ng (II) clorua, CuCl2. B t màu nâu, háo n c; d ng dung d ch có màu xanh kh i l ng riêng 3,054 g/cm3; nhi t đ nóng ch y = 6300C; 9930C, b phân hu sinh
ra clo. Hiđrat CuCl2. 2H2O là các tinh th l ng tr , màu l c; lên hoa khi đ trong không khí; kh i l ng riêng 2,38 g/cm3; d tan trong n c. Dùng làm ch t xúc tác cho m t s ph n ng hoá h c, ch t c m màu, m c, ch t b o qu n g .
Tính đ c c a đ ng vƠ l ng cho phép s d ng
Trong t p chí phát tri n KH&CN, t p 10, s 01-2007, k t qu nghiên c u nhi u công trình cho th y:
- i v i cây tr ng: Theo k t qu nghiên c u nhi u công trình cho th y Cu có vai trò r t quan tr ng đ i v i s phát tri n c a cây tr ng. Cây tr ng thi u Cu th ng có t
l quang h p b t th ng, đi u này cho th y Cu có liên quan đ n m c ph n ng oxit hoá c a cây. Lý do chính c a đi u này là trong cây thi u ch t Cu thì quá trình oxit hoá Acid Ascorbic b ch m, Cu hình thành m t s l n ch t h u c t ng h p v i protein, Acid amin và m t s ch t khác mà chúng ta th ng g p trong n c trái cây.
- Ngoài nh ng nh h ng do thi u Cu, thì vi c th a Cu c ng x y ra nh ng bi u hi n ng đ c mà chúng có th d n t i tình tr ng cây ch t. Lý do c a vi c này là do dùng thu c di t n m, thu c tr sâu, đã khi n cho ch t li u Cu b c n l i trong đ t t n m này qua n m khác, ngay c bón phân Sulfat Cu c ng gây tác h i t ng t .
- i v i con ng i: Nguyên li u d n đ n ng đ c Cu c a con ng i có th là do: u ng n c thông qua h th ng ng d n n c b ng Cu, n th c ph m có ch a l ng Cu
cao nh Chocolate, nho, n m, tôm…, b i trong các h b i có s d ng thu c di t t o (Algaecides) có ch a Cu đ làm v sinh h , u ng bia hay r u đ mà c hai đ c l c v i Cu sulfides. ây là m t ch t đ c đ i v i đ ng v t: i v i ng i 1g/1kg th tr ng
đã gây t vong, t 60 -100mg/1kg gây bu n nôn. Theo t p chí phát tri n khoa h c và công ngh ( 2007), Cu nh h ng nghiêm tr ng đ n s c kho do s thi u h t c ng nh d th a. Cu thi t y u cho vi c s d ng s t (Fe), b nh thi u máu do thi u h t Fe tr
CH NG II: V T LI U VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U
2.1 a đi m-v t li u-thi t b
2.1.1 a đi m và th i gian ti n hành thí nghi m
- Mua lá trà xanh t i ch Th D u M t- Bình D ng
- Th c hi n nghiên c u t i phòng thí nghi m sinh hoá tr ng đ i h c M TP.HCM
- Th i gian ti n hành : t 11/2013 đ n 4/2014 2.1.2 V t li u
- Nguyên li u: lá trà xanh có ngu n g c t Bình D ng đ c thu mua ch Th D u M t. Lá trà s d ng cho thí nghi m không non c ng không quá già
-
Hình 2.1 Lá trà
- N c: ngu n n c s ch t phòng thí nghi m sinh hoá
- Enzyme cellulase: phân l p t Aspergillus niger xu t x t c - Hoá ch t:
+ Ph gia gi màu: CuCl2 xu t x Trung Qu c
+ Dung d ch Folin: xu t x t c
+ Than ho t tính: xu t x Trung Qu c
+ Na2CO3:xu t x Vi t Nam
+ Các ch t hoá ch t ph c v phân tích các ch tiêu khác
2.1.3 Thi t b : Máy xay, th t, dao, máy cô đ c, t s y, n i , b p đi n, màng l c, máy
đo OD 2.2 Ph ng pháp nghiên c u: 2.2.1 Quy trình s n xu t d ki n S đ C t nh Ch n Xay Trích ly S y L c Thành ph m N c Bã trà Ph gia gi màu Cu2+ Lá trà xanh X lý cellulase óng gói
2.2.2 Thuy t minh quy trình
Ch n
- M c đích: gi cho lá trà có màu t i xanh nh nhi t đ cao tiêu di t các enzyme polyphenol oxidases gây nên ph n ng oxy hóa làm bi n đ i màu lá trà
- Cách ti n hành: Lá trà xanh sau khi đ c l a ch n đ c ch n nhi t đ kho ng 80-1000C, trong kho ng th i gian 1-5 phút đ b t ho t các enzyme trong lá trà vì các enzyme polyphenoloxydase th ng không ho t đ ng nhi t 600C tr lên, do đó quá trình oxy hóa không di n ra làm nh h ng đ n màu s c lá trà. Khi ch n b sung thêm Cu2+đ gi cho màu lá trà đ c t i xanh, vì Cu2+gi cho c u trúc clorophyl đ c b n v ng. Sau khi ch n các lá đ c r a l i v i n c l nh.
