0,4283 g G3-MPEG VH2O=100.Vmẫu Hòa tan Gắn thuốc Thẩm tách PAMAM G3.0-MPEG-5-FU Làm khô 24 h 2 x 20 phút
Tiến hành thẩm tách song song một mẫu chất mang PAMAM G3.0-MPEG không mang thuốc 5-FU có khối lượng tương đương với chất mang trong mẫu trên, với cùng một điều kiện và chế độ lấy mẫu. Mẫu thu được sử dụng làm mẫu trắng khi đo hấp thu A ở bước sóng 265,5 nm.
3.3.5 Thử nghiệm hiệu quả in vivo 5-fluorouracil nang hóa trong
PAMAM G3.0-MPEG trên chuột nang khối u vú của người
Thử nghiệm in vivo được tiến hành tại Phòng Thí nghiệm Tế bào gốc - Đại học Khoa học Tự nhiên TpHCM.
Chuột 12 tuần tuổi, được gây suy giảm miễn dịch trong 5 ngày sử dụng thuốc Busulfan (20 mg/kg) kết hợp với Cyclophosphamid (200 mg/kg) và được nuôi dưỡng trong điều kiện vô trùng. Vào ngày thứ 6, chuột được ghép tế bào ung thư vú MCF-7 (nồng độ ghép 107 tế bào/con) vào dưới da vùng đùi của chuột để tạo mô hình chuột mang khối u người. Ngày thứ 8 tiêm liều duy trì suy giảm miễn dịch. Ngày thứ 11, tế bào ung thư vú được ghép lần thứ 2 (nếu kích thước khối u chưa đạt cho thử nghiệm). Khối u xuất hiện và ổn định vào ngày thứ 14.
Các khối u được đánh giá dựa trên 2 tiêu chí:
Thời gian tồn tại ổn định trên chuột suy giảm miễn dịch: khối u phải tồn tại được trong vòng 10 ngày sau khi ghép mới có thể sử dụng cho việc kiểm tra thuốc.
Các tế bào trong khối u phải cho kết quả dương tính khi đánh giá bằng kháng thể kháng HLA bằng phương pháp flow cytometry.
Chuột được chia thành 3 lô: Lô 1: Đối chứng
Lô 2: Khảo sát khả năng chống ung thư vú của 5-FU nang hóa trong PAMAM G3.0-MPEG ở liều điều trị 10 mg/kg/ngày.
Lô 3: Khảo sát khả năng chống ung thư vú của 5-FU tự do ở cùng liều điều trị 10 mg/kg/ngày để so sánh.
Thời gian khảo sát là 15 ngày, theo dõi kích thước khối u thay đổi trong quá trình điều trị
Chương 4
4.1 Tổng hợp MPEG 5000 – p-nitrophenylchloroformate
Đặc điểm sản phẩm
Chất rắn dạng bột màu trắng
Hình 21 Sản phẩm MPEG – p-nitrophenylchloroformate
Công thức cấu tạo sản phẩm
NO2 O O O O CH3 n
Hình 22 Phổ 1H NMR của MPEG p - nitrophenyl carbonate
Bảng 2 Độ dịch chuyển hóa học 1H NMR của MPEG p - nitrophenyl carbonate
Proton δ, ppm δ, ppm
theo tài liệu
Đặc điểm, Hằng số ghép cặp J (Hz) Hb, Hc 7,39-8,28 7,37-8,26 Mũi đôi, J=9,3 Hf 4,44 4,42 Mũi đa Hg 3,65-3,81 3,34-3,80 Mũi đa Hh 3,38 3,38 Mũi đơn
Phổ 1H NMR có các tín hiệu đặc trưng như sau:
o Một mũi đa ở vị trí 4,44 ppm chứng tỏ sự có mặt của proton Hf trên dây MPEG ở vị trí liên kết với nhóm (-O-C=OO-)
o Hai mũi đôi ở các vị trí 8,28 ppm, 7,39 ppm chứng tỏ sự có mặt của các proton Hb, Hc của nhân benzene.
o Những mũi đa ở các vị trí 3,65-3,81 ppm chứng tỏ sự có mặt của các proton Hg của dây MPEG (-OCH2CH2O-).
o Một mũi đơn ở vị trí 3,38 ppm chứng tỏ sự có mặt của proton Hh của nhóm (CH3O-) ở đầu mạch của dây MPEG
4.2 Tổng hợp PAMAM G3.0-MPEG 5000
Đặc điểm sản phẩm
Chất rắn dạng bột màu trắng
Hình 23 Sản phẩm PAMAM G3.0-MPEG 5000