3.3.3 XÁC ĐỊNH E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN VÀ THỬ
NGHIỆM IMViC
Việc định danh này được thực hiện dựa vào các đặc điểm các phản ứng sinh hố.
Đối với E.coli thì thử nghiệm IMViC cho kết quả:
Thử nghiệm khả năng sinh Indol dương tính (+)
Thử nghiệm Methyl Red dương tính (+) Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha lỗng mẫu để
cĩ độ pha lỗng thích hợp 10-3, 10-4, 10-5
Chuyển 1ml dung dịch 10-3, 10-4, 10-5 vào ống 10ml mơi trường Lactose Broth cĩ chứa ống durham, mỗi nồng độ 3 ống lặp lại, ủ ở 370C, 48
giờ
Ghi nhận các ống Lactose Broth dương tính (+) cĩ sinh hơi, ở mỗi nồng độ pha lỗng
Cấy vào ống nghiệm chứa mơi trường BGBL cĩ chứa ống durham, ủ ở 370C, 48 giờ
Ghi nhận các ống BGBL dương tính (+), cĩ sinh hơi
3.3.3.1 THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG SINH INDOL
Nhằm phát hiện khả năng của vi sinh vật tạo vịng indol trong mơi trường canh trypton.
Phương pháp tiến hành: Vi sinh vật thử nghiệm được nuơi trong mơi trường
canh trypton trong khoảng 24-48 giờ. Nhỏ vài giọt ether để kéo indol lên bề mặt mơi trường, thêm vài giọt thuốc thử Kovac’s hoặc thuốc thử Erhlich.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): trên bề mặt mơi trường xuất hiện vịng màu đỏ
cánh sen.
Thử nghiệm (-): Khơng xuất hiện vịng đỏ.
Hình 3.2. Thử nghiệm khả năng sinh Indol, Nguồn: http://users.stlcc.edu
3.3.3.2 THỬ NGHIỆM METHYL RED
Nhằm xác định khả năng của vi sinh vật sản xuất và duy trì các sản phẩm acid bên trong mơi trường trong quá trình lên men glucose.
Phương pháp tiến hành: Nuơi cấy vi sinh vật trong mơi trường glucose
phosphate (MR-VP broth) ủ trong khoảng 2-5 ngày. Thêm vài giọt thuốc thử methyl red được pha theo tỷ lệ 0,1g trong 300ml cồn và cho nước vào để đạt thể tích 500ml.
Thử nghiệm (-): Mơi trường khơng đổi mảu.
Hình 3.3. Thử nghiệm Methyl Red, Nguồn: http://users.stlcc.edu 3.3.3.3 THỬ NGHIỆM VOGES PROSKAUER
Nhằm phát hiện khả năng vi sinh vật tạo ra một số sản phẩm trung tính (aceton) trong quá trình lên men glucose.
Phương pháp tiến hành: Cấy vi sinh vật trong mơi trường glucose phosphate
(MR-VP broth), ủ ở nhiệt độ 370C trong 2-5 ngày. Thêm dung dịch thuốc thử ∞- naphtol 5% trong cồn và dung dịch KOH 40% với tỷ lệ 3:1. Quan sát phản ứng xảy ra trong 5 phút.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): xuất hiện màu đỏ trên bề mặt mơi trường.
Thử nghiệm (-): mơi trường khơng đổi màu. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Nhằm xác định khả năng vi sinh vật sử dụng citrate như là nguồn carbon duy nhất.
Phương pháp tiến hành: Mơi trường sử dụng trong thí nghiệm này là mơi
trưởng Simmons citrate agar . Cấy vi sinh vật lên mơi trường thạch nghiêng SCA, ủ 370C trong 24 giờ rồi đọc kết quả.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): mơi trường chuyển sang màu xanh dương. Thử nghiệm (-): mơi trường khơng đổi màu.