C t
- M c đích: lá trà đ c c t nh đ c u trúc lá nh h n thu n ti n cho công đo n xay ti p theo.
- Cách ti n hành: dùng dao c t nh ng lá trà thành nh ng ph n nh h n v i kích c kho ng 2cm
Xay
- M c đích: sau khi lá trà đ c c t nh , s đ c xay khô đ các t bào lá trà b phá v c u trúc m t ph n, đ quá trình x lý enzyme, trích ly đ c d dàng thu đ c hi u su t cao
- Cách ti n hành: cho lá trà đã c t nh vào máy xay sinh t và xay đ n khi lá trà tr nên nhuy n.
X lý cellulase
- M c đích: vì lá trà có thành t bào c u t o t cellulose r t c ng ch c do đó n u ch trích ly b ng n c nhi t đ 800C thì các ch t trong trà không th ra ngoài do s c n tr c a thành cellulose. Vì v y công đo n này dung enzyme cellulase đ c t cellulose thành nh ng m ch ng n đ các ch t đ c đi ra ngoài d dàng h n t đó
hi u su t thu h i s cao h n.
Cách ti n hành: khi trà đã đ c xay nhuy n, sau đó b sung n c theo t l 10g lá trà v i 50ml n c sau đó enzyme đ c cho vào v i n ng đ thích h p cùng v i nhi t đ và th i gian t i u đ enzyme ho t đông t t nh t trong quá trình x lý enzyme.
Trích ly
- M c đích: tách các ch t trong lá trà vào n c
- Cách ti n hành: trà sau khi x lý enzyme đ c trích ly 800C trong vòng 10 phút
L c
- M c đích: công đo n này nh m thu d ch ch a các ch t tan và lo i b bã trà là nh ng ch t khô không hòa tan
- Cách ti n hành: dùng kh n s a cho toàn b trà vào và v t ki t toàn b d ch, ta
thu đ c d ch trà ph n còn l i là bã trà S y
- M c đích:thu đ c s n ph m d ng b t
- Cách ti n hành: sau khi thu đ c d ch trà, toàn b d ch đem đi s y khô nhi t
đ th p kho ng 550C đ n 650C trong vòng 24gi đ không nh h ng đ n ch t l ng và màu s c b t trà thành ph m, dch đ c s y cho đ n khi đ m đ t kho ng 3-5%.
