- Huyết thanh chứa kháng thể đặc hiệu kháng kháng nguyên HA sẽ ức chế hoạt động của HA, ngăn không cho các phân tử này ngưng kết hồng cầu. Phản ứng xảy ra ngược với phản ứng ngưng kết hồng cầu nên được gọi là phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu. Dựa vào phản ứng này để xác định hiệu giá kháng thể kháng HA.
- Huyết thanh đã xử lý chứa kháng thể kháng HA được pha loãng trong PBS theo bậc 2 bắt đầu từ độ pha loãng 1/10 đến 1/1280 trên phiến nhựa 96 giếng đáy chữ U. Sau đó bổ sung kháng nguyên 8 HAU. Sau khoảng thời gian 30 phút, bổ sung dung dịch hồng cầu gà 0.5%. Phản ứng dương tính nếu kháng thể ức chế hoạt động của HA làm cho hồng cầu không bị ngưng kết và lắng xuống đáy giếng tạo chấm màu đỏ. Phản ứng âm tính khi kháng nguyên không bị ức chế và gây ngưng kết hồng cầu.
Chú ý: kháng nguyên chuẩn 8 HAU phải chuẩn độ lại trước khi làm phản ứng HI (phương pháp xác định HA xem phụ lục).
- Cách đọc kết quả:
Dương tính (+): Kháng nguyên bị ức chế (không gây ngưng kết hồng cầu).
Âm tính (-): Kháng nguyên không bị ức chế (gây ngưng kết hồng cầu). - Hiệu giá kháng thể kháng HA (đơn vị HIU) là giá trị nghịch đảo độ pha loãng cao nhất của huyết thanh vẫn còn gây ức chế ngưng kết hồng cầu hoàn toàn.
Vd: Huyết thanh dùng trong phản ứng được pha loãng từ 1/10-1/1280, độ pha loãng cao nhất cho phản ứng dương tính (+) là 1/640 thì hiệu giá kháng thể kháng HA là 640 (HIU).
a. Tiến hành
Các mẫu huyết thanh đã được xử lý (độ pha loãng 1/10) sẽ được phân bố vào các giếng đáy chữ U theo hình 2.2.
1 2 3 4 5 6 Nhóm 1 Nhóm 2 Nhóm 3 A 1/10 B 1/20 C 1/40 D 1/80 E 1/160 G 1/320 H 1/640 Chứng hồng cầu Chứng huyết thanh Chứng kháng nguyên
Hình 2.2 Kết quả phản ứng xác định hiệu giá kháng thể
Mẫu huyết thanh chứa kháng nguyên cần xác định hiệu giá, mỗi mẫu tương ứng 2 cột:
- Cho 50 µl huyết thanh đã xử lý (độ pha loãng 1/10) tương ứng với các mẫu vào giếng ở hàng A.
- Cho 25 µl dung dịch PBS 0.01 M vào tất cả các giếng còn lại.
- Pha loãng huyết thanh bậc 2 từ giếng ở hàng A (độ pha loãng 1/10) đến độ pha loãng 1/1280 bằng pipet. Bỏ 25 µl dung dịch pha loãng ở các giếng cuối.
- 3 giếng làm chứng hồng cầu: 25 µl PBS.
- 3 giếng làm chứng kháng nguyên: 25 µl huyết thanh. - 3 giếng làm chứng huyết thanh: 25 µl kháng nguyên.
- Nhỏ 25 µl dung dịch kháng nguyên 8 HAU vào tất cả các giếng (trừ chứng huyết thanh và chứng hồng cầu).
- Bổ sung 50 µl dung dịch hồng cầu gà 0.5% lắc đều để ở nhiệt độ phòng trong vòng 30 phút, đến khi chứng hồng cầu lắng tốt đọc kết quả.