3.3.4 QUY TRÌNH PHÂN TÍCH E.COLI
Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha lỗng mẫu để cĩ độ pha lỗng thích hợp 10-3, 10-4, 10-5
Chuyển 1ml dung dịch 10-3, 10-4, 10-5 vào ống 10ml mơi trường Lactose Broth cĩ chứa ống durham,
mỗi nồng độ 3 ống lặp lại, ủ ở 370C, 48 giờ
Ghi nhận các ống Lactose Broth dương tính (+) cĩ sinh hơi, ở mỗi nồng độ pha lỗng
Cấy vào ống nghiệm chứa mơi trường pepton water, ủ ở 370C, 48 giờ
Ghi nhận các ống pepton water dương tính (+), mơi trường bị đục, ở mỗi nồng độ pha lỗng
Cấy vào các ống nghiệm chứa mơi trường Tryton, MR-VP, Simmons Citrate, ở mỗi độ pha lỗng. Ủ
ở 370C, 24 giờ
Tiến hành thử nghiệm sinh hĩa IMViC. Ghi nhận kết quả: thử nghiệm Indol dương tính (+), thử nghiệm Methyl Red dương tính (+), thử nghiệm Voges Proskauer âm tính (-), thử nghiệm Simmon
Citrate âm tính (-), ở mổi độ pha lỗng
4.1 KẾT QUẢ
4.1.1 CẦU ƠNG BUƠNG
Bảng 4.1 Kết quả phân tích tổng số Coliforms và E.coli tại Cầu Ơng Buơng
Số mẫu Tổng số Coliform E.Coli
C.OB1 28.104 MPN/100ml Khơng C.OB2 44.104 MPN/100ml Khơng C.OB3 75.104MPN/100ml 14.104MPN/100ml C.OB4 93.104MPN/100ml 11.104MPN/100ml C.OB5 44.104 MPN/100ml Khơng TCVN 5942-1995 (Loại B) 1.10 4 MPN/100ml Khơng
% vượt tiêu chuẩn 100% 40%
4.1.2 ĐOẠN GIỮA RẠCH ƠNG BUƠNG
Bảng 4.2 Kết quả phân tích tổng số Coliforms và E.coli tại Đoạn giữa
Rạch Ơng Buơng
Số mẫu Tổng số Coliform E.Coli
ĐG1 15.104 MPN/100ml Khơng ĐG2 29.104 MPN/100ml 9.104MPN/100ml ĐG3 29.104 MPN/100ml Khơng ĐG4 27.104MPN/100ml Khơng ĐG5 21.104 MPN/100ml Khơng TCVN 5942-1995 (Loại B) 1.10 4 MPN/100ml Khơng
4.1.3 CẦU HẬU GIANG
Bảng 4.3 Kết quả phân tích tổng số Coliforms và E.coli tại Cầu Hậu Giang
Số mẫu Tổng số Coliform E.Coli
C.HG1 11.104MPN/100ml Khơng C.HG2 14.104MPN/100ml Khơng C.HG3 20.104MPN/100ml Khơng C.HG4 12.104MPN/100ml 7.104MPN/100ml C.HG5 15.104MPN/100ml Khơng TCVN 5942-1995 (Loại B) 1.10 4 MPN/100ml Khơng (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
% vượt tiêu chuẩn 100% 20%
4.2 ĐÁNH GIÁ
4.2.1 TỔNG SỐ COLIFORMS
DIỄN BIẾN SỐ LƯỢNG COLIFORMS CỦA 3 VỊ TRÍ TẠI RẠCH ƠNG
BUƠNG, QUẬN 6, THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 700000 800000 900000 1000000 06/04 19/04 10/05 24/05 07/06
Cầu Ơng Buơng Đoạn giữa Rạch Ơng Buơng Cầu Hậu Giang
TCVN 5942-1995, Loại B (10000 MPN/100ml)
Hình 4.1. Diễn biến số lượng Coliforms của 3 vị trí tại Rạch Ơng Buơng, Quận 6, Thành Phố Hồ Minh.
Ngày/tháng MPN100ml
Số lượng Coliforms cĩ xu hướng tăng cao từ ngày 6 tháng 4 đến ngày 24
tháng 5, cao nhất là 93.104MPN/100ml, sau đĩ giảm dần ở ngày 7 tháng 6, thấp nhất là 44.104 MPN/100ml. Mức độ ơ nhiễm vi sinh tại Cầu Ơng Buơng cao gấp nhiều lần tiêu chuẩn cho phép, cụ thể cao gấp 28 lần đến 93 lần.
Đoạn giữa Rạch Ơng Buơng:
Số lượng Coliforms cĩ xu hướng tăng cao từ ngày 6 tháng 4 đến ngày 10
tháng 5, cao nhất là 29.104MPN/100ml, sau đĩ giảm dần ở ngày 7 tháng 6, thấp nhất là 21.104 MPN/100ml. Mức độ ơ nhiễm vi sinh tại đoạn giữa Rach Ơng Buơng cũng cao gấp nhiều lần tiêu chuẩn cho phép, cụ thể cao gấp 15 lần đến 29 lần.
