- PhUdng phap sinh hoc cho tha y: Cac dau hieu chuot bi nhiem doc warfarin qua dUdng tiep xiic da nhU nhau trong 3 Id chuot
d. Anh hUdng cua thdi gian den do ben man (phiit)
Sau khi khao sat pho hap thu cua san p h a m mau, a n h hUdng ciia lUdng thude thU va pH den san pham mau, chiing tdi nghien ciiu thdi gian ben m a u ciia san pham m a n (trong cung mot dieu kien nhU nhau ciia m a u nghien eilu). Chung tdi do mat do quang tai cac thdi (hem khac nhau. Mat do quang cUc dai sau 5 phiit va giU nguyen gia tri trong 45 phiit. NhU vay, thdi gian phat trien man la 5 phiit, thdi gian ben m a n la 45 phiit (hinh 8).
D 2,3 2,3 1,8 1,5 1-2 0,9 0,6 0,3 0 r T / 24 / 28 32 / 36 / 40 / 44 / 48 tph 4 8 12 16 20
Hinh 8. Anh liUdng cua thdi gian den do ben m a n e. Xac dinh khoang tuyen tinh
Dua vao cae ket qua thUc nghiem d tren, chiing tdi da xac dinh dUdc khoang tuyen tinh ciia warfarin la 0,01 - 0,3 mg.
g) PhUdng phap phan tich warfarin
- Tit cac dieu kien tdi Uu dd, chiing tdi dUa ra qui trinh phan tich warfarin trong i)han rdm nhU sau : Can lOg phan rdm cho vao cdc thuy tinh 50 ml, them 20 ml axeton. L^ic deu cho warfarin tan trong axeton. Loc hdn hdp dd qua giay loc gap. Trang riia cdc va giay loc 2 lan, mdi
lan hkng 5 ml axeton. Dich loc dUdc hitng vao mot chen su chiu nhiet
deii ndng chay. De ngudi chen sit. Hoa tan litdng hdn hdp trong chen sii b a n g 5 m l nude cat. Chuyen toan bo hdn hdp trong chen su' sang cdc thuy tinh 50 ml. Trang chen sU 3 lan, mdi lan bang 2 ml nUde eat. Axit
hoa bang dung dich HCl 35%. Dieu chinh pH = 2,06. Them 1 ml FeCl3
0,0035 M, dung (Uch se xuat hien m a n xanh tim. Do m a n tren quang pho ke d do dai sdng 360 n m sau 5 phiit. Neu mau xanh tim xuat hien qua n h a n h va citdng do m a u qua dam, ta phai pha loang dung dich man chua warfarin trUde khi cho 1 ml FeCl3 0,0035M (de bao dam ty le warfarin : FeCl3 la 1: 5 theo moi . Ket qua se dUde n h a n vdi so lan pha loang)-
- Thdi gian phan tich cham n h a t mat 2 gid. Cd the phat liien dUde warfarin d h a m lUdng 5 microgam.
- Kiem chiing giUa 2 phUdng phap cho thay : phUong phap hoa hoc chinh xac va dang tin cay : 248 hop phan dUde thU bang phUdng phap sinh hoc dem thU bang phUdng phap boa hoc, cho ket qua so dUdng tinh ciia 2 phUdng phap nhU nhau, ket qua nhU bang 9,10.
Bang 9 : Sd hop phan dUdng tinh theo 2 phUdng phap
Sd hop p h a n
248
So dUdng tinh PhUdng phap sinh hoc
188
PhUdng phap hoa hoe 188
Bang 10 : Thdi gian chuot bi nhiem doc va lUdng warfarin trong phan rom
Thcfi gian (ngay) Nong do warfarin 1/1000 1-2 1,045 3-4 1,070 5-6 0,610 7-8 0,176 9-10 0,075
2.2.2.3. Xac dinh do thu hoi
Tao mau gia : Tron d e u l O m g warfarin vao 100 g bot tai tinh kliiet (bot tai dimg de lam ta dUdc). Can lOg mau phan sau khi da tron warfarin. Tien hanh cac bUde nhU qui trinh phan tich warfarin da
trinh bay d p h a n tren. Lap lai 4 lan phan tich nhU tren, mdi lan lOg phan, so s a n h ket qua phan tich vdi h a m htdng warfarin ban dau, ta cd do thu hdi sau :
- Lan 1 : 93,4% - Lan 2 : 92,8% - L a n 3 : 91,7% - Lan 4 : 95,7 %
- Do thu hdi trung binh : 93,4%
DUa vao ket qua phan tich de tinh sai so' thdng ke vdi cae gia tri n = 4, do tin cay thdng ke = 0,95, sd bac tU do f = 3, ket qua xii ly thdng ke nhu sau :
DUa vaolOmg warfarin/lOOg bot tai; gia tri t r u n g binh 93,4%; do lech : 3,5; do lech t r u n g binh : 1,75; He sd bien tliien CV : 1,87%; khoang tin cay : 10,22; sai sdtUdng ddi : 2,93%.
2.3. Lap dung phUdng phap GC/ECD xac dinh HCTS trong mdi
trUdng.
2.3.1. Thiet bi, dungcu, boa cbatnhM trong phan SKLM 2.3.2. Phiidng phap phan tich
2.3.2.1. Phiidng phap chiet tach, tinh che mau, xac dinh mau
PhUdng i)hap chiet tach, tinh che m a n ciing cimg mot qui trinh nhu phUdng p h a p SKLM. Man sau khi tinh che dUdc cd can tren may chUng cat quay chan khdng. Hoa tan dich tinh che b a n g 2 ml hexan. Sau do bom 1 microlit dich da difOc hoa tan len may sac ki khi.
2.3.2.2. Dieu kien chay SHC ky - May SKK GC/ECD Packard 428
- Do dai cot
- Ditdng kinh trong ciia cot - Nhiet do detectd
- Nliiet do hudng bdm mau - Nhiet dd cot Khi m a n g va khi hd trd 25 m 0,25 mm 300°C 250°C 70"C, 10 phiit; 5°C/phut; 200°C 15 phiit Ar + 5% CH4; ap suat qua cot 1,2 kp/cm^
2.3.2.3. Pha hon hdp chuan
TrUdc khi pha mot hdn hdp chuan ta phai biet dUdc thdi gian luu (phiit), lUdng tdi thieu xac dinh dUde (ng) va khoang tuyen tinh ciia detectd eiia titng chat. Qua khao sat, chiing tdi thu dUdc : thdi gian lUu, khoang tuyen tinh eiia mot sd HCTS, (bang 11).
Bang 11 Thdi gian luu, khojing tuyen tinh cua mot so' HCTS
Loai hoa chat
y - H C H p, p-DDT
Wofatox
Thoi gian liiu (phut) 26,418 36,692 29,343
LiiOng toi thieu (ng) 0,004 0,060 0,100 Khoang tuyen tinh (ng) 0,10 - 0,60 0,12 -0,60 1 - 5
Trong trudng hdp may sac ky cd lap may tich phan hoac may tich phan - may tinh ta dUa vao khoang tuyen tinh cua detectd ddi vdi mdi chat de p h a hdn hdp chuan. TrUdng hdp may SKK chi ndi vdi may ghi thdng thudng thi ngoai viec dita vao khoang tuyen tinh cdn phai dua vao chieu cao eiia pie (khdng qua thap nhUng cung khdng dude vUdt ra khdi gidi ban bang giay) de tinh toan lUdng dung dich chuan gdc can lay cho mdi chat.
- Nong do chat trong hdn hdp chuan + Y-HCH : 0,595 X 10-6 g/ml