Tuổi: 22-47 23 thai phụ đã ĐT.131I,tuổi:23-47 25 thai phụ đ/chứng,tuổi:22-47 Phân tích: 2775 Met. máu và 625 Met. ối
Phân tích: 3125 Met. máu và 625 Met. ối
2.1.3.2. Tiêu chuẩn chọn thai phụ nhĩm đối chứng
Gồm 25 thai phụ khỏe mạnh, khơng cĩ bệnh mạn tính kèm theo, đang mang thai từ tuần thứ 17 đến 20 tại thời điểm nghiên cứu, tuổi từ 22 đến 41, khơng hút thuốc lá, khơng nghiện rượu. Nghiên cứu được tuân thủ những quy định của hội đồng y đức bệnh viện Từ Dũ, bệnh nhân được giải thích, tự nguyện cam kết làm nhiễm sắc thể đồ ở máu ngoại vi và ở tế bào dịch ối.
Số metaphase ở tế bào máu ngoại vi và tế bào dịch ối đã được khảo sát ở nhĩm thai phụ được trình bày ở bảng 2.2.
Tất cả các đối tượng nghiên cứu được khám, điều trị tại khoa y học hạt nhân bệnh viện Chợ rẫy.
Kỹ thuật nuơi cấy tế bào, làm tiêu bản NST, Số lượng metaphase được phân tích trên một tiêu bản và thời điểm lấy mẫu ứng với từng nhĩm nghiên cứu theo tiêu chuẩn của IAEA và WHO (2001, 2005) [63], [64].
Thời gian nghiên cứu và thực hiện đề tài từ 2006 đến 2008 tại Khoa y học hạt nhân Bệnh viện Chợ rẫy, Bộ mơn Mơ phơi di truyền Đại học y dược và Phịng Di truyền bệnh viện Từ Dũ, Thành phố Hồ Chí Minh.
2.2 DƯỢC CHẤT PHĨNG XẠ, HĨA CHẤT VÀ THIẾT BỊ
Nghiên cứu tổn thương nhiễm sắc thể ở tế bào máu ngoại vi và tế bào dịch ối bằng phương pháp nuơi cấy, đề tài đã sử dụng dược chất phĩng xạ và những hĩa chất, thiết bị sau đây:
2.2.1 Dược chất phĩng xạ
131I (Sodium iodide - 131) được nhập từ Viện đồng vị phĩng xạ Hungari, độ tinh khiết hạt nhân (99,9%), hĩa phĩng xạ (95%) và độ tinh khiết hĩa học cao.
2.2.2 Hĩa chất
- Dung dịch shock nhược trương: Kali clorua (0,075M).
- Dung dịch cố định: Carnoy’s (tỷ lệ methanol/acetic acid = 3:1).
- KH2PO4, Na2HPO4 được sử dụng để pha dung dịch đệm PBS cĩ pH: 6,8.
- Các mơi trường RPMI 1640 (SIGMA), Amniomax basal, Amniomax
Supplement, huyết thanh phơi bị (FBS), phytohemagglutinin (PHA), L-glutamine, colcemid, anti-biotic (GIBCO), trypsin (difco 1:250),
EDTA.
- Cồn tuyệt đối, giêmsa. [62], [63], [108].
2.2.3 Thiết bị
- Máy đo hoạt độ phĩng xạ do Mỹ sản suất.
- Hệ thống phân tích nhiễm sắc thể đồ (Karyotyping system) với phần mềm chuyên phân tích nhiễm sắc thể.
- Kính hiển vi 5 thị kính + camera PFX hiệu Nikon, kính hiển vi olympus.
- Kính hiển vi đảo ngược TM5-F, Nikon.
- Máy ly tâm MR-231, máy lắc RX -3M, máy khuấy từ, bơm tiêm, pipette, bàn cào làm bong tế bào, cân điện tử, máy đo pH MP 220, bồn cách thủy, đồng hồ bấm giờ, lị nung cĩ thể chỉnh nhiệt độ từ 370C đến 100 0C, Máy sấy lam, đèn cồn, giá đựng ống nghiệm, giá nhuộm mẫu. - Tủ nuơi tế bào cĩ chế độ tự động ổn định nhiệt độ ở 37 0C hiện số với
5% CO2 (IG 150) và tủ nuơi tế bào ổn định nhiệt độ ở 37 0C hiện số. - Tủ cấy tế bào vơ trùng (MCV 711ATS-T), tủ lạnh -300C (Toshiba). - Ống thủy tinh nuơi cấy máu ngoại vi, bình nuơi cấy tế bào dịch ối
(flask).