Cầu Hậu Giang:
Số lượng Coliforms cĩ xu hướng tăng cao từ ngày 6 tháng 4 đến ngày 10
tháng 5, cao nhất là 20.104MPN/100ml, giảm ở ngày 24 tháng 5, thấp nhất là 12.104 MPN/100ml, sau đĩ tăng cao ở ngày 7 tháng 6, cao nhất là 15.104MPN/100ml . Mức độ ơ nhiễm vi sinh tại Cầu Hậu Giang cũng cao gấp nhiều lần tiêu chuẩn cho phép, cụ thể cao gấp 11 lần đến 20 lần.
Nhận xét chung:
Theo kết quả khảo sát liên tục diễn biến số lượng Coliforms tại 3 vị trí của
Rach Ơng Buơng, Quận 6, Thành Phố Hồ Chí Minh trong 2 tháng cho thấy 100% kết
quả vượt tiêu chuẩn nước mặt loại B. Vị trí ơ nhiễm Coliforms nặng nhất là Cầu Ơng
Buơng, tiếp theo là đoạn giữa Rạch Ơng Buơng và Cầu Hậu Giang. Như vậy, sự ơ
nhiễm Coliforms nặng nhất ở thượng nguồn Rạch Ơng Buơng, số lượng Coliforms
cũng giảm ở đoạn giữa và ít nhất ở hạ nguồn Rạch Ơng Buơng.
Theo báo cáo kết quả của Chi Cục Bảo Vệ Mơi Trường Thành Phố thì ơ
nhiễm Coliforms của những năm gần đây cũng hết sức nghiêm trọng. Coliforms đo ở
Hịa Bình và Ơng Buơng năm 2005 biến thiên từ 3x1010 – 7,8x1010 MPN/100 ml, vượt tiêu chuẩn chất lượng nước mặt loại B từ 3x106 – 7,8x106 lần. Kết quả phân tích cho thấy chất lượng nước khu vực này bị ơ nhiễm nặng.
Mức độ ơ nhiễm Coliforms của khu vực từ năm 2001- 2005 cĩ xu hướng tăng
Hình 4.2. Ơ nhiễm vi sinh đo ở các trạm kênh Tân Hĩa-Lị gốm(2001-2005), nguồn: Chi cục bảo vệ mơi trường TP.HCM. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ngồi ra, ơ nhiễm hữu cơ tại khu vực này cũng đáng báo. Theo kết quả báo
cáo của Cục Bảo Vệ Mơi Trường Thành Phố năm 2008, nồng độ BOD5 đo tại Rạch Ơng Buơng khá cao đạt 157.35 mg/l vượt tiêu chuẩn cho phép là 6.29 lần. So với năm 2007, BOD5 đo được năm 2008 giảm 1.01 lần.
Ô nhiễm vi sinh đo ở các trạm kênh T ân Hoá - L ò Gốm
Năm 2001 - 2005 5600000 55000000 78000000 30000000 0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 700000 800000
Hoà Bình Oâng Buông
1000 M PN/1000 ml
DIỄN BIẾN SỐ LƯỢNG LƯỢNG E.COLI CỦA 3 vị trí TẠI RẠCH
ƠNG BUƠNG, QUẬN 6, THÀNH PHỐ HỒ CHI MINH.
Hình 4.3. Diễn biến số lượng E.coli của 3 vị trí tại Rạch Ơng Buơng, Quận 6, Thành Phố Hồ Minh.
Cầu Ơng Buơng:
Trong 5 lần khảo sát sự hiện diện của E.coli tại Cầu Ơng Buơng, thì 2 lần cĩ
E.coli, cụ thể ở ngày 10 tháng 5, số lượng E.coli là 14.104MPN/100ml, và ngày 24
tháng 5, số lượng E.coli là 11.104MPN/100ml.
Đoạn giữa Rạch Ơng Buơng:
Trong 5 lần khảo sát sự hiện diện của E.coli tại đoạn giữa Rạch Ơng Buơng, thì 1 lần cĩ E.coli, cụ thể là ngày 19 tháng 4, số lượng E.coli là 9.104MPN/100ml.
