ĐỊNH TÍNH FLAVONOID 7 Phương pháp HPLC

- flavanon catechin

8. ĐỊNH TÍNH FLAVONOID 7 Phương pháp HPLC

8.7. Phương pháp HPLC

Tin cậy và thông dụng nhất hiện nay.

Nguyên tắc : Trong cung 1 điều kiện, mẫu M chứa X

chuẩn X

Hàm lượng chất X sẽ tỷ lệ thuận với diện tích peak. Với nồng độ chuẩn biết trước, từ diện tích peak

đo được ở X chuẩn và X/mẫu → X% trong mẫu.

92

8.8. Khảo sát flavonoid bằng các ph.pháp vật lý khác

- Cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) - Khối phổ (MS)

- HPLC ghép khối phổ (LC-MS) - Điện di mao quản (CE) . . .

Khảo sát cấu trúc

93

Dung bộ 6 thuốc thư :

(1) : MeOH PA (2) : HCl đđặc / MeOH

(3) : AlCl3 5% / MeOH (4) : H3BO3 / MeOH

(5) : MeONa 5% / MeOH (6) : AcONa bột.

Khảo sát cấu trúc Flavonoid :

Đo sự dịch chuyển phổ UV của [Flavonoid + thuốc thư] so với phổ UV của [Flavonoid]

94- Ghi nhận λmax của Flavonoid / thuốc thư (λn) - Ghi nhận λmax của Flavonoid / thuốc thư (λn)

- Lập các giá trị Δλn = (λ2 - λ1), (λ3 - λ1), (λ4 - λ1), (λ5 - λ1), (λ6 - λ1)

- So sánh với các giá trị Δλn trong Markham, 1981**

→ số lượng và vị trí các nhóm –OH trong khung.

** K.R. Markham, Technique of Flavonoid identification, Academic Press, 1981, (Thư viện Bộ môn Dược liệu).

95th.thư / MeOH λmax (λn – λ1) nm –OH ở th.thư / MeOH λmax (λn – λ1) nm –OH ở

MeOH λ1 – – NaOMe λ2 40 – 65 3 và/hay 4’ AcONa bột λ3 08 – 20 7 40 – 65 4’ AcONa + H3BO3 λ4 15 – 30 vic/B 05 – 10 vic/A AlCl3 λ5 30 – 70 3, 5 50 – 60 vic/A, B AlCl3 + HCl đđ λ6 λ6 − λ5 = – (30 - 40) vic/B λ6 − λ5 = – 20 tri–OH/B λ6 − λ5 = 0 3, 5 λ6 − λ1 = 50 – 60 3, 5

96Nguyên tắc chung Nguyên tắc chung

- chiết kiệt flavonoid, loại tối đa tạp chất

- chọn ph.pháp định lượng thích hợp tuy theo • đối tượng chiết xuất (genin hay glycosid), • yêu cầu (F toàn phần hay 1 chất cụ thể)...

Vài phương pháp định lượng flavonoid

9.1. Phương pháp cân

Sai số cao, áp dụng với dược liệu nhiều flavonoid, ví dụ rutin # 30% trong nụ Hòe