lạnh, kính hiển vi cĩ độ phĩng đại 100 lần, cốc tam giác,
đũa thuỷ tinh, ống hút, đĩa lồng petri, phiến kính, túi nilơng, găng tay, rây lọc, máy tính, xilanh 20cc, nước sạch…
Hố chất: Xanh metylen
Thuốc tẩy: Han-DERTIL B và FASCIOLID
2.2 Phương pháp nghiên cứu:
2.2.1 Phương pháp lấy mẫu:
Mẫu phân được lấy bằng cách đưa tay vào hậu mơn, lấy phân ở trực tràng cho vào túi nilơng, với khối lượng từ 5 – 10 gram, sau đĩ đánh dấu túi nilơng để phân biệt từng giống, từng lứa tuổi, từng vùng, từng lồi, từng xã để tiện theo dõi.
Mẫu phân lấy buổi sáng, buổi chiều đem soi ( kiểm tra ).
Nếu để sang ngày hơm sau thì phải cho vào tủ lạnh để hơm sau kiểm tra tiếp.
2.2.2 Phương pháp lắngcặn
+ Nguyên lý: Lợi dụng sự chênh lệch giữa tỷ trọng của nước và tỷ trọng của trứng sán lá gan. Trứng sán lá gan cĩ tỷ trọng nặng hơn sẽ chìm dưới đáy cốc tam giác, ta sẽ tách được trứng sán ra khỏi phân.
+ Cách làm: Lấy 5 – 10 gram mẫu phân trâu, bị cho vào cốc nước sạch, dùng đũa thuỷ tinh khuấy đều cho tan rồi đem lọc qua rây lọc, sang qua một cốc tam giác khác, để yên 10 – 15 phút cho cặn lắng xuống rồi đổ nước trên đi, cho nước sạch vào khuấy đều và để yên cho cặn lắng xuống. Cứ làm như vậy liên tục nhiều lần đến khi thấy nước ở phần trên cốc tam giác trong suốt rồi đổ nước đi và gạn lấy cặn dưới đáy cốc cho vào đĩa lồng Petri, cho một giọt dung dịch xanh Metylen vào rồi hút cặn nhỏ lên trên phiến kính sau đĩ đưa vào kính hiển vi để kiểm tra.
2.2.3 Phương pháp phân loại:
- Phân loại trứng sán lá gan: Dựa vào đặc điểm, hình thái, cấu tạo, màu sắc của trứng để nhận dạng : Cĩ hình bầu dục, phình rộng ở giữa và thon dần
- Phân loại cường độ nhiễm: Mỗi một mẫu phân được kiểm tra 3 lần trên 3 phiến kính sau đĩ chúng ta tính bình quân số trứng sán cĩ trên một mẫu phân.
* Cách đếm trứng phân loại cường độ nhiễm : +:1-5 trứng
+ +:6-10 trứng + + +:>10 trứng
2.2.4 Phương pháp tính trọng lượng trâu, bị:
Trước khi tẩy chúng tơi tiến hành tính trọng lượng trâu, bị theo cơng thức: Trâu: 88,4 x ( vịng ngực )2 x dài thân chéo.
Bị: 90 x ( vịng ngực )2 x dài thân chéo. ( Các chiều đo được tính bằng cm )
2.2.5 Phương pháp xác định tuổi trâu, bị:
- Hỏi chủ vật nuơi.
- Kiểm tra răng để định tuổi.
2.2.6 Phương pháp thu lượm ký chủ trung gian:
Mỗi xã đại diện cho 1 vùng, chúng tơi tiến hành khảo sát ở 4 địa điểm : Kênh mương, nước đọng, ruộng trũng, đồng cỏ. Dùng một sợi dây dài 4m và 4 cọc xếp thành hình vuơng (1m2 )theo sơ đồ sau :
Cách bắt ốc trên ruộng, bãi chăn
1m 1m
1m2
Số ốc thu lượm được tại 5 vị trí của diện tích ruộng (vũng nước đọng, bãi chăn) được tính là mật độ ốc bình quân của ruộng (bãi chăn đĩ).
Chúng tơi chỉ bắt những con ốc cĩ đặc điểm là : Ốc khơng cĩ nắp miệng, màu vàng sẫm hoặc đen, cĩ vỏ mỏng, cĩ từ 3-4 vịng xoắn.
2.2.7 Phương pháp kiểm tra vĩ ấu ( Cercaria ) cĩ trong ốc: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Sau khi bắt ốc về, mổ lấy gan, tụy,dằm nát với nước muối sinh lý 0,9% trộn đều phết lên phiến kính đưa vào kính hiển vi soi để kiểm tra vĩ ấu Cercaria.
Cercaria cĩ hình thái giống con nịng nọc, kích thước nhỏ, cĩ một đuơi dài, cĩ giác miệng, giác bụng, hầu, thực quản và ruột phân thành hai manh tràng.
2.2.8 Phương pháp đánh giá:
Số mẫu cĩ trứng sán lá gan
Tỷ lệ nhiễm = x 100 Tổng số mẫu kiểm tra
Tổng số mẫu nhiễm ở mỗi cường độ
Cường độ nhiễm = x 100 Tổng số mẫu nhiễm
Số con khơng cịn trứng sán
Tỷ lệ sạch sán = x 100 Tổng số con tẩy
2.2.9 : Hiệu lực thuốc tẩy
- Tỷ lệ ra sán:lấy mẫu phân sau khi tẩy,đãi phân xác định tỷ lệ ra sán - Tỷ lệ sạch sán : Sau 7 ngày , 14 ngày , 21 ngày. Sau khi tẩy 7 ngày lấy mẫu lần 1, sau 14 ngày lấy mẫu lần 2 và sau 21 ngày lấy mẫu lần 3 (kể từ ngày sử dụng thuốc tẩy). Để xét nghiệm tìm trứng sán lá gan.
- Tỷ lệ tái nhiễm (sau 3 tháng) : Lấy mẫu phân của gia súc để xét nghiệm tìm trứng sán lá gan.
Lơ thí nghiệm
Số gia súc
thí nghiệm Loại thuốc Liều lượng Cách dùng Trâu Bị
I 10 5 Fasciolid 4ml/100kgP Tiêm dưới da
II 9 6 Han-Dertil B Bị: 4mg/kgP/lần Cho uống Trâu: 8mg/kgP/lần
- Số trâu bị sử dụng trong thí nghiệm cĩ cường độ nhiễm sán lá gan (+ +) và (+++)