Cầu Hậu Giang:
Trong 5 lần khảo sát sự hiện diện của E.coli tại Cầu Hậu Giang, thì 1 lần cĩ
E.coli, cụ thể là ngày 24 tháng 5, số lượng E.coli là 7.104MPN/100ml.
Nhận xét chung: 0 20000 40000 60000 80000 100000 120000 140000 06/04 19/04 10/05 24/05 07/06
Cầu Ơng Buơng Đoạn giữa Rạch Ơng Buơng Cầu Hậu Giang
Ngày/tháng MPN/100ml
Theo kết quả khảo sát liên tục sự hiện diện E.coli tại 3 vị trí của Rach Ơng Buơng, Quận 6, Thành Phố Hồ Chí Minh trong 2 tháng, cĩ sự ơ nhiễm E.coli tại đây. Vị trí ơ nhiễm E.coli nặng nhất là Cầu Ơng Buơng, với tần suất hiện diện trong
nguồn nước là 2 lần/ 5 lần. Tiếp theo là đoạn giữa Rạch Ơng Buơng và Cầu Hậu Giang, tần xuất hiện diện trong nguồn nước như nhau là 1 lần/ 5 lần. Như vậy, khả
năng ơ nhiễm E.coli nặng nhất ở thượng nguồn Rạch Ơng Buơng, giảm ở đoạn giữa và ít nhất ở hạ nguồn Rạch Ơng Buơng. Sự hiện diện của E.coli, một dịng vi khuẩn
gây bệnh tiêu chảy cho thấy nguồn nước tại đây bị ơ nhiễm phân.
Ở thượng nguồn, mật độ nhà dân lấn chiếm 2 bên bờ kênh rất cao, khơng cĩ hầm tự hoại, xả chất thải sinh hoạt trực tiếp vào kênh, cĩ thể đây là nguồn gây nhiễm phân cao, ngồi ra nguồn gây nhiễm cũng cĩ thể từ vật nuơi (chĩ, mèo) dọc 2 bên bờ kênh, khơng được người dân quản lý tốt. Đặc biệt, rác thải sinh hoạt tràn lan tại khu vực kênh cũng là nguồn gây nhiễm phân quan trọng.
Theo kết quả báo cáo của trạm y tế phường 9, quận 6, tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy cao nhất gấp nhiều lần trong các bệnh nhiễm khuẩn. Tuy số liệu khơng cho biết nguyên nhân các ca bệnh nhưng điều này rất cĩ thể liên quan đến mơi trường nước ơ
nhiễm các vi sinh gây bệnh tại lưu vực kênh rạch.(xem bảng 4.4. Số ca bệnh nhiễm
khuẩn của phường 9, quận 6, TP.HCM năm 2009) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bảng 4.4. Số ca bệnh nhiễm khuẩn của phường 9, quận 6, TP.HCM năm 2009.
(Nguồn: Trạm y tế phường 9, quận 6, TP.HCM)
Thực trạng kênh rạch tại đây bị ơ nhiễm vi sinh rất nhiều, kết quả cho thấy mức độ ơ nhiễm vi sinh tại đây vượt giới hạn cho phép rất nhiều lần, ơ nhiễm
Coliforms cao cùng với nhiễm vi khuẩn E.coli gây bệnh đường ruột trong nguồn
Bệnh Số ca nhiễm/người
Lỵ 1
Viêm loét miệng 1
khác hiện diện.
Cộng với triều cường lên cao, nước kênh thường xuyên ngập vào các khu vực dân cư sinh sống 2 bên bờ kênh, đem theo một lượng lớn sinh vật gây bệnh. Đây sẽ là một trong những nguyên nhân nghiêm trọng gây các bệnh về da, nhiễm khuẩn…từ nguồn nước bị ơ nhiễm cho cộng đồng.
Cùng với sự phát triển kinh tế của đất nước kéo theo đĩ là sự phân cấp giàu nghèo ngày một rõ rệt, mật độ dân nghèo tập trung cao trong lưu vực Rạch Ơng Buơng, điều này kéo theo sự bùn nổ về chất lượng cuộc sống kém của dân cư tại đây, đặt biệt là ý thức giữ vệ sinh mơi trường sống rất kém. Đây cũng là một trong nhiều nguyên nhân dẫn đến tình trạng ơ nhiễm nguồn nước.
