đỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.2 Kỹ thuật và phương pháp nghiên cứu
* Xét nghiệm phân tìm trứng giun ựũa bê, nghé theo phương pháp Fulleborn.
- Lấy mẫu phân: Lấy từ trực tràng của bê, nghé hoặc từ phân bê nghé mới thải ra ựược xác ựịnh chắc chắn, lượng phân lấy xét nghiệm là 10g/ bê, nghé ựược dựng trong hộp nhựa có ghi nhãn với các thông số như: loại gia súc,
(1,96)2
P ( 1 -P )
d2
0,25(1- 0,25) (0,05)2
tuổi, tình trạng sức khỏe, tắnh biệt, phân lấy về ựược xác ựịnh ngay. - Xét nghiệm phân bằng phương pháp Fulleborn:
để pha dung dịch muối bảo hòa, lấy 1 lắt nước sôi, cho vào 380g NaCl, hoặc ựun sôi từ vào muối, khuấy ựều ựến khi muối không tan ựược nữa( khi nguội trên mặt có lớp kết tinh), lọc qua vải màn hoặc bông, bỏ cặn.
+ Cách làm: lấy 5- 10 g phân cho vào một cốc thủy tinh nhỏ, dùng ựũa thủy tinh quấy nát phân trong 40 -50 ml nước muối NaCl bảo hòa. Sau ựó lọc qua lưới lọc ựể loại trừ cặn bã. Dung dịch lọc ựược ựể yên tĩnh trong lọ tiêu bản (miệng hẹp, ựáy rộng). Sau khoảng 15-30 phút trứng sẽ nổi lên. Dùng vòng vớt thép ựường kắnh 5 mm. Vớt lớp váng ở phắa trên, ựể lên phiến kắnh, ựậy lá kắnh, kiểm tra dưới kắnh hiển vi tìm trứng giun sán. Cũng có thể cho nước phân ựã lọc vào một ống nghiệm ựến khi dung dịch phân trong nước muôi bảo hòa lên tới miệng ống nghiệm, ựể yên khoảng 15 phút, sau ựó dùng vòng vớt, ựể vớt lớp váng phắa trên, cho lên phiến kắnh soi, hoặc có thể ựậy phiến kắnh lên miệng ống nghiệm. Cho tiếp xúc với mặt dung dịch, rồi lấy phiến kắnh ra, kiểm tra dưới kắnh hiển vi.
- định loại trứng giun ựũa theo khóa ựịnh loại của Mogum( dẫn theo Trịnh Văn Thịnh, 1963). Trứng gần giống hình cầu: 0,080 Ờ 0,095mm, vỏ dày lỗn nhỗn vàng nhạt chỉ có một tế bào là Neoascaris vitulorum.
- đo nhiệt ựộ ựống phân ủ bằng nhiệt kế bách phân.
- đánh giá ảnh hưởng của ựống phân ủ tới trứng giun ựũa giữ trong ựống ủ qua quan sát kắnh hiển vi về màu sắc, hình thái, biến ựổi của tế bào phôi.
- đánh giá khả năng sống, chết của trứng qua nuôi lại trứng trong nước sinh lý.
- Xác ựịnh triệu chứng lâm sàng của bê, nghé mắc bệnh qua quan sát trực tiếp bê, nghé bệnh, thu thập thông tin mô tả.
- đo thân nhiệt của bê, nghé bằng nhiệt kế bách phân.
* đánh giá cường ựộ nhiễm trứng giun ựũa trong 1g phân bằng phương pháp Mc Master.
Cường ựộ nhiễm giun ựũa Neoascaris vitulorum ựược ựánh giá bằng số lượng trứng /gam phân theo quy ước
< 500 trứng /gam phân : nhiễm nhẹ (+)
500 - 800 trứng /gam phân : nhiễm trung bình (++) 800 - 1200 trứng /gam phân: nhiễm nặng (+++) > 1200 trứng /gam phân: nhiễm rất nặng (++++)
Dùng panh lấy 2g phân khô (≈ 2 cm3) cho vào 58 ml dunh dịch NaCl bão hòa (hoặc dung dịch ựường bảo hòa), cho vào bình 20 viên bi thủy tinh, lắc ựều dừng ựột ngột, dùng pipet bơm vào buồng ựếm Mc Master (gồm 2 buồng ựếm, mỗi buồng có dung tắch 0,15 ml, cách nhau 1,5mm. Có 2 buồng ựếm gồm 6 ô, kắch thước mỗi buồng 1cm x 1cm ở mặt trên). Sau khoảng 2 phút, trứng ựược ựẩy lên buồng ựếm. đếm tất cả trứng giun sán trong 2 buồng ựếm.
Gọi số trứng trong 1g phân là A Số trứng ở buồng 1 là a
Số trứng ở buồng 2 là b
A = x 200
- Xác ựịnh triệu chứng lâm sàng của bê, nghé mắc bệnh giun ựũa. Qua quan sát theo dõi bê, nghé mắc bệnh, ghi chép thông tin, mô tả và phân tắch.
- Thử nghiệm thuốc bằng phương pháp thực nghiệm.
- Nghiên cứu công thức ủ phân yếm khắ diệt trứng giun ựũa theo phương pháp thực nghiệm.