Phương pháp nhân nhanh:
Sử dụng môi trường nền: MS , bổ sung agar 7 g/l, đường saccarose 30g/l.
Các chất kích thích sinh trưởng sử dụng thuộc nhóm auxin và cytokinin bổ sung vào môi trường nuôi cấy với hàm lượng khác nhau tuỳ thuộc thí nghiệm.
Giá trị pH của môi trường nuôi cấy: 5,8 - 6,0.
Thể tích dung dịch dinh dưỡng trong bình nuôi cấy là 50 – 70 ml/ bình.
Phương pháp theo dõi:
Hệ số nhân chồi (%) =
Số chồi bật (chồi)
x 100% Số chồi cấy (chồi)
Đánh giá chất lượng chồi bật:
Chồi tốt: chồi khỏe, mập, cao, hình thái bình thường, không dị dạng. Chồi trung bình: chồi sinh trưởng bình thường
Chồi yếu: chồi bị dị dạng, sinh trưởng kém.
Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ kinetin đến quá trình nhân nhanh và chất lượng của chồi Ban
* Kiểu I: Sử dụng vật liệu là chồi Ban lấy từ cây ban nuôi cấy mô (lấy từ hạt đã khử trùng và đem nuôi cấy ở thí nghiệm 1).
Cách bố trí thí nghiệm:
Thí nghiệm gồm 6 công thức, các công thức được bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là ba bình, mỗi bình cấy 3 chồi. Môi trường nền (MT nền): MS bổ sung đường 30 g/l, agar 7 g/l.
Chất điều tiết sinh trưởng: kinitin (K) được bố trí thành một dải nồng độ trên 6 công thức thí nghiệm, mỗi công thức thí nghiệm bố trí 3 bình nuôi cấy đã vô trùng. nghiệm: + CT1: MT nền ( Đ/C) + CT2: MT nền + 0,1 mg K/l + CT3: MT nền + 0,2 mg K/l + CT4: MT nền + 0,3 mg K/l + CT5: MT nền + 0,4 mg K/l + CT6: MT nền + 0,5 mg K/l - Theo dõi sau 45 ngày
Chỉ tiêu theo dõi: + Số lượng (chồi)
+ Chất lượng chồi (tốt, trung bình, yếu)
Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP đến quá trình nhân và chất lượng của chồi Ban.
Cách bố trí thí nghiệm:
- Thí nghiệm gồm 6 công thức, các công thức được bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là 3 bình, mỗi bình cấy 3 chồi.
Công thức thí nghiệm: + CT1: MT nền + CT2: MT nền + BAP 0,1 mg/l + CT3: MT nền + BAP 0,2 mg/l + CT4: MT nền + BAP 0,3 mg/l + CT5: MT nền + BAP 0,4 mg/l + CT6: MT nền + BAP 0,5 mg/l - Theo dõi sau 45 ngày
Chỉ tiêu theo dõi: + Số lượng (chồi)
+ Chất lượng chồi (tốt, trung bình, yếu)
* Kiểu II: Sử dụng vật liệu nghiên cứu là 2 lá mầm của hạt hoa ban sau 7 ngày nuôi cấy.
Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ kinetin đến khả năng
nhân nhanh và chất lượng chồi bật của nách lá mầm hạt Ban.
Cách bố trí thí nghiệm:
- Thí nghiệm gồm 6 công thức, các công thức được bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là ba bình, mỗi bình cấy 3 chồi. Môi trường nền: MS bổ sung đường 30 g/l, agar 7 g/l, than hoạt tính (THT) 1 g/l.
- Chất điều tiết sinh trưởng: Kinetin được bố trí thành một dải nồng độ trên 6 công thức thí nghiệm, mỗi công thức thí nghiệm bố trí 3 bình nuôi cấy đã vô trùng.
Công thức thì nghiệm:
+ CT2: MT nền + 0,1 mg K/l + CT3: MT nền + 0,2 mg K/l + CT4: MT nền + 0,3 mg K/l + CT5: MT nền + 0,4 mg K/l + CT6: MT nền + 0,5 mg K/l - Theo dõi sau 45 ngày
Chỉ tiêu theo dõi: + Số lượng (chồi)
+ Chất lượng chồi (tốt, trung bình, yếu)
Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP đến khả năng nhân
nhanh và chất lượng chồi bật từ nách lá mầm hạt Ban.
Cách bố trí thí nghiệm:
- Thí nghiệm gồm 6 công thức, các công thức được bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là 3 bình, mỗi bình cấy 3 chồi.
- Môi trường nền (MT nền): MS + đường 30 g/l, agar 7 g/l, THT 1 g/l. Công thức thí nghiệm: + CT1: MT nền + CT2: MT nền + 0,1 mg BA/l + CT3: MT nền + 0,2 mg BA/l + CT4: MT nền + 0,3 mg BA/l + CT5: MT nền + 0,4 mg BA/l + CT6: MT nền + 0,5 mg BA/l - Theo dõi sau 45 ngày
+ Số lượng (chồi)
+ Chất lượng chồi (tốt, trung bình, yếu)