2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Để đánh giá ảnh hưởng của bức xạ ion hố lên mức độ tổn thương NST ở tế bào máu ngoại vi của những bệnh nhân UTTG thể biệt hố sau phẫu thuật được điều trị 131I và tế bào dịch ối những thai phụ cĩ tiền sử điều trị 131I, chúng tơi đã thiết kế nghiên cứu như sau:
2.3.1 Thiết kế nghiên cứu.
- Nghiên cứu tiến cứu, theo dõi dọc, so sánh trước sau theo thời gian đối với nhĩm bệnh nhân UTTG biệt hố sau phẫu thuật được điều trị 131I với các liều: 1,11; 3,70; 4,81; 6,66GBq theo phân nhĩm đã nêu trên.
- Nghiên cứu mơ tả cắt ngang, cĩ đối chứng đối với nhĩm thai phụ.
2.3.2 Phương pháp điều trị
Bệnh nhân sau khi được phẫu thuật cắt gần hồn tồn tuyến giáp và nạo hạch cổ (nếu cĩ) khoảng từ 4 đến 6 tuần, được làm các xét nghiệm thường quy, xét nghiệm chuyên khoa, cĩ nồng độ TSH trong huyết thanh ≥ 30 µUI/ ml, hướng dẫn an tồn bức xạ trong lúc nằm viện và trong 10 ngày đầu sau khi xuất viện, cam kết điều trị đồng vị phĩng xạ, được hội chẩn xác định liều điều trị tại khoa y học hạt nhân bệnh viện Chợ Rẫy.
2.3.2.1 Xác định thời điểm và phương pháp lấy mẫu
• Nhĩm bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hố điều trị bằng 131I
Theo tiêu chuẩn của IAEA (2001), chúng tơi chọn thời điểm lấy mẫu máu ngay trước khi điều trị (được ký hiệu: tr.ĐT), sau điều trị 3 ngày, 7 ngày 90 ngày và 180 ngày, để khảo sát tần suất biến loạn NST, tỉ lệ tổn thương NST, tỉ lệ hồi phục và tính thời gian bán biến, thời gian bán hồi phục của những biến loạn NST, ứng với từng liều điều trị [63], [124].
- Vị trí lấy máu: tĩnh mạch cánh tay - Thể tích máu: 2 ml
- Mẫu được trộn với chất chống đơng sodium heparin
Thời điểm lấy mẫu máu ngoại vi và tế bào dịch ối từ tuần tuổi 17 đến tuần tuổi thứ 20 của thai kỳ.
- Vị trí lấy máu: tĩnh mạch cánh tay, thể tích: 2 ml
- Vị trí lấy tế bào ối: từ túi ối bao quanh thai, thể tích: 10 ml. Trước khi lấy dịch ối đã giải thích kỹ cho thai phụ và ký cam kết, vì nguy cơ sẩy thai tự nhiên do chọc ối khoảng 0,5% [66].
2.3.2.2 Phương pháp pha mơi trường nuơi cấy máu ngoại vi
Mơi trường nuơi cấy tế bào máu ngoại vi pha theo phương pháp của Cơ quan năng lượng Nguyên tử Quốc tế (IAEA), phịng di truyền tế bào RERF, Hiroshima, Nhật Bản, của M Buckley (1998), Ram S. verma, Arvind Babu và được thực hiện tại phịng xét nghiệm di truyền, Bộ mơn Mơ phơi - Di truyền Đại học y dược TP. Hồ Chí Minh [9], [11], [15], [62], [63], [108]. Phương pháp nuơi cấy tế bào lympho máu ngoại vi làm tiêu bản NST như sau.
• Quy trình nuơi cấy:
Để đáp ứng với mục tiêu nghiên cứu, chúng tơi áp dụng theo quy trình chuẩn của IAEA (1986, 2001) [62], [63], [64], tĩm tắt như sau:
- Máu tồn phần (trước điều trị, sau điều trị, nhĩm thai phụ cĩ tiền sử điều trị 131I và nhĩm thai phụ đối chứng): 1ml
- Mơi trường RPMI – 1640 - PHA: 0,1ml
- FBS: 1ml
- L- glutamin: 0,25 ml
- Kháng nấm (anti-biotic): 0,1ml
Sau đĩ cho máu vào mơi trường nuơi cấy, các mẫu được nuơi thời gian 48 giờ ở tủ nuơi cấy ổn định nhiệt độ hiện số 370C.
• Phương pháp xử lý mẫu theo tiêu chuẩn IAEA và WHO (2001- 2005)