óng gói
- M c đích: b o qu n s n ph m
- Cách ti n hành: dùng bao nh a PE đ ng s n ph m b t trà sau đó hút chân không và đóng kín bao bì b ng m t thi t b hút chân không và dán kín bao bì
2.2.3 S đ thí nghi m:
Hình 2.3: S đ thí nghi m
Kh o sát n ng đ cellulase trong quá trình x lý enzyme đ n hi u su t trích ly
Kh o sát nguyên li u
Kh o sát nh h ng c a nhi t đ và th i gian ch n đ n màu s c lá trà
Kh o sát nh h ng c a hàm l ng CuCl2đ n màu s c lá trà khi ch n
Kh o sát nh h ng c a nhi t đ trong quá trình x lý enzyme đ n hi u su t trích ly và ch t l ng d ch trà
Kh o sát nh h ng c a th i gian trong quá trình x lý enzyme đ n hi u su t trích ly và ch t l ng d ch trà
T i u hóa quá trình x lý enzyme cellulase trên lá trà
Kh o sát nh h ng c a hàm l ng n c đ n hi u su t trích ly trong quá trình trích ly d ch trà
Kh o sát nh h ng c a nhi t đ s y đ n màu s c và đ m b o qu n b t trà xanh
2.2.4 Các thí nghi m 2.2.4.1 Kh o sát nguyên li u lá trà 2.2.4.1 Kh o sát nguyên li u lá trà Các y u t kh o sát trong nguyên li u - Ch t khô - Tanin, polyphenol t ng - Tro Cách ti n hành: - Kh o sát đ m b ng ph ng pháp s y đ n kh i l ng không đ i (ph l c 1) - Kh o sát ch t khô b ng ph ng pháp s y (ph l c 1) - Kh o sát tanin b ng ph ng pháp Leventhal (ph l c 1)
2.2.4.2 Thí nghi m1: Kh o sát nh h ng c a nhi t đ và th i gian ch n đ n màu s c lá trà
- M c tiêu: tìm ra th i gian và nhi t đ ch n thích h p nh t đ màu c a lá trà
đ c gi t t nh t và không nh h ng nhi u đ n màu s c c a s n ph m.
- B trí thí nghi m: ki u hoàn toàn ng u nhiên 2 y u t , có 12 nghi m th c
+ Y u t 1: nhi t đ (A): 700C, 80 0C,900C,1000C + Y u t 2: th i gian (B): 1 phút , 3 phút , 5 phút B ng 2.1: B trí thí nghi m 1 Nhi t đ (A) Th i gian (B)
700C (A1) 80 0C (A2) 900C (A3) 1000C (A4)
1 phút (B1) A1B1 A2 B1 A3 B1 A4 B1
3 phút (B2) A1B2 A2 B2 A3 B2 A4 B2
Cách ti n hành:
L y các lá trà gi ng nhau v màu s c và đ già ti n hành ch n các nhi t
đ 700C,800C, 900C, 1000C trong vòng 1 phút, 3 phút , 5 phút. Thí nghi m l p l i 3 l n
Ph ng pháp đánh giá k t qu thí nghi m:
Ti n hành đánh giá c m quan v màu s c lá trà theo tiêu chu n TCVN 5050-90 (ph l c 1), n u nghi m th c nào đ c đánh giá cao đi m nh t khác bi t v i các nghi m th c còn l i thì ch n nghi m th c đó
2.2.4.3Thí nghi m 2: Kh o sát nh h ng c a n ng đ CuCl2 trong quá trình ch n đ n màu s c lá trà
- M c tiêu: xác đnh n ng đ CuCl2 gi màu cho lá trà t t nh t và không nh
h ng đ n s c kh e ng i dùng
- B trí thí nghi m: ki u hoàn toàn ng u nhiên 1 y u t là n ng đ Cu2+, thí nghi m có 3 nghi m th c B ng 2.2 B trí thí nghi m 2 Nghi m th c N ng đ Cu2+ (ppm) C1 C2 C3 10 20 30 Cách ti n hành:
Dùng CuCl20,5% đ c l y theo yêu c u thí nghi m là 10ppm, 20ppm, 30ppm L y 500ml n c cho vào 3 n i đun 800C sau đó cho các l ng CuCl2 t ng ng c n kh o sát vào, ti p t c l y 25g lá trà có hình thái, màu s c gi ng nhau cho vào ch n trong vòng 1 phút sau đó l y ra r a l i v i n c l nh
Thông s c đnh: Nhi t đ : 800C
Th i gian: 1 phút
Thí nghi m l p l i 3 l n
Ph ng pháp đánh giá k t qu thí nghi m:
