2. Ứng dụng của phương phỏp phổ hấp thu nguyờn tử trong thực phẩm :
2.2.2. Phương phỏp tham chiếu
Tiờu chuẩn này được xõy dựng dựa theo phương phỏp chuẩn số 972.23 của Hiệp hội cỏc nhà hoỏ học phõn tớch (AOAC) cụng bố năm 1995.
2.2.3 Nguyờn tắc
Mẫu thuỷ sản sau khi được tro hoỏ trong lũ nung sẽ được hoà tan hoàn toàn bằng dung dịch axit clohyđric loóng. Chỡ trong dung dịch mẫu được xỏc định trờn mỏy quang phổ hấp thụ nguyờn tử.
2.2.4 Thiết bị, dụng cụ, hoỏ chất và chất chuẩn2.2.4.1.Thiết bị và dụng cụ 2.2.4.1.Thiết bị và dụng cụ
- Mỏy quang phổ hấp thụ nguyờn tử cú trang bị đốn catốt chỡ rỗng bước súng cài đặt là 283,3 nm, sử dụng ngọn lửa axờtylen-khụng khớ với chiều rộng của đầu đốt là 4 inch. - Chộn sứ dung tớch 50 ml, độ sõu 5 cm hoặc cốc thuỷ tinh cú mỏ bằng thạch anh, dung tớch 100 ml.
- Tủ sấy nhiệt độ 1500 C.
- Lũ nung kiểm soỏt được nhiệt độ trong khoảng từ 250 đến 6000 C với sai lệch khụng quỏ 100 C.
- Dụng cụ thuỷ tinh đó được rửa sạch bằng axit nitric nồng độ 8N và trỏng lại bằng nước cất trước khi sử dụng.
- Cõn phõn tớch cú độ chớnh xỏc loại đến 0,01g và loại đến 0,0001 g.
2.2.4.2 Hoỏ Chất và chất chuẩn
- Dung dịch axit clohyđric (HCl), nồng độ 1N: Pha loóng 82 ml axit clohyđric đậm đặc bằng nước cất đến 1000 ml.
- Dung dịch axit nitric (HNO3) nồng độ 1N.
- Axit percloric (HClO4) đậm đặc, nồng độ 70,5 %. - ễxit lantan (La2O3).
- Dung dịch đệm
+ Cho 163 g EDTA vào trong bỡnh định mức 2000 ml, sau đú thờm 200 ml nước cất và
một lượng vừa đủ hyđroxit amon (NH4OH) để hoà tan hết EDTA. Thờm 8 giọt chỉ thị
methyl da cam vào dung dịch ETDA.
+ Cho 500 ml nước cất vào một cốc thuỷ tinh rồi từ từ cho thờm 60 ml dung dịch axit percloric đậm đặc, khuấy đều rồi để nguội. Sau đú, cho 50 g ụxit lantan vào cốc rồi khuấy đều để hoà tan hết lượng ụxit lantan này.
+ Rút từ từ dung dịch ụxit lantan vào dung dịch ETDA pha ở trờn, vừa rút vừa khuấy mạnh. Nếu cần thiết, thờm hyđroxit amon vào dung dịch trờn để giữ cho dung dịch cú tớnh kiềm đối với methyl da cam (dung dịch cú màu vàng). éịnh mức đến vạch bằng nước cất.
- Dung dịch chỡ chuẩn
+ Dung dịch chuẩn gốc, 1,0 mg/ml
Hoà tan 1,5985 g nitrat chỡ chuẩn trong khoảng 500 ml dung dịch axit nitric nồng độ 1N. Sau đú, định mức thành 1000 ml bằng dung dịch axit nitric nồng độ 1N trong bỡnh định mức.
+ Dung dịch chuẩn trung gian, 10m g/ml
Lấy chớnh xỏc 10 ml dung dịch chuẩn gốc cho vào bỡnh định mức 1000 ml, thờm 82 ml dung dịch axit clohyđric nồng độ 1N vào bỡnh. Sau đú, định mức lờn bằng nước cất.
+ Dung dịch chuẩn làm việc
Pha loóng dung dịch chuẩn trung gian thành cỏc dung dịch chuẩn làm việc cú hàm lượng chỡ lần lượt là 0,0; 0,2; 0,6; 1,0; 3,0; 5,0 và 10,0 m g Pb/ml bằng dung dịch axit clohyđric nồng độ 1N trong cỏc bỡnh định mức dung tớch 50 ml.
2.2.5. Phương phỏp tiến hành 2.2.5.1 Chuẩn bị mẫu trắng
Làm bay hơi 4 ml dung dịch axit nitric đậm đặc trong chộn sứ đến khụ trờn bếp cỏch thuỷ. Hoà tan cặn bằng 20 ml dung dịch axit clohyđric nồng độ 1N và chuyển dung dịch vào bỡnh định mức 25 ml. éể nguội bỡnh và định mức tới vạch bằng axit clohyđric nồng độ 1N.