Cơ sở hạ tầng tại đây cũng cịn nhiều điều phải bàn, hầu như các hẻm đều rất hẹp, đường xá lại khĩ lưu thơng, gây cản trở nhiều cho các loại xe chở rác vào những khu vực này, những thùng rác lại khơng được bố trí tại nhiều nơi trong khu vực, trong khi đĩ các bảng cấm đổ rác hiện diện khắp nơi chứng tỏ sự thiếu quan tâm của các nhà chức trách địa phương đối với dân nghèo. Những điều này, đã đưa người dân vào sự bế tắc, dẫn đến tiếp tục gây ơ nhiễm mơi trường tại đây sẽ làm suy thối mơi trường nước của thành phố.
Đối với tình trạng ơ nhiễm vi sinh nguồn nước tại rạch Ơng Buơng nĩi riêng, kênh rạch thành phố nĩi chung là hết sức nghiêm trọng, để giải quyết tình trạng ơ nhiễm nguồn nước tại đây là một vấn đề nan giải, sự phúc tạp của hệ thống cống xả cùng với mật độ dân cư rất cao cộng thêm vào ý thức bảo vệ mơi trường kém. Để giảm mức độ ơ nhiễm tại đây, chỉ khi nào xây dựng hệ thống thu gom nước thải để xử lý cùng với việc di dời và tái định cư cho các hộ dân sinh sống và các xi nghiệp trong lưu vực. Thêm vào đĩ cần nâng cấp lại tuyến kênh để cĩ thể sử dụng vào các mục đích khác nhau trong tương lai.
Trường hợp khơng thể di dời và tái định cư cho các họ dân sinh sống dọc hai bên bờ kênh, cần phải đẩy mạnh các chương trình giáo dục ý thức bảo vệ mơi trường cho họ.
CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
Qua hơn ba tháng thực hiện đề tài “ Đánh giá mức độ ơ nhiễm vi sinh nguồn
nước mặt tại Rạch Ơng Buơng, Quận 6 , Thành Phố Hồ Chí Minh. Tơi đã thu
được kết quả sau:
Đối với hệ thống thốt nước:
Phải hiểu là sự phức tạp của hệ thống thốt nước cùng với mật độ dân cư cao, kênh lại hẹp, đặc biệt nhà dân nghèo lấn chiếm hai bên bờ kênh, do đĩ rất khĩ khăn trong việc khảo sát cũng như tách lượng nước thải sinh hoạt và cơng nghiệp trong lưu vực. Vì lượng ơ nhiễm thốt từ sản xuất cơng nghiệp thốt ra từ các đường ống là rất quan trọng.
Đối với rác thải dọc hai bên bờ kênh:
Hầu như dọc hai bên bờ kênh đều khơng cĩ bố trí những thùng rác cơng cộng, tạo điều kiện thuận lợi cho các hộ dân sinh sống tại đây đổ rác xuống kênh rạch, gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến chất lượng nước mặt cũng như vẻ mỹ quan của kênh rạch thành phố.
Trong khi đĩ, những bản cấm đổ rác được hiện hiện khắp nơi, nhưng nhận thức người dân cịn kém, nên hiện tượng đổ rác xuống kênh vẫn tiếp diễn. Các nhà chức trách địa phương chưa cĩ chương trình bảo vệ nguồn nước cụ thể cũng như các chương trình giáo dục nhận thức của người dân về bảo vệ tài nguyên nước một cách thiết thực hơn.
Đối với quy hoạch nhà ở:
Mặc dù Thành phố đã cĩ quy định lộ giới sơng rạch trên địa bàn. Tuy nhiên vẫn cịn nhiều hộ dân lấn chiếm hai bên bờ kênh để cất nhà ở. Do vậy, dịng kênh là nơi hứng chịu rác thải và nước thải sinh hoạt của những hộ gia đình này. Những điều này gây tác động đến nguồn nước mặt bị ơ nhiễm nặng thêm, nguồn nước bị ơ nhiễm những vi khuẩn gây bệnh, thêm vào đĩ ảnh hưởng đến sự lưu thơng của dịng chảy.
các hộ dân trên tái định cư. Đối với nguồn nước:
Nước kênh tại đây bị ơ nhiễm vi sinh gây bệnh rất nhiều, khơng cịn sử dụng cũng như khai thác những chức năng vốn cĩ của một dịng kênh như các hoạt động thương mại, giao thơng đường thủy, nguồn nước khơng thể sử dụng cho tưới tiêu,