Máu ngối vi toàn phaăn sau khi lây từ tĩnh mách người cho, đã chông đođng trong heparine được phađn phôi vào các lĩ thụy tinh vođ trùng (lĩ có dung tích 1ml).
Taơp hợp các lĩ lây từ moơt mău máu được đem chiêu xá ở các lieău khác nhau và sô lĩ mău tùy theo sô đieơm dự định khạo sát.
Mău chiêu rieđng từng lĩ tređn nguoăn Co60 tái Vieơn Nghieđn cứu hát nhađn, moêi lĩ đeău được gaĩn thỏi TLD đeơ kieơm soát lieău chính xác.
Nguyeđn taĩc xử lý cadmi.
Cadmi được pha loãng trong dung dịch HNO3 0.1M đên noăng đoơ 100g/ml trước khi dùng xử lý mău. Các mău được xử lý trong tình tráng nuođi cây tê bào khođng có PHA, lieău lượng cadmi phú thuoơc vào bô trí thí nghieơm. Thời đieơm xử lý cadmi được tiên hành trước hoaịc sau chiêu xá.
Thiêt kê các toơ hợp thí nghieơm và phương thức xử lý mău. * Xử lý đơn với cadmi.
Xử lý đơn cadmi được thực hieơn trong mođi trường F10 khođng có PHA và serum theo thiêt kê bạng 2.1.
Bạng 2.1: Thiêt kê các toơ hợp thí nghieơm đánh giá ạnh hưởng cụa cadmi leđn tê
STT Noăng đoơ xử lý Cd (g/ml) Theơ tích xử lý (ml) 1 0 5 2 0.05 5 3 0.10 5 4 0.20 5 5 0.5 5 6 1.0 5 7 2.0 5
Sau thời gian xử lý, mău máu được chuyeơn sang các ông chứa mođi trường nuođi cây với đụ thành phaăn có sô ký hieơu tương ứng.
Tiên hành quá trình nuođi cây tê bào.
Xử lý mău có sự phôi hợp giữa cadmi và bức xá gamma.
Toàn boơ thiêt kê thí nghieơm đưa đên sự phôi hợp giữa noăng đoơ cadmi và các lieău bức xá gamma, đoăng thời theơ hieơn được vai trò ngaín cạn phúc hoăi toơn thương phóng xá.
Tređn cơ sở như vaơy, vieơc thiêt kê đoăng thời đạm bạo hai heơ thông xử lý cadmi trước và sau chiêu xá. Thí nghieơm được thực hieơn theo thiêt kê bạng 2.2.
Bạng 2.2: Các toơ hợp thí nghieơm đánh giá ạnh hưởng phôi hợp cụa cadmi và bức xá gamma leđn tê bào lympho người.
Phương thức xử lý Noăng đoơ cadmi
(g/ml)
Cd100g/ml (g/5ml mău)
Lieău bức xá gamma (Gy) 0 0.75 1.0 1.5
Xử lý Cd(NO3)2
trong mođi trường thiêu PHA / 37oC trước chiêu xá 3h 0 0 1 4 7 10 0.05 2.50 2 5 8 11 0.10 5.00 3 6 9 12 Xử lý Cd(NO3)2 trong mođi trường thiêu PHA / 37oC sau chiêu xá 3h 0 0 - - - - 0.05 2.50 - 17 20 23 0.10 5.00 - 18 21 24
Theo đó, chuaơn bị 18 lĩ vođ trùng. Chuaơn bị huyeăn dịch máu toàn phaăn trong mođi trường nuođi cây thiêu PHA và serum tỷ leơ 1/3 (6ml máu vođ trùng trong 18 ml mođi trường). Chia ra các lĩ nuođi cây và xử lý cadmi cho các nhóm lĩ A, B, C. + A : 5ml + Cd 0 g/ml + B : 5ml + Cd 0.05 g/ml (2.5 l cụa dung dịch Cd 100 g/ml) + C : 5ml + Cd 0.10 g/ml ( 5 l cụa dung dịch Cd 100 g/ml) + 17, 18, 20, 21, 23 và 24 moêi lĩ 1ml. Ụ tât cạ các lĩ mău ở 37o C / 3h. Lây từ + A ra 4 lĩ : 1, 4, 7, 10 moêi lĩ 1ml.
+ B ra 4 lĩ : 2, 5, 8, 11 moêi lĩ 1ml. + C ra 4 lĩ : 3, 6, 9, 12 moêi lĩ 1ml. Tách nhóm : + Nhóm I : goăm các lĩ 1, 2, 3 + Nhóm II : 4, 5, 6, 17, 18. + Nhóm III : 7, 8, 9, 20, 21. + Nhóm IV : 10, 11, 12, 23, 24.
Sau đó, chuyeơn tât cạ các lĩ mău đã được phađn nhóm đên nguoăn Co60. Thực hieơn chiêu xá nhóm I lieău 0 Gy, nhóm II lieău 0.75 Gy, nhóm III lieău 1.0 Gy, nhóm IV lieău 1.5 Gy.
Giữ nhieơt đoơ 37oC theđm 3h.
Chuaơn bị 100ml mođi trường nuođi cây đaăy đụ thành phaăn PHA, serum, colchicine, đát nhieơt đoơ 37oC .
Chia ra 18 lĩ ( dung tích 10ml), moêi lĩ 4ml, đánh sô từ 1 – 12, 17, 18, 20, 21, 23 và 24. Boơ sung dung dịch cadmi theo nhóm các lĩ 1,4,7,10 moêi lĩ 0l; các lĩ 2, 5, 8, 11 moêi lĩ 2l; các lĩ 3, 6, 9, 12 moêi lĩ 4l; các lĩ 17, 20, 23 moêi lĩ 2.5l; các lĩ 18, 21, 24 moêi lĩ 5l.