Ti n hành đánh giá c m quan v màu s c lá trà theo tiêu chu n TCVN 5050-90 (ph l c 1), n u nghi m th c nào đ c cho đi m cao nh t và có s khác bi t v i các nghi m th c còn l i thì nghi m th c đó đ c ch n
2.2.4.4 Thí nghi m 3: Kh o sát nh h ng c a n ng đ enzyme t i hi u su t trích ly d ch trà d ch trà
- M c tiêu : xác đnh n ng đ enzyme t i thi u nh ng cho hi u su t trích ly phù h p nh t
- B trí thí nghi m: ki u hoàn toàn ng u nhiên 1 y u t là n ng đ enzyme, thí nghi m có 8 nghi m th c B ng 2.3: B trí thí nghi m 3 Nghi m th c N ng đ enzyme (%) D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 0 0,01 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 Cách ti n hành:
L y 7 becher 250ml cho vào 10g trà đã xay khô và 50ml n c đi u ch nh pH=5 b ng acid citric và Na CO sau đó cho vào m i becher các n ng đ enzyme t ng ng:
0%,,0,01%, 0,05%, 0,1%, 0,15%,0,2%, 0,25%, 0,3% đ 37oC/4 gi . Sau đó đem các m u đi l c và xác đnh hi u su t trích ly Thông s c đnh: Nhi t đ : 370C Th i gian; 4 gi Kh i l ng nguyên li u: 10g Thí nghi m l p l i 3 l n
Ph ng pháp đánh giá k t qu thí nghi m: d a vào hi u su t trích ly, n u nghi m cho hi u su t trích ly càng cao so v i các nghi m th c còn l i thì ta ch n nghi m th c
đó.
2.2.4.5Thí nghi m 4: Kh o sát nh h ng c a nhi t đ x lý enzyme đ n hi u su t thu h i và màu s c d ch trà
- M c tiêu: xác đ nh nhi t đ x lý enzyme thích h p nh t cho hi u su t cao và màu s c d ch trà t t
- B trí thí nghi m: Ki u hoàn toàn ng u nhiên 1 y u t là nhi t đ , thí nghi m có 5 nghi m th c B ng 2.4: B trí thí nghi m 4 Nghi m th c Nhi t đ (0C) E1 E2 E3 E4 E5 30 35 40 45 50
Cách ti n hành:
L y 4 becher 250ml cho vào 10g trà đã xay khô và 50ml n c đi u ch nh pH=5 b ng acid citric và Na2CO3sau đó cho vào m i becher n ng đ enzyme 0,05% và đ các nhi t đ : 300C, 350C. 400C, 450C, 500C trong 4 gi . Sau đó đem các m u đi l c, s y đ tính hi u su t trích ly Thông s c đnh: N ng đ enzyme: k t qu c a thí nghi m 3 Th i gian: 4 gi Thí nghi m l p l i 3 l n Ph ng pháp đánh giá k t qu :
D a vào hi u su t trích ly, n u nghi m th c nào cho hi u su t trích ly cao nh t thì nghi m th c đó đ c ch n
ánh giá c m quan v màu s c d ch trà theo tiêu chu n TCVN 5050-90 (ph l c 1), n u nghi m th c nào đ c đánh giá cao nh t thì nghi m th c đó đ c ch n
2.2.4.6Thí nghi m 5: Kh o sát nh h ng c a th i gian x lý enzyme đ n hi u su t thu h i và màu s c d ch trà
- M c tiêu: xác đnh th i gian x lý enzyme t t nh t đ không nh h ng đ n màu s c ch t l ng d ch trà đ ng th i cho hi u su t thu h i cao
- B trí thí nghi m: ki u hoàn toàn ng u nhiên 1 y u t là th i gian, thí nghi m có 4 nghi m th c
B ng 2.5 B trí thí nghi m 5
Nghi m th c Th i gian (gi )
F1 F2 F3 F4 1 2 3 4 Cách ti n hành:
L y 5 becher 250ml cho vào 10g trà đã xay khô và 50ml n c đi u ch nh pH=5 b ng acid citric và Na2CO3 sau đó cho vào m i becher n ng đ enzyme 0,05% đ nhi t đ 400C trong th i gian: 1 gi , 2 gi , 3 gi , 4 gi . Sau đó, đem các m u đi l c đ
thu dch đ c m quan màu s c và tính hi u su t trích ly. Thông s c đnh:
N ng đ enzyme: k t qu c a thí nghi m 3 Nhi t đ : k t qu c a thí nghi m 4
Thí nghi m l p l i 3 l n