- Acid acetic lạnh, nguyờn chất
4.2. Cỏc yếu tố liờn quan
Cú nhiều cỏc yếu tố ảnh hưởng tới chất lượng tiờu bản, ở đõy chỳng tụi đề cập tới 3 yếu tố chớnh liờn quan và ảnh hưởng tới chất lượng tiờu bản mà trong quỏ trỡnh nghiờn cứu thực tế chỳng tụi thu nhận được.
* Ảnh hưởng bởi dung dịch cố định:
Qua quỏ trỡnh nghiờn cứu chỳng tụi nhận thấy rằng những mẫu bệnh phẩm được cố định bằng dung dịch Bouin đều cú màu sắc rừ nột, tương phản hơn so với cỏc mẫu bệnh phẩm khụng được cố định bằng dung dịch Bouin. Chỳng tụi tiến hành nghiờn cứu trờn tổng số 80 tiờu bản trong đú: 40 tiờu bản được cố định lại một lần nữa trong dung dịch Bouin ở nhiệt độ 50o C trong vũng 1 giờ và 40 tiờu bản khụng được cố định lại bằng Bouin. Kết quả thu được là trong số 40 tiờu bản cố định qua Bouin cú tới 90,0% số tiờu bản đẹp và đạt yờu cầu; số lượng tiờu bản chưa đạt yờu cầu chỉ chiếm 10,0%. Trong khi đú tiờu bản chỳng tụi khụng cố định lại bằng Bouin chỉ cú 82,5% số tiờu bản đẹp và đạt yờu cầu; số tiờu bản chưa đạt yờu cầu chiếm tới 17,5%, phần lớn là cỏc tiờu bản gặp cỏc lỗi như xỉn màu, gấp, xước, rỏch mất mụ. Qua kết quả trờn chỳng tụi nhận thấy, cú sự khỏc nhau về chất lượng tiờu bản thu được của 2 phương phỏp mà chỳng tụi tiến hành nghiờn cứu. Thụng thường, cỏc Labo giải phẫu bệnh sử dụng formol 10% để cố định bệnh phẩm mà ớt nơi nào cố định trong Bouin vỡ sự phức tạp của nú. Tuy nhiờn, việc cố định bằng formol 10% lại khụng cho kết quả tốt với phương phỏp nhuộm ba màu bởi tớnh chất làm tăng sự kiềm tớnh của cấu trỳc mụ của nú, làm cho màu của tế bào và mụ sau khi nhuộm thường khụng được sỏng và tương phản rừ nột. Bởi vậy, chỳng tụi tiến hành cố định lại bằng dung dịch Bouin sau khi đó tẩy sạch paraffin trong thời gian 1h ở nhiệt độ 500 C. Chỳng tụi nhận thấy những tiờu bản được cố định lại một lần nữa qua dung dịch Bouin màu sắc của bào tương bắt màu đỏ sỏng hơn, nhõn xanh hơn, hồng cầu sỏng, độ tương phản cỏc thành phần rừ ràng hơn. Nhược điểm của phương phỏp cố định lại một lần nữa bằng
dung dịch Bouin là thời gian cố định lại khỏ lõu và việc thực hiện khú khăn vỡ sự bốc hơi của Bouin khi ở nhiệt độ cao. Sau khi cố định xong cần để tiờu bản trong bể nước chảy cho tới khi màu vàng biến mất nếu khụng tiờu bản sau nhuộm sẽ khụng bắt màu hoặc nhợt nhạt. Cú lẽ acid picric trong dung dịch Bouin đó cản trở thuốc nhuộm thẩm thấu vào mụ.