2.2.5.2 Chuẩn bị mẫu thử
- Cõn khoảng 25,0 g mẫu cho vào chộn sứ rồi sấy khụ trong tủ sấy trong thời gian 2 giờ ở nhiệt độ từ 1350 C đến 1500 C. Chuyển chộn sứ vào lũ nung và tăng dần nhiệt độ đến 5000C. Giữ nhiệt độ lũ ở 5000 C trong thời gian 16 giờ để tro hoỏ mẫu.
- Lấy chộn sứ ra để nguội đến nhiệt độ trong phũng. Cho 2 ml axit nitric đậm đặc vào chộn rồi làm bay hơi dung dịch trong chộn vừa đến khụ trờn bếp cỏch thuỷ. éặt chộn sứ trở lại vào lũ nung ở nhiệt độ thường, sau đú tăng dần nhiệt độ đến 5000 C và giữ ở nhiệt độ này trong khoảng 1 giờ.
- Lấy chộn ra, để nguội và lặp lại thao tỏc trờn cho đến khi tro cú màu trắng hoàn toàn. - Cho 10 ml dung dịch axit clohyđric nồng độ 1N vào chộn cú tro rồi hoà tan tro bằng cỏch đun núng. Chuyển gạn dung dịch vào bỡnh định mức dung tớch 25 ml.
- éun núng phần tro cũn lại trong chộn 2 lần, mỗi lần với 5 ml dung dịch axit clohyđric nồng độ 1N rồi rút dung dịch vào bỡnh định mức 25 ml núi trờn. éể nguội và định mức tới vạch bằng axit clohyđric nồng độ 1N rồi lắc đều.
2.2.5.3 Tiến hành phõn tớch
- Tối ưu hoỏ cỏc điều kiện làm việc của mỏy quang phổ hấp thụ nguyờn tử tại bước súng cộng hưởng 283,3 nm và đặt tốc độ dũng của hỗn hợp axờtylen-khụng khớ theo hướng dẫn của nhà sản xuất về điều kiện làm việc chuẩn đối với chỡ.
- Xõy dựng đường chuẩn với cỏc hàm lượng của chỡ lần lượt là 0,0; 0,2; 0,6; 1,0; 3,0; 5,0 và 10,0 m g/ml (4.2.7, c) dựa trờn độ hấp thụ của chỳng. Trong trường hợp tớn hiệu nhận được yếu, phải điều chỉnh độ khuyếch đại để cú được độ hấp thụ A của dung dịch chuẩn (hàm lượng 0,2 m g/ml) khụng nhỏ hơn 1 %.
- Khi đường chuẩn cú độ tuyến tớnh tốt, tiến hành đo độ hấp thụ của dung dịch mẫu thử và mẫu trắng đó chuẩn bị như sau:
+ éối với dung dịch mẫu thử trong, khụng cú cặn lắng
Tiến hành xỏc định độ hấp thụ 3 lần theo cỏc bước sau đõy: Bơm lần lượt một dung dịch chuẩn sau đú là dung dịch mẫu thử. Nếu số lượng mẫu nhiều thỡ bơm lần lượt một dung dịch chuẩn và 3 dung dịch mẫu thử cho đến khi bơm hết dung dịch chuẩn, mẫu thử và mẫu trắng.
Thờm 1 ml dung dịch đệm vào cỏc dung dịch mẫu thử đó và mẫu trắng đó chuẩn bị và cỏc dung dịch chuẩn. Sau đú, tiến hành xỏc định độ hấp thụ của cỏc dung dịch
- Tớnh hàm lượng chỡ trong mẫu thụng qua đường chuẩn sau khi đó trừ đi mẫu trắng.
2.2.5.4 Yờu cầu về độ tin cậy của phộp phõn tớch
- éộ lặp lại của 2 lần bơm
éộ lệch chuẩn (CVs) tớnh theo độ hấp thụ của 2 lần bơm liờn tiếp của cựng một dịch chuẩn phải nhỏ hơn 0,5 %.
- éộ thu hồi (R)
éộ thu hồi được xỏc định bằng cỏch sử dụng 5 mẫu đó cho vào một lượng dung dịch chỡ chuẩn biết chớnh xỏc nồng độ. éộ thu hồi tớnh được phải nằm trong khoảng từ 85 % đến 115 %, độ thu hồi trung bỡnh phải lớn hơn 90 %.
2.2.6 Tớnh kết quả
Hàm lượng chỡ trong mẫu thử thuỷ sản được tớnh theo cụng thức sau:
2.2.6.1 éối với dung dịch mẫu thử trong, khụng cú cặn lắng mPb