2.2.2.1. Cỏc điều kiện ghi phổ
Phổ hấp thụ hồng ngoại (IR) của cỏc chất được ghi trờn mỏy quang phổ FR/IR 08101 của hóng Shimadzu trong khoảng từ 4000 - 400 cm-1, tại Viện Hoỏ Học, Viện Hàn Lõm Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam. Mẫu được chế tạo theo phương phỏp ộp viờn với KBr.
Phổ cộng hưởng từ hạt nhõn 1H và 13C được ghi trờn mỏy Avance - 500 MHz (Bruker) ở 300 K, trong dung mụi DMSO - d6, tần số ghi phổ cộng hưởng từ proton là 500 MHz, tần số ghi phổ cộng hưởng từ hạt nhõn
13C ở 125 MHz, tại Viện Hoỏ học ,Viện Hàn Lõm Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam.
Phổ khối lượng (MS) được ghi trờn mỏy Varian MS 320 3Q - Ion Trap theo phương phỏp ESI tại Phũng cấu trỳc, Viện Hàn Lõm Hoỏ học, Viện Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam. Dung mụi được sử dụng là DMF, điều kiện ghi mẫu: vựng đo m/z : 50 - 2000; ỏp suất phun mự 30 psi; tốc độ khớ làm khụ 8 lit/ph; nhiệt độ làm khụ 325oC; tốc độ khớ 0,4 ml/ph; chế độ đo possitive.
Hoạt tớnh sinh học của cỏc hợp chất được thử tại Phũng thử hoạt tớnh sinh học, Viện Hoỏ học ,Viện Hàn Lõm Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam. 2.2.2.2. Cỏc phần mềm hỗ trợ giải phổ
a. Phần mềm hỗ trợ giải phổ cộng hưởng từ hạt nhõn 1
H và 13C
Để giỳp thờm cho việc qui gỏn cỏc tớn hiệu cộng hưởng trờn phổ thu được chỳng tụi sử dụng phần mềm xõy dựng phổ mụ phỏng cộng hưởng từ hạt nhõn 1
H và 13C “ChemBioDraw Ultra 11.0”. Đõy là phần mềm của hóng Cambrigesoft - hóng phần mềm nổi tiếng với cỏc phần mềm trong lĩnh vực húa dược, cụng nghệ sinh học và đặc biệt là húa học (www.Cambrigesoft.com). Một trong những tớnh năng của ChemBioDraw là giỳp người dựng nghiờn cứu về phổ cộng hưởng từ hạt nhõn 1
H và 13C dựa trờn những thụng số cú sẵn trong thư viện một cỏch dễ dàng, trực quan.
Phương phỏp mụ phỏng này cho độ chớnh xỏc cao với cỏc hợp chất hữu cơ nhưng đối với phức chất kim loại thường cũn nhiều sai lệch. Nguyờn nhõn cú thể là số lượng cỏc nghiờn cứu phổ cộng hưởng từ hạt nhõn của cỏc hợp chất chứa kim loại chưa nhiều, và do đú cỏc giỏ trị thống kờ về độ chuyển dịch húa học, hằng số tương tỏc và cỏc thụng số tương tỏc nội bộ phõn tử cũn hạn chế.
Một nhược điểm của phần mềm này là khụng phõn biệt được proton của cỏc nhúm OH, NH, khụng tớnh đến cỏc tương tỏc cũng như cỏc ảnh hưởng đến độ chuyển dịch húa học. Mặt khỏc, người ta chỉ quan tõm đến số pic, cường độ, vị trớ tương đối và sự chuyển dịch tương đối của cỏc pic, do vậy cỏc giỏ trị độ dịch chuyển hoỏ học mụ phỏng được khụng cần thiết phải cú độ chớnh xỏc cao so với thực nghiệm. Do đú những con số thu được từ phần mềm ChemBioDraw chỉ là những con số ước lượng cú thể qui gỏn cỏc tớn hiệu cộng hưởng trờn phổ thực nghiệm.
b. Phần mềm hỗ trợ giải phổ khối lượng
Phần mềm hỗ trợ cho việc phõn tớch cụm pic đồng vị
Hợp chất phức thường được cấu tạo từ cỏc nguyờn tố cú nhiều đồng vị khỏc nhau như Pd, Ni, Pt, N, O, H, C… Với việc sử dụng phần mềm tớnh toỏn online isotope disstribution calculator trờn trang web www.webelement.com hoặc http://www.sisweb.com/mstools/isotope để suy ra sự phự hợp giữa tỉ lệ cường độ của cỏc pic trong cụm pic đồng vị theo thực tế và lý thuyết cho phộp khẳng định cụng thức phõn tử phức chất giả định.
