- Bình cầu cổ nhám 2 cổ đáy tròn 100 mL, 250 mL.
2.6 Đo độ hấp thu DPPH
2.6.1 Cơ sở thực nghiệm
Trong các phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa, phương pháp đánh bắt gốc tự do 1,1−diphenyl−2−picrylhydrazyl (DPPH) dùng để đánh giá rất phù hợp để khảo sát hoạt tính chống oxy hóa của các flavonoid, do các flavonoid khảo sát không hấp thu trong vùng hấp thu của DPPH. Hơn nữa sử dụng phương pháp này rất thuận lợi để nghiên cứu đánh giá mang tính sàng lọc và cho kết quả có tính khả thi sinh học tương đối cao. Phương pháp đánh bắt gốc tự do DPPH cũng được rất nhiều tác giả áp dụng để nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa của các flavonoid, vì so với các phương
pháp khác, phương pháp đo DPPH có đặc điểm là khá đơn giản, rất thích hợp thực hiện trong điều kiện phòng thí nghiệm.
Nguyên tắc: Các chất nghiên cứu có tác dụng chống oxy hóa theo cơ chế dập tắt
gốc tự do bằng phản ứng thuận nghịch giữa mẫu đo và DPPH sẽ làm giảm màu của dung dịch DPPH. Xác định khả năng này bằng cách đo độ hấp thu ở bước sóng có độ hấp thu cực đại tại 517 nm.
1,1−diphenyl−2−picrylhydrazyl 1,1−diphenyl−2−picrylhydrazine
2.6.2 Dụng cụ và hóa chất
Hesperidin, hesperetin, diosmin, diosmetin, DTA, DTM, DTAl, DPPH, DMSO, ethanol.
Bình định mức 10 mL, 250 mL, 500 mL, micropipette 1mL, 5mL, ống COD.
2.6.3 Tiến hành thực nghiệm
Lần lượt pha các chất: hesperidin, hesperetin, diosmin, diosmetin, DTA, DTM, DTAl trong DMSO. Lấy 0,25 mL các mẫu thử trộn với 4,75 mL dung dịch DPPH nồng độ 200 µM (trong ethanol) thu được dung dịch cuối cùng có nồng độ DPPH là 190 µM và các mẫu thử tương ứng với sự thay đổi thể tích. Dung dịch được lắc đều và để ở nhiệt độ phòng trong 30 phút, sau đó đem đo độ hấp thu của hỗn hợp phản ứng ở bước sóng 517 nm để xác định khả năng bắt gốc tự do trên máy đo quang phổ DR−2000 (Viện Công nghệ Hóa học). Mỗi mẫu đo 2 lần, lấy giá trị trung bình. Kết quả được tính theo công thức như đã nêu ở mục VI.5.6 Tổng quan.
Giá trị SC50 được xác định như sau: Vẽ đồ thị biểu diễn tỷ lệ (%) khả năng bắt gốc tự do theo nồng độ khảo sát của chất cần thử nghiệm bằng phần mềm excel. Từ đồ thị nội suy ra giá trị nồng độ bắt 50% gốc tự do.
NO2NO2 NO2 N N O2N + RH NO2 NO2 H N N O2N + R