C vs vật: mua tại ngân hàng AT gồm Vi khuẩn Gr (+): Bacillus subtilis AT 2
A: Acid Alginic F: Fucoidan
3.3.2. Chiết tách fucoidan
Fucoidan Ďược chiết tách theo phương pháp của Bilan và cộng sự [41]. Phương pháp này thu Ďược mẫu có Ďộ sạch cao phù hợp Ďể nghiên cứu cấu trúc, cụ thể như sau:
Cân 200g bột rong nâu Sargassum henslowianum, Ďem ngâm bột này ở nhiệt Ďộ phòng với 700 ml hỗn hợp MeOH-CHCl3-H2O = 4:2:1(v/v) Ďể loại bỏ các chất màu, lọc. Rửa bã rong với acetone (3 lần x 100 ml), sấy chân không Ďến khô thu Ďược mẫu rong Ďã khử chất béo (72g).
Mẫu rong sau khi Ďã khử chất béo Ďược khuấy trộn với dung dịch CaCl2 2% (3 lần x 400ml) tại 850C trong 5 giờ, thu lấy phần dịch chiết (loại bỏ alginate do calci alginate kết tủa).
Thêm vào dịch chiết này 80ml dung dịch hexadecyltrimethylamonibromide nồng Ďộ 10%, khuấy, xuất hiện kết tủa fucoidan- hexadecyltrimethylamonibromide. Tủa tạo thành Ďược li tâm, rửa với nước (3 lần x 100ml), tiếp Ďó khuấy với dung dịch NaI nồng Ďộ 20% trong cồn (5 lần x 150ml) trong vòng 2-3 ngày ở nhiệt Ďộ phòng, rửa với cồn (3 lần x 50 ml) và hòa tan lại trong 2000 ml nước.
Dung dịch Ďược thẩm tách qua màng MWCO (100kDa), tiến hành Ďông khô sẽ thu Ďược fucoidan sạch dưới dạng muối natri. Khối lượng fucoidan thu Ďược ở Ďây là 3,6g, hàm lượng fucoidan ở loài rong này là 1,8% tính trên trọng lượng rong khô.
Tương tự như vậy, chúng tôi cũng Ďã chọn quy trình chiết tách này áp dụng cho việc phân lập fucoidan từ mẫu rong Sargassum swartzii. Kết quả cho thấy với quy trình chiết tách này, hiệu suất chiết tách fucoidan ở loài rong
Sargassum swartzii là 0,8% tính trên trọng lượng rong khô. Quá trình chiết tách Ďược nêu trong Sơ Ďồ 3.3.
Sơ đồ 3.3. Quy trì ết t v t ế u
1. Ly tâm 2. H2O CH3OH:CHCl3:H2O = 4:2:1 Nhiệt Ďộ phòng.
Sấy chân không
CaCl2 2% (400ml x 3) Khuấy ở 85 °C (mỗi lần 8h) 1. Ethanol 2. H2O ethanol NaI 20% (5 x 150ml) 2–3 ngày, nhiệt Ďộ phòng 1. Thẩm tách 2. Đông khô Tủa chứa fucoidan
Rong khô (200g)
Phần cặn chiết Dịch lọc chứa màu
Bã rong Ďã loại chất béo (72g)
Dịch Tủa Fucoidan thô Dịch Fucoidan sạch (3,6g) CH3(CH2)15N(Br)(CH3)3 (10%, 80ml)