2.2.2.3. Xỏc định hàm lượng kim loại trong phức chất
Để xỏc định hàm lượng ion kim loại Co(II) và Cu(II) trong phức chất chỳng tụi sử với chất chỉ thị munexit,ở pH =8.
a. Phỏ mẫu phức đồng và coban
Cõn chớnh xỏc một lượng mo gam mẫu trong khoảng 0,03 ữ 0,05 gam, chuyển vào bỡnh Kendan. Thấm ướt mẫu bằng vài giọt H2SO4 đặc rồi đun trờn bếp điện cho tới khi mẫu tan hết. Để nguội một ớt, rồi nhỏ vào đú 2 ml dung dịch H2O2 30%, tiếp tục đun cho tới khi cú khúi trắng thoỏt ra. Lặp lại cụng đoạn như vậy cho tới khi thu được dung dịch trong suốt cú màu xanh nhạt đối với phức của Cu(II), màu hồng nhạt đối với phức của Co(II), để nguội dung dịch thu được, trước khi tiến hành xỏc định hàm lượng ion kim loại trong phức chất như dưới đõy.
b. Xỏc định hàm lượng kim loại trong phức chất
+ Qui trỡnh cụ thể:
Dung dịch nguội thu được sau khi phỏ mẫu được chuyển vào bỡnh định mức 50ml. Hỳt 10ml dung dịch đú vào bỡnh nún 100ml thờm ớt chỉ thị murexit, điều chỉnh mụi trường bằng dung dịch NH3 loóng tới khi pH = 8
rồi chuẩn độ bằng EDTA nồng độ C mol/l tới khi dung dịch chuyển sang màu tớm (hết V ml EDTA). Hàm lượng kim loại trong mẫu được tớnh theo cụng thức sau: %mCu= V x C x 64 50 10 1000 x mo x 100 % %mCu= V x C x 59 50 10 1000 x mo x 100 %
2.2.2.4. Thăm dũ hoạt tớnh khỏng vi sinh vật kiểm định của phối tử và phức chất Hoạt tớnh khỏng vi sinh vật kiểm định được thực hiện dựa theo phương phỏp pha loóng đa nồng độ. Đõy là phương phỏp thử nhằm đỏnh giỏ mức độ khỏng vi sinh vật kiểm định và nấm mạnh hay yếu của cỏc mẫu thử thụng qua c giỏ trị IC50 (50% inhibitor concentration - nồng độ ức chế 50%). Cỏc chủng vi sinh vật kiểm định gồm cỏc vi khuẩn và nấm kiểm định gõy bệnh ở người:
- Bacillus subtilis: là trực khuẩn gram (+), sinh bào tử, thường khụng gõy bệnh.
- Staphylococcus aureus: cầu khuẩn gram (+), gõy mủ cỏc vết thương, vết bỏng, gõy viờm họng, nhiễm trựng cú mủ trờn da và cỏc cơ quan nội tạng.
- Lactobacillus fermentum: vi khuẩn gram (+), là loại vi khuẩn đường ruột lờn men cú ớch, thường cú mặt trong hệ tiờu hoỏ của người và động vật.
- Escherichia coli: vi khuẩn gram (-), gõy một số bệnh về đường tiờu hoỏ như viờm dạ dày, viờm đại tràng, viờm ruột, viờm lỵ trực khuẩn.
- Pseudomonas aeruginosa: vi khuẩn gram (-), trực khuẩn mủ xanh, gõy nhiễm trựng huyết, cỏc nhiễm trựng ở da và niờm mạc, gõy viờm đường tiết niệu, viờm màng nóo, màng trong tim, viờm ruột.
- Salmonella enterica: vi khuẩn gram (-), vi khuẩn gõy bệnh thương hàn, nhiễm trựng đường ruột ở người và động vật. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Candida albicans: là nấm men, thường gõy bệnh tưa lưỡi ở trẻ em và cỏc bệnh phụ khoa.
Mụi trường nuụi cấy: MHB (Mueller-Hinton Broth), MHA (Mueller- Hinton Agar); TSB (Tryptic Soy Broth); TSA (Tryptic Soy Agar) cho vi khuẩn; SDB (Sabouraud-2% dextrose broth) và SA (Sabouraud-4% dextrose agar) cho nấm.
Mẫu được pha trong DMSO (Đimethyl sulfoxide) với cỏc nồng độ 128; 32; 8; 2; 0,5 g/ml. Cỏc dung dịch vi sinh vật hoặc nấm với nồng độ 5.105 cfu/ml khi tiến hành thử. Sau đú lấy 10 l dung dịch mẫu thử theo cỏc nồng độ đó được pha loóng, thờm 200 l dung dịch vi sinh vật và nấm, ủ 37o
C trong 24 giờ.
- Giỏ trị IC50 được tớnh toỏn dựa trờn số liệu đo độ đục của mụi trường nuụi cấy bằng mỏy quang phổ TECAN (Genios) và phần mềm raw data.