- ðộ c tố Verotoxin Vt2e và yếu tố bám dính F
3.3.1.Khả năng dung huyết
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.3.1.Khả năng dung huyết
Khả năng dung huyết là một yếu tố gây bệnh quan trọng của vi khuẩn
E.coli. Khi tiến hành kiểm tra khả năng dung huyết của các chủng vi khuẩn E.coli
phân lập ñược trên thạch máu, chúng tôi thấy 100% số chủng phân lập ñược ñều có khả năng dung huyết dạng α hoặc β.
Khi nghiên cứu về yếu tố dung huyết của vi khuẩn E.coli tại các ñịa phương khác nhau, nhiều tác giả cho biết: Bệnh phù ñầu do vi khuẩn E.coli gây ra ở lợn sau cai sữa còn ñược gọi là bệnh E.coli dung huyết. Hầu hết các nghiên cứu trước ñây ñã công bố tỷ lệ các chủng E.coli dung huyết ở lợn con sau cai sữa cao hơn nhiều so với các chủng E.coli phân lập ở lợn con theo mẹ.
Hình 3.3. Khuẩn lạc của vi khuẩn E. coli trên thạch MacConkey (trái), thạch máu (phải)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 39 Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cao hơn nhiều so với các nghiên cứu của tác giả khác. Nguyễn Khả Ngự (2000) khi xác ñịnh tỷ lệ chủng vi khuẩn
E.coli gây dung huyết ở ñồng bằng sông Cửu Long cho thấy: 60,82% chủng vi khuẩn phân lập từ lợn bị bệnh phù ñầu gây dung huyết.
Nguyễn Ngọc Hải và cộng sự (2000), khi xác ñịnh yếu tố dung huyết của 91 chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược của lợn thành phố Hồ Chí Minh và thành Phố Biên Hoà cho thấy 24,5% các chủng gây bệnh phù ñầu có khả năng gây dung huyết. Như vậy yếu tố ñịa lý và tình hình chăn nuôi của từng khu vực ñã ảnh hưởng lớn tới tỷ lệ các chủng vi khuẩn E.coli có khả năng gây dung huyết.
3.3.2. ðộc tố Verotoxin Vt2e và yếu tố bám dính F18
Vi khuẩn E. coli bám dính, xâm nhập vào niêm mạc ruột và sản sinh ra các loại ñộc tố. Các ñộc tố này làm thay ñổi quá trình trao ñổi chất và chất ñiện giải ở ruột non, dịch ruột non tiết ra quá nhiều và không ñược hấp thu ở ruột già gây tiêu chảy. Sản sinh ñộc tố ñược xem là một khả năng quan trọng của vi khuẩn E. coli. Vi khuẩn E. coli sản sinh nhiều loại ñộc tố: nhóm ñộc tố ñường ruột (Enterotoxin), nhóm ñộc tố tế bào (Shiga/ Verotoxin), Neurotoxin.
ðộc tố và yếu tố bám dính là những yếu tố ñộc lực vô cùng quan trọng. Trong ñó ñộc tố Vt2e và kháng nguyên bám dính F18 là những yếu tố ñộc lực quan trọng của vi khuẩn E. coli gây ra bệnh phù ñầu trên lợn con.
ðể khẳng ñịnh vai trò gây bệnh của vi khuẩn, chúng tôi tiến hành xác ñịnh ñộc tố VT2e và kháng nguyên bám dính F18 bằng phương pháp PCR với cặp mồi ñặc hiệu ñể xác ñịnh sự hiện diện của gen quy ñịnh việc sản sinh ñộc tố VT2e và kháng nguyên F18 của vi khuẩn. ðây là phương pháp ưu việt nhất về ñộ nhạy và ñộ ñặc hiệu của nó.
