PHẦN 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu
3.4.2Thí nghiệm 2: Khử trùng mẫu cấy bằng Hypochlorine và tạo protocorm:
protocorm:
Tiến hành thí nghiệm: * Chuẩn bị mẫu:
- Cắt quả lan gần chín, để lại đế của quả khoảng 1cm, cắt bỏ phần cánh hoa còn dính ở đầu quả.
- Rửa sạch quả dưới vòi nước.
- Rửa quả trong dung dịch xà bông bằng cách dùng bàn chải nhỏ rửa từng khe của quả, rồi rửa sạch quả dưới vòi nước cho sạch xà bông.
- Rửa sạch bình tam giác bằng cồn. Cho quả vào bình tam giác.
* Vào tủ cấy:
- Rửa lại quả bằng nước cất vô trùng 3 lần. - Lắc quả trong dung dịch cồn 70o trong 1 phút. - Rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 lần.
- Ngâm quả trong dung dịch nước Javel với tỷ lệ giữa nước và Javel là 1:1 (nhỏ vào 1-2 giọt Tween) trong thời gian khoảng 60 phút. Quan sát quả khử trùng thấy vết cắt được bám dính bởi chất khử trùng có màu trắng sữa thì ngưng xử lý.
- Rửa lại nước cất vô trùng 3 lần.
- Cắt bỏ phần màu trắng, dùng dao cấy mổ quả lan lấy phần hạt bên trong quả.
nghiệm là : Khoáng MS + 8 g/l Agar + 20 % nước dừa + 30 g/l đường + chất kích thích.
Điều kiện thí nghiệm:
Mẫu được nuôi trên môi trường: khoáng MS + 8g/l Agar + 20% nước dừa + 30g/l đường + 3mg/l BA. Môi trường đã được khử trùng ở 1.2atm, 121oC trong thời gian 25 phút.
- pH môi trường : 5.2-5.5
- Thể tích môi trường: 65 ml/bình tam giác - Cường độ ánh sáng : 2.000 lux
- Thời gian chiếu sáng : 12 giờ/ngày - Nhiệt độ : 25±20C
- Thời gian thí nghiệm 60 ngày
Chỉ tiêu theo dõi:
- Thời gian xử lý mẫu
- Ngày xuất hiện protocorm.