ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.4.Cỏc kỹ thuật húa sinh sử dụng trong nghiờn cứu
2.2.4.1. Kỹ thuật định lượng xột nghiệm húa sinh trong ĐTĐTK
- Định lượng glucose huyết tương: theo phương phỏp đo UV với enzyme Hexokinase ở bước song 340nm.
- Định lượng HbA1c: theo phương phỏp miễn dịch đo độ đục. Xỏc định %HbA1c/total Hb.
- Định lượng Insulin: theo phương phỏp miễn dịch húa phỏt quang.
- Định lượng cholesterol toàn phần trong huyết tương: theo phương phỏp enzyme so màu.
- Định lượng triglycerid trong huyết tương: theo phương phỏp enzyme so màu. - Định lượng HDL_Cholesterol trong huyết tương: theo phương phỏp enzyme so màu.
- Định lượng LDL _ Cholesterol trong huyết tương: theo phương phỏp enzyme so màu.
- Tổng phõn tớch nước tiểu: theo phương phỏp dựng thanh giấy thử 10 thụng số.
2.2.4.2. Kỹ thuật định lượng Adiponectin huyết thanh
- Phương phỏp định lượng: miễn dịch gắn enzyme (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay – ELISA).
- Nguyờn tắc: huyết thanh, chuẩn và chứng được ủ trong giếng cú gắn sẵn khỏng thể đa dũng khỏng adiponectin người. Tiếp theo, cỏc thành phần khụng gắn đặc hiệu với khỏng thể sẽ được rửa loại bỏ. Sau đú, khỏng thể đa dũng khỏng adiponectin đỏnh dấu bằng enzyme Horseradish Peoxidase (HEP) được them vào giếng giỳp cố định phỳc hợp KN-KT. Lượng khỏng thể đỏnh dấu enzyme dư thừa được loại bỏ qua bước rửa. Cơ chất TMB được cho vào sẽ cú phản ứng với enzyme peroxidase. Dừng phản ứng bằng dung dịch acid.
Kết quả sẽ cho một dung dịch cú màu vàng và đo độ hấp thụ quang ở bước song 450nm. Nồng độ adiponectin trong huyết thanh tỷ lệ thuận với độ hấp thụ quang đo được.
Ủ và lắc 300rpm ở nhiệt độ phũng trong 1h
Ủ 10 phỳt ở nhiệt độ phũng, khụng lắc Ủ và lắc 300rpm ở nhiệt độ phũng trong 1h
Đo mật độ quang ở λ = 450nm, tớnh kết quả Thờm 100àl dung dịch dừng phản ứng Thờm vào mỗi giếng 100àl dung dịch cơ chất
Rửa 3 lần
Phủ 100àl Anti – Adiponectin Antibody – HRP Conjugate Solution
Tra 100àl mẫu, chuẩn và QC vào mỗi giếng
Rửa 3 lần
Pha loóng mẫu và OC 300 lần
Giếng gắn khỏng thể Adiponectin Chuẩn bị dung dịch
đệm pha loóng mẫu
Đối tượng nghiờn cứu
Phụ nữ cú thai từ 24-28 tuần được khỏm và hỏi bệnh
Làm NPDNĐH Nhúm chứng (NPDNĐH õm tớnh) Nhúm ĐTĐTK (NPDNĐH dương tớnh) ĐL Adiponectin và cỏc XN khỏc ĐL Adiponectin và cỏc XN khỏc - So sỏnh nồng độ Adiponectin - Mối liờn quan với một số YTNC
(lõm sàng và cận lõm sàng)
2.2.4.3. Đỏnh giỏ chỉ số khỏng Insulin (HOMA IR)
Áp dụng cụng thức tớnh chỉ số khỏng insulin theo phương phỏp HOMA (Homeostatic model assessement method insulin resistance – HOMA IR) do Matthews và cộng sự đề xuất lần đầu năm 1995. Cụng thức tớnh như sau:
HOMA – IR = I0(àU/mL) x G0 (mmol/L)