Kết quả nghiên cứu ñược thể hiện trên bảng 3.4 và hình minh họa 3.4 sản phẩm phản ứng PCR xác ñịnh gene VT2e và F18 sau quá trình ñiện di.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 40 Bảng 3.4. Kết quả xác ñịnh yếu tốñộc lực của vi khuẩn E. coli ðịa phương Số chủng kiểm tra VT2e Số chủng (+) (Tỷ lệ %) F18 Số chủng (+) (Tỷ lệ %) Hà Nội 14 14 (100%) 14 (100%) Bắc Ninh 7 7 (100%) 7 (100%) Bắc Giang 11 11 (100%) 11 (100%) Phú Thọ 11 11 (100%) 11 (100%) Hải Dương 4 4 (100%) 4 (100%) Thái Bình 7 7 (100%) 7 (100%) Hà Nam 4 4 (100%) 4 (100%) Nam ðịnh 5 5 (100%) 5 (100%) Tổng 63 63 (100%) 63 (100%)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 41
Hình 3.4. Sản phẩm phản ứng PCR xác ñịnh gene VT2e và F18
Chú thích:
(-) : Mẫu ñối chứng âm (bao gồm ñầy ñủ thành phần của một phản ứng PCR, nhưng không có ADN tách chiết từ mẫu hay vi khuẩn).
(+) : Mẫu ñối chứng dương (có ADN tách chiết từ vi khuẩn E. coli ñã biết có mang gene F18 và VT2e)
1, 2, 3, 4, 5: ADN của vi khuẩn E. coli phân lập ở Phú Thọ 6, 7, 8: ADN của vi khuẩn E. coli phân lập ở Thái Bình L : Thang chuẩn Ladder (100 - 2500 bp).
Vạch sản phẩm của gen quy ñịnh VT2e có kích cỡ là 260bp. Vạch sản phẩm của gen quy ñịnh KN F18 có kích cỡ là 510 bp
Kết quả phản ứng PCR cho thấy 100% chủng vi khuẩn E. coli phân lập ñược gây ra các triệu chứng sưng phù ñầu ñiển hình ñều mang gen quy ñịnh việc sản sinh ñộc tố VT2e và kháng nguyên F18. Sự có mặt của 2 gen này là giống nhau ở tất cả các chủng E. coli phân lập ñược từ các ñịa phương khác nhau. Như
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 42 vậy, ñộc tố VT2e và kháng nguyên F18 là 2 yếu tố ñộc lực ñặc trưng của vi khuẩn E. coli gây sưng phù ñầu lợn.
Chúng tôi so sánh nghiên cứu này với các nghiên cứu trước ñây thì nhận thấy có sự sai khác.Theo Nguyễn Ngọc Hải và cộng sự (2001), khi sử dụng phương pháp PCR ñể xác ñịnh ñộc tố Vero của các chủng vi khuẩn E. coli tại một số tỉnh miền Nam - Việt Nam cho biết các chủng E. coli gây phù ñầu trên lợn sau cai sữa có khả năng tạo ñộc tố Vero. Hai yếu tố ñộc lực chính của các chủng vi khuẩn E. coli gây phù ñầu ở lợn con sau cai sữa là VT2e và F18 với 100% số chủng (13/13) phân lập ñều xác ñịnh ñược VT2e và F18.
Trịnh Quang Tuyên (2004) cho biết các chủng vi khuẩn E.coli gây bệnh phù ñầu cho lợn từ 22 – 60 ngày tuổi tại trại chăn nuôi tập chung mang các yếu tố gây bệnh với tỷ lệ cao. Trong ñó Vt2e chiếm tỷ lệ 73,9%, F18 là 40,2%. Tỷ lệ các ñộc tố Vt2e, F18 giảm dần theo năm sử dụng vacxin phòng bệnh.
Nghiên cứu của Vernozy-Rozand và cộng sự (2004) ñã tìm thấy trong các mẫu phân của lợn khỏe, trong môi trường, ñôi khi từ người những vi khuẩn
E. coli có gen quy ñịnh ñộc tố VT2e. Tuy nhiên, những vi khuẩn này lại thiếu các yếu tố bám dính nên không gây ñược triệu chứng bệnh phù ñầu lợn.
Năm 2008, Barman và cộng sự cũng chứng minh ñược vai trò quan trọng của 2 yếu tố F18 và VT2e trong bệnh phù ñầu lợn con.
Tuy có sự khác nhau về tỷ lệ xác ñịnh số chủng E.coli sản sinh ñộc tố Vt2e và yếu tố bám dính F18, nhưng các tác giả ñều khẳng ñịnh rằng: các yếu tố ñộc lực này ñóng vai trò quan trọng trong quá trình phát sinh bệnh, và cũng là chỉ tiêu quan quan trọng ñể ñánh giá ñộc lực của các chủng vi khuẩn E.coli gây bệnh phù ñầu ở lợn con sau cai sữa.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 43
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});