CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH
2.1 Nguyên liệu.
2.1.1 Enzyme α-amylase.
- Enzyme α-amylase của hãng Novo, dạng lỏng, là α – amylase bền nhiệt, được sản xuất từ vi khuẩn Bacillus licheniformis.
- α – amylase là một endo – amylase, có tác dụng thủy phân lien kết 1,4 - α – glucoside trong phân từ amylose và amylopectin thành các dextrin và oligosaccharide.
- Termamyl dễ dàng tan trong nước ở mọi nồng độ ở điều kiện thường. Sản phẩm này được khuyến cáo là không bốc cháy, nên tránh tiếp xúc da và hít phải, nếu tiếp xúc da phải rửa lại nhiều lần với nước.
2.1.2 Vật liệu cố định:
- Vật liệu cố định: Chitosan.
- Nguồn gốc: đại học thủy sản Nha Trang. - Thông số hóa lý:
• Độ ẩm: 15,92%
• Độ tro: 2,0675% ( theo khối lượng chất khô của nguyên liệu).
• Độ nhớt dung dịch 1% : 50,33 cp.
• Chỉ số deacetyl hóa ( chỉ số DD) : 75%
• Phân tử lượng trung bình: 5,187.104 đvC.
2.1.3 Chất tạo liên kết.
- Chất tạo liên kết: Glutaraldehyde.
- Mục đích của việc sử dụng chất tạo liên kết trong cố dịnh enzyme α-amylase là để hình thành nên các cầu nối giữa phân tử enzyme và chất mang nhờ các liên kết cộng hóa trị.
- Glutaraldehyde có 2 nhóm chức aldehyde ở 2 đầu. Hai nhóm này sẽ tạo liên kết với nhóm amin của chất mang và của enzyme, từ đó giữ enzyme cố định trên chất mang. Một số tính chất hóa lý của glutaraldehyde được trình bày cụ thể trong bảng sau:
Bảng 2.1: Một số tính chất hóa lý của glutaraldehyde.
Công thức C5H8O2
Phân tử khối ( đv C) 100,12
Tỷ trọng (g/ml) 1,06
Điểm nóng chảy ( 0C) -14
Điểm sôi (0C) 187
- Glutaraldehyt dạng lỏng nồng độ 25%, do hãng Merck sản xuất.
2.1.4 Hóa chất
- Tinh bột: Tinh bột dùng trong nghiên cứu là tinh bột dược phẩm, màu trắng ngà. - Các hóa chất khác: Albumin, đường glucose chuẩn, CuSO4, NaOH, NaH2PO4, Na2HPO4, muối tatrat…
2.1.5 Thiết bị sử dụng.
- Máy đo quang phổ hấp thu UV – Vis Thermo Spectronic. - Máy khuấy từ Magnetic Stirrer HANNA, BIBBY.
- Máy đo pH Mettler Toledo.
- Bể điều nhiệt Gallenkamp No.WF250. - Cân 4 số lẻ OHAUS PA214.
- Cân 2 số lẻ OHAUS Gold Series. - Tủ sấy, tủ lạnh….
Ảnh hưởng của pH. Ảnh hưởng của nhiệt độ. Tính chất động học Hiệu quả tái sử dụng. Thể tích enzyme Thời gian cố định Vận tốc máy lắc Kích thước chitosan Nồng độ glutaradehyde CHỌN PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH α-AMYLASE
CHỌN ĐIỀU KIỆN CỐ ĐỊNH α-AMYLASE
TỐI ƯU HÓA ĐIỀU KIỆN CỐ ĐỊNH α-AMYLASE GHIÊN CỨU ENZYME CỐ ĐỊNH