đỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.3 Bố trắ thắ nghiệm
2.4.3.1 Nghiên cứu một số ựặc ựiểm dịch tễ của bệnh bê nghé mắc giun ựũa
* Thắ nghiệm 1: Tình trạng nhiễm giun ựũa bê nghé ở ựịa ựiểm nghiên cứu. Tại mỗi huyện chọn 3 xã có số lượng phát triển trâu bò lớn. Qua xét nghiệm phân theo dõi tỷ lệ nhiễm chung, tỷ lệ nhiễm giun ựũa tại các huyện.
a + b 2
* Thắ nghiệm 2: Tỷ lệ nhiễm theo mùa vụ
Số bê, nghé trong mỗi huyện ựược chọn xét nghiệm, phân 2 vụ ựông xuân và hè thu.
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ nhiễm của bê theo mùa vụ, tỷ lệ nhiễm của nghé theo mùa vụ.
* Thắ nghiệm 3: Tỷ lệ nhiễm bê, nghé theo tuổi
Phân chia bê, nghé thành 3 ựộ tuổi, từ sơ sinh ựến 30 ngày tuổi, 31 ựến 60 ngày tuổi, 61 ựến 90 ngày tuổi xét nghiệm phân bê nghé ựể tìm trứng giun
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ nhiễm theo tuổi ở bê. Tỷ lệ nhiễm theo tuổi ở nghé. * Thắ nghiệm 4: Tỷ lệ nhiễm theo ựịa hình:
Chọn một huyện ựồng bằng là đông Sơn và một huyện trung du miền núi là Triệu Sơn ựể nghiên cứu. Xét nghiệm phân bê, nghé ựể ựánh giá tỷ lệ nhiễm.
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ nhiễm ở vùng ựồng bằng, tỷ lệ nhiễm ở vùng miền núi, so sánh giữa 2 vùng ựịa lý.
2.4.3.2. Biểu hiện triệu chứng lâm sàng của bê, nghé mắc bệnh giun ựũa
Thống kê và lựa chọn bê, nghé trong 2 huyện có xuất hiện triệu chứng lâm sàng. Theo dõi ghi chép thông tin mô tả và chụp ảnh.
Chỉ tiêu theo dõi: Trạng thái tiêu chảy, bình thường, thể trạng, vận ựộng, trạng thái phân và mùi phân.
2.4.3.3. Thử nghiệm thuốc ựiều trị
- Chọn những bê, nghé có cường ựộ nhiễm trứng giun ựũa cao qua kiểm tra phân và có ựấu hiệu lâm sàng của bệnh giun ựũa như: giảm ăn, phân lỏng.
Lô thắ nghiệm: lô bê và lô nghé, thử nghiệm với loại thuốc bivermectin 1%. - Trước khi tẩy xét nghiệm phân bằng phương pháp Mc Master ựể tắnh lượng trứng/g phân và theo dõi một số chỉ tiêu của bê, nghé trước khi tẩy như: tần số hô hấp, tần số tim, thân nhiệt và trạng thái phân. Sau 6 giờ cho bê, nghé uống thuốc ựo lại các chỉ tiêu sinh lý trên ựể xác ựịnh phản ứng phụ của thuốc. Sau 24 ựến 36 giờ dùng thuốc tẩy kiểm tra phân và ựếm số giun ra. Sau 10 ngày
tẩy và 20 ngày tẩy kiểm tra bê, nghé và ựánh giá cường ựộ nhiễm trứng và ựánh giá hiệu lực của thuốc.
Chỉ tiêu theo dõi: Hiệu lực tẩy trừ giun của thuốc. Phản ứng phụ của thuốc.
2.4.3.4. Thắ nghiệm ủ phân yếm khắ diệt trứng giun ựũa bê, nghé.
Xây dựng ựống ủ theo công thức: - Phân bê, nghé : 4 phần - Phân ngựa: 1 phần - Vôi bột: 50kg - Lá xanh: 200kg.
Cách ủ: Rải 1 lớp lá xanh tiếp ựến 1lớp phân, rồi ựến 1 lớp vôi bột trộn ựều xếp thành ựống hình khối có thể tắch 1m3 bên ngoài trát bùn kắn.
- đưa trứng giun ựũa vào 2 vị trắ của ựống ủ ( vị trắ thứ nhất ở trọng tâm ựống ủ, vị trắ thứ hai cách bề mặt ựống ủ 30cm)
- Trứng giun ựũa ựược theo dõi ở 3 mức thời gian 10 ngày, 20 ngày và 30 ngày tưng ứng với mỗi vị trắ có 3 túi trứng, túi ựựng trứng ựược dùng bằng túi vải pha nhiều nilon các túi trứng ựực buộc vào một ựầu thanh tre rồi ựưa ựặt vào vị trắ ựã ựịnh.
- Hàng ngày ựo nhiệt ựộ ựống phân ủ vào 9 giờ sáng và 3 giờ chiều. Trộn lẫn khoảng 1g phân với túi tương ứng 100 trứng
- Phương pháp thu thập trứng giun:
+ Thu thập giun trưởng thành từ bê, nghé chết. + Mổ tử cung giun ựể thu thập trứng giun.
+ Phương pháp mổ tử cung giun: Rửa sạch trong nước sinh lý. Xác ựịnh giun cái, xác ựịnh lỗ sinh dục cái năm ở 1/8 trên mặt bụng về phắa trước cơ thể. Dùng kéo cắt sát phắa trên lỗ sinh dục và cắt về phắa sau lỗ sinh dục giun khoảng 1cm thu thập phần thân giun vừa cắt, ựưa vào ựĩa lồng chứa sẵn nước sinh lý, dùng ựũa thủy tinh dầm nhẹ lên thân giun liên tục, thỉnh thoảng lại soi kắnh hiển vi khi nào thấy số lượng trứng giun ra nhiều thì bỏ lớp tổ chức của giun ra, ựưa qua lưới lọc vào cốc thủy tinh, làm sạch trứng bằng phương pháp
dội rửa nhiều lần, mang quay li tâm sau ựó ựưa trứng ra ựĩa lồng ựể soi ựếm số lượng trứng.
+ đếm trứng: Dùng Contor hút, hút nước có trứng, rồi nhỏ lên 1 lam kắnh sạch, ựếm số trứng/giọt, ghi chép, dùng Contor hút khác hút nước sạch rửa trứng vào ựĩa lồng, ựếm ựến khi ựược số trứng cần thiết.
- Sau 10 ngày, 20 ngày và 30 ngày lấy túi trứng ra làm sạch và nuôi lại trứng trong nước cất.
Chỉ tiêu theo dõi: Trứng giun chưa bị diệt. Trứng giun bị diệt thông qua sự phát triển hay không phát triển của tế bào phôi tới ấu trùng.