61 để cắt dùng enzym

6. HÓA TÍNH FLAVONOID

61 để cắt dùng enzym

để cắt dùng enzym glucose glucosidase galactose galactosidase αL-rhamnose Taka-diastase* neohesperidose naringinase anthocyanin anthocyanase

acid glucuronic glucuronidase c. Thủy phân bằng enzym

Mỗi loại enzym sẽ thủy phân 1 vài glycosid nhất định. Các loại enzym này có bán sẵn trên thị trường.

7.1. Dùng ROH + nước

- Thường : MeOH, EtOH (70-90%) nóng hoặc nguội. (thu được các glycosid + genin ph.cực + tạp ph.cực) - Loại tạp kém phân cực bằng các d.môi kém ph.cực - Kết tinh / tủa trong các dung môi thích hợp

- Thu được genin + tạp kém ph.cực (ch’ béo, chlorophyll). → loại tạp tiếp bằng các phương pháp thích hợp.

- Thường áp dụng với các polymethoxy flavonoid 7.2. Dùng d.môi ph.cực trung bình (Cf, DCM ...)

63

7.3. Dùng dãy dung môi

- Ngấm kiệt với (ROH + H2O),

- Cô, loại tạp kém phân cực bằng cách lắc với EP.

lớp nước chứa flavonoid + tạp phân cực (đường ...) - Lắc lớp nước này với Et2O rồi với EtOAc,

lớp Et2O chủ yếu chứa genin,

lớp EA chủ yếu chứa glycosid + ít genin còn sót lớp nước chủ yếu chứa ose,

- Tiếp tục phân lập bằng các kỹ thuật khác (SKC…) - Áp dụng với các glycosid phân cực

bột dược liệu dịch nước dịch nước Et2O EtOAc dịch cồn dịch Et2O

dịch EtOAc các Flavonoid

ROH

65

7.4. Dùng cồn acid

- Ngấm kiệt bằng ROH loãng chứa 0.1% - 1% acid (HCl, AcOH, tartric, citric...).

- Cô dịch chiết ở nhiệt độ thấp hoặc đông khô.

- Loại tạp, rồi tinh chế bằng các ph.pháp thích hợp. - Áp dụng đối với các flavonoid kém bền.

7.5. Dùng cồn kiềm

- Chiết dược liệu với (ROH + H2O) + NaOH

- Trung hòa dịch (= acid vô cơ loãng), cô dung môi, - acid hóa, Flavonoid (glycosid & aglycon) sẽ tủa.

- Tinh chế bằng (C* + ROH nóng) thu dịch cồn nóng - Để nguội, để lạnh → Flavonoid sẽ kết tinh.

- Kết tinh lại lần 2, nếu cần.