* Nhuộm collagen bằng Blue aniline hoặc Light green:
Trong quỏ trỡnh nghiờn cứu chỳng tụi tiến hành nhuộm sợi collagen bằng hai thuốc nhuộm là Blue aniline và Light green. Mỗi phương phỏp chỳng tụi thực hiện cỏc bước quy trỡnh giống nhau, chỉ khỏc nhau ở chỗ là sử dụng hai dung dịch nhuộm sợi collagen khỏc nhau. Kết quả nghiờn cứu cho thấy tỷ lệ tiờu bản nhuộm sợi collagen bằng Blue aniline đẹp và đạt yờu cầu chiếm 90,0%; tỷ lệ tiờu bản chưa đạt yờu cầu chiếm 10,0%. Trong khi đú, những tiờu bản nhuộm sợi collagen bằng Light green đẹp và đạt yờu cầu cú tỷ lệ thấp hơn chiếm 85,0%; số lượng tiờu bản chưa đạt yờu cầu lờn tới 15,0%. Quan sỏt trờn kớnh hiển vi chỳng tụi nhận thấy, thuốc nhuộm Blue aniline bắt màu với tổ chức collagen của mụ mạnh hơn với màu xanh da trời sỏng, rừ ràng. Trong khi màu xanh của thuốc nhuộm Light green nhạt hơn với màu xanh lỏ cõy, đụi khi cựng một tiờu bản, cựng kỹ thuật giống nhau nhưng màu của Light green dường như nhợt nhạt hơn. Vỡ vậy, ở những tiờu bản nhuộm collagen bằng Light green độ tương phản kộm hơn so với nhuộm collagen bằng blue aniline. Nghiờn cứu của Nguyễn Phương Thảo (2010) khi tiến hành nhuộm ba màu bằng Blue aniline và Light green trờn mảnh cắt u xơ tuyến vỳ cho thấy tỷ lệ chưa đạt yờu cầu là 6,0% khi nhuộm với Blue aniline, 32,0% khi nhuộm bằng Light green [6]. So sỏnh với kết quả nghiờn cứu trờn thỡ tỷ lệ chưa đạt yờu cầu khi nhuộm bằng Blue aniline của chỳng tụi cao hơn là 10,0% và thấp hơn khi nhuộm bằng Light green là 15,0%. Cú lẽ chỳng tụi cho rằng tiờu chuẩn đỏnh giỏ mà chỳng tụi đưa ra khỏc so với tiờu chuẩn đỏnh giỏ
của nghiờn cứu trờn hoặc do tớnh chất mụ của hai nghiờn cứu khỏc nhau. Vỡ thế, đõy là lý do mà kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi và Nguyễn Phương Thảo khụng tương đồng.
* Sử dụng acid acetic:
Quỏ trỡnh nghiờn cứu chỳng tụi thấy rằng, khụng cú nhiều sự khỏc biệt giữa tiờu bản được biệt húa trong acid acetic 1% và tiờu bản khụng được biệt húa trong acid acetic 1%. Cụ thể, kết quả của chỳng tụi là 90,0% số tiờu bản đẹp và đạt yờu cầu khi biệt húa qua acid acetic 1% và 87,5% số lượng tiờu bản đẹp và đạt yờu cầu đối với những tiờu bản khụng biệt húa qua acid acetic 1%. Mục đớch của việc sử dụng acid acetic 1% để biệt húa là để loại bỏ lượng phẩm thừa, trung hũa pH làm trong, sỏng tiờu bản. Tuy nhiờn, quỏ trỡnh nghiờn cứu tại Bộ mụn Giải phẫu bệnh, nguồn nước sử dụng là nước mỏy sạch, độ pH gần như trung tớnh, sau mỗi bước nhuộm đều cú bước rửa kỹ dưới vũi nước chảy, kết hợp với cỏc bước tẩy cồn thỡ tiờu bản gần như đó trung hũa được acid và loại bỏ được phẩm nhuộm thừa.
KẾT LUẬN
Từ kết quả quỏ trỡnh nghiờn cứu, chỳng tụi rỳt ra một số kết luận sau đõy:
Tỷ lệ tiờu bản đẹp tăng rừ rệt từ thỏng thứ nhất tới thỏng thứ tư (từ 23,8% lờn 55,0%). Tỷ lệ tiờu bản chưa đạt giảm, thỏng thứ nhất là 28,6%, thỏng thứ tư cũn 2,6%.
2. Cỏc yếu tố liờn quan ảnh hưởng tới kết quả thực hành kỹ thuật
- Dung dịch cố định Bouin: Những tiờu bản được cố định bằng Bouin cú tổng tỷ lệ đẹp và đạt yờu cầu (90,0%) cao hơn so với tiờu bản khụng được cố định qua Bouin (82,5%).
- Dung dịch Blue aniline nhuộm sợi collagen: Những tiờu bản được nhuộm bằng Blue aniline cú tỷ lệ đẹp và đạt yờu cầu (90,0%) cao hơn so với cỏc tiờu bản nhuộm bằng Light green (85,0%).
- Dung dịch biệt húa tiờu bản: Tỷ lệ tiờu bản được biệt húa bằng acid Acetic 1% đẹp và đạt (90,0%), ớt khỏc biệt so với tiờu bản khụng được biệt húa bằng acid Acetic 1% (87,5%).
KIẾN NGHỊ
Từ kết quả nghiờn cứu, chỳng tụi xin được đưa ra một vài kiến nghị với hy vọng sẽ nõng cao được phần nào chất lượng của một tiờu bản nhuộm
Masson trong Labo Giải phẫu bệnh phục vụ cho cụng tỏc chẩn đoỏn mức độ xơ gan:
1. Đối với phương phỏp nhuộm Masson để cú được một tiờu bản đẹp thỡ yếu tố kỹ thuật của người kỹ thuật viờn là yếu tố rất quan trọng. Cỏc yếu tố kỹ thuật bao gồm cỏc bước liờn hoàn: chuyển, đỳc, cắt, nhuộm.