- Giai đoạn 2: Lên men kiềm: các sản phẩm của giai đoạn 1 tiếp tục đƣợc
4. Phƣơng pháp định lƣợng E.coli: phƣơng pháp MPN
Dụng cụ, thiết bị và hố chất phân tích E.coli
Dụng cụ, thiết bị và phân tích E.coli: Ống nghiệm;Pipet man; Đầu hút; CânL ị
đun; Bơng gịn; Tủ hấp tiệt trùng; Tủ ủ cĩ điều chỉnh nhiệt độ ở 370C, 440 C;
Ống Durham.
Hố chất: NaCl tinh khiết; Lactose medium broth; BGBL Chuẩn bị mơi trƣờng:
Nƣớc muối sinh lí 0,85 %: Hồ tan hồ tồn 0,425 g với 500ml nƣớc cất.
Dùng Pipet man hút 10 ml cho vào mỗi ống nghiệm.Đậy nút bơng, gĩi lại c ẩn
thận, đem hấp trong tủ hấp ở nhiệt độ 1210C trong 15 phút.
Mơi trƣờng lactose: Cân 13 gram lactose broth hịa vào với 1000 ml nƣớc cấ t.
Đun nĩng cho tan hồn tồn. Sau đĩ dùng pipet hút 10 ml cho vào mỗi ố ng
nghiệm đã bỏ sẵn ống Durham trong đĩ. Đậy nút bơng, gĩi lại cẩn thận, đem hấ p
trong tủ hấp ở nhiệt độ 1210C trong 15 phút.
Mơi trƣờng BGBL: Cân 13 gram BGBL hồ tan với 1000 ml nƣớc cất. Đu n
nĩng cho tan hồn tồn. Sau đĩ dùng pipet hút 10 ml cho vào mỗi ống nghiệm đã
bỏ sẵn ống Durham trong đĩ. Đậy nút bơng, gĩi lại cẩn thận, đem hấp trong t ủ
Thực hành:
Dùng Pipet man hút 1ml mẫu nƣớc thải cho vào ống nghiệm cĩ chứa 9 ml nƣớc muối sinh lí, ta đƣợc độ pha lỗng 1/10. Tiếp tục hút 1 ml ở độ pha lỗng 10-1 (1/10) cho vào ống nghiệm cĩ chứa 9 ml nƣớc muối sinh lí khác ta đƣợc độ pha lỗng là 10-2 (1/100). Liên tiếp pha lỗng nhƣ vậy cho đến độ pha lỗng là 10-10. Cấy vào mơi trƣờng lactose với dãy nồng độ từ 10-5 đến 10-10, mỗi độ pha lỗng nhƣ vậy cấy vào 3 ống nghiệm. Đậy nút ống nghiệm lại bằng bơng gịn khơng thấm nƣớc, gĩi lại cẩn thẩn, đem ủ ở 370C trong 24 - 48 giờ. Quan sát biểu hiển dƣơng tính ở các ống nghiệm thể hiện qua sự sinh hơi (cĩ bọt khí trong ống Durham), làm đục mơi trƣờng và đổi màu mơi trƣờng. Chọn 3 độ pha lỗng liên tiếp cĩ hệ số pha lỗng cao nhất biểu hiện dƣơng tính cấy chuyền sang mơi trƣờng BGBL. Đậy nút ống nghiệm lại bằng bơng gịn khơng thấm nƣớc, gĩi lại cẩn thẩn, đem ủ ở 440C trong 24 - 48 giờ. Quan sát biểu hiển dƣơng tính ở các ống nghiệm thể hiện qua sự sinh hơi (cĩ bọt khí trong ống Durham), làm đục mơi trƣờng và đổi màu mơi trƣờng.
Ghi nhận kết quả các ống dƣơng tính ở 3 độ pha lỗng. Kết hợp tra bảng MPN tính ra số E.coli .