C. TÓM TẮT PHÂN LOẠ
6. HÓA TÍNH FLAVONOID
636.4.1 Kiềm phân eu-flavonoid
6.4.1 Kiềm phân eu-flavonoid
Flavonoid + kiềm đặc và nóng (NaOH 2M, KOH...)
→ các mảnh nhỏ và đơn giản.
So sánh các mảnh nhỏ này với các chuẩn có sẵn, → xác định cấu trúc của flavonoid. Quan trọng trong biện giải cấu trúc của flavonoid.
O OH OH OH OH OH HO OH phloroglucinol
64O O R O H HO 2 3 4 5 3 4 5 OH R O H HO
- Trong môi trường kiềm, các iso-F có H-5 sẽ bị mất 1 carbon C-2, tạo deoxybenzoin thế và formiat.
- Tách deoxybenzoin bằng Et2O / HCl; so sánh (SKLM...) với các chuẩn (có nhóm R khác nhau),
→ cấu trúc ban đầu của iso-F.
+ HCOO
isoflavonoid deoxybenzoin + formiat NaOH 5%
40OC × 2h
–
65
6.4.3. Thủy phân Flavonoid
Sự thủy phân dễ hay khó tuy theo
- loại glycosid (C-glycosid / O-glycosid), - loại đường (-ose / -uronic),
- kiểu mạch đường (biose nối 1-2 / 1-6), - vị trí gắn đường (vị trí số 3 / 7 / 4'...).
- khung genin (flavon glycosid > flavonol glycosid)
Nói chung, C-glycosid bền hơn O-glycosid.
O-glycosid : - glycuronid bền hơn glycosid -7-O > 4'-O > 3-O-glycosid.
66
a. Thủy phân bằng acid
Với HCl 2N / MeOH (1:1), cách thủy 1 giờ thì :
C-glycosid O-glycuronid O-glycosid không thủy phân thphân 1 phần thphân h.toàn
Nếu nhóm -OH của ose bị acyl-hóa hoặc bisulfat-hóa thì glycosid của chúng cũng có thể không bị thủy phân.
Kiểm tra và theo dõi phản ứng thủy phân bằng SKLM.
67
b. Thủy phân bằng kiềm loãng (KOH 0.5% / N2) - Ít sư dụng đối với các flavonoid glycosid. - dung để phân biệt 3-O- với 7-O- và 4'-O- glycosid.
(3-O- bền hơn 7-O- và 4'-O-glycosid)
O O O O O O OH ose ose ose 3 7 4'
- các biosid nối (1 → 2) bền hơn (1 → 6)
[neohesperidose bền hơn rutinose]
68
để cắt dung enzym
glucose glucosidase
galactose galactosidase
αL-rhamnose Taka-diastase* neohesperidose naringinase
anthocyanin anthocyanase
acid glucuronic glucuronidase
c. Thủy phân bằng enzym
Mỗi loại enzym sẽ thủy phân 1 vài glycosid nhất định. Các loại enzym này có bán sẵn trên thị trường.
69
7.1. Dung ROH + nước
- Thường : MeOH, EtOH (70-90%) nóng hoặc nguội. (thu được các glycosid + genin ph.cực + tạp ph.cực) - Loại tạp kém phân cực bằng các d.môi kém ph.cực - Kết tinh / tủa trong các dung môi thích hợp
- Thu được genin + tạp kém ph.cực (ch’ béo, chlorophyll). → loại tạp tiếp bằng các phương pháp thích hợp.
- Thường áp dụng với các polymethoxy flavonoid
70
7.3. Dung dãy dung môi
- Ngấm kiệt với (ROH + H2O),
- cô, loại tạp kém phân cực bằng cách lắc với EP.
lớp nước chứa flavonoid + tạp phân cực (đường ...)
- Lắc lớp nước này với Et2O rồi với EtOAc, lớp Et2O chủ yếu chứa genin,
lớp EA chủ yếu chứa glycosid + ít genin còn sót lớp nước chủ yếu chứa ose,
- tiếp tục phân lập bằng các kỹ thuật khác (SKC…) - áp dụng với các glycosid phân cực