5. Giới hạn đề tài
1.8.1. Giống vi sinh vật
Muốn cĩ sản phẩm tốt ngồi quy trình cơng nghệ thì khâu giống là quan trọng nhất, nĩ quyết định chất lượng sản phẩm và giá trị kinh tế của quy trình sản xuất.
- Tiêu chuẩn của giống: vi sinh vật tốt; cĩ khả năng sinh tổng hợp tạo sinh khối với hiệu suất cao; cĩ khả năng sử dụng các nguyên liệu rẻ tiền, dễ kiếm như các phụ phẩm, các phế thải; trong quá trình lên men khơng tạo ra các sản phẩm phụ khơng mong muốn; ít mẫn cảm đối với sự tạp nhiễm do vi sinh vật khác; sản xuất sinh khối cĩ thể tách dễ dàng ra khỏi mơi trường dinh dưỡng.
Tuy nhiên trong quá trình sản xuất, các tiêu chuẩn trên khơng phải gắn liền với nhau. Các vi sinh vật thuộc nhĩm Eukaryote cĩ kích thước tế bào lớn thể hình sợi, do đĩ dễ dàng tách chúng ra khỏi mơi trường dinh dưỡng bằng phương pháp lọc ly tâm thơng thường. Nhưng ở chúng thường tồn tại một quy tắc chung là kích thước tế bào tỉ lệ nghịch với hoạt tính trao đổi chất.
- Các cơng việc chủ yếu của cơng tác giống trong sản xuất: kiểm tra độ thuần khiết của giống trong lên men; kiểm tra khả năng hồi biến của giống; hoạt hĩa giống sau một thời gian sử dụng; giữ giống bằng phương pháp thích hợp cĩ thể duy trì những hoạt tính ưu việt của chúng, chống thối hĩa, mất hoạt tính.
- Các phương pháp giữ giống:
Hiện nay thường sử dụng bốn phương pháp chính để giữ giống vi sinh vật đĩ là:
▪ Bảo quản trên mơi trường thạch bằng, định kỳ kiểm tra cấy truyền Giống vi sinh vật được giữ trên mơi trường thạch nghiêng (đối với các giống vi sinh vật hiếu khí) hoặc trích sâu vào mơi trường thạch (đối với vi sinh vật kỵ khí). Các ống giống được bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 2-4oC.
Định kỳ kiểm tra cấy truyền giống, tùy từng giống vi sinh vật khác nhau mà định kỳ cấy truyền khác nhau, song giới hạn tối đa là 3 tháng.
▪ Giữ giống trong cát hoặc đất sét vơ trùng
Do cấu trúc hĩa lý cát vá sét là những cơ chất tốt mang các tế bào vi sinh vật, chủ yếu là nhĩm vi sinh vật cĩ bào tử. Cách làm như sau: cát và sét được xử lý sạch, sàng lọc qua rây, xử lý pH đạt trung tính, sấy khơ và khử trùng. Sau đĩ bằng thao tác vơ trùng trộn bào tử và cơ chất cát hoặc sét trong các ống nghiệm. Dùng paraffin nĩng chảy phết lên nút bơng của ống nghiệm để giúp cho ống giống khơng bị ẩm trở lại. Ngồi cát và sét, người ta cịn giữ giống trong hạt ngũ cốc hay trên silicagen…. Phương pháp bảo quản giống trên chủ yếu cho nấm mốc và xạ khuẩn.
▪ Giữ giống bằng phương pháp lạnh đơng
Bằng phương pháp này dựa trên nguyên tắc ức chế sự phát triển của vi sinh vật, đưa chúng vào điều kiện lạnh sâu ở -25oC đến -70oC. Người ta trộn vi sinh vật với dung dịch bảo vệ hay cịn gọi là dung dịch nhũ hĩa như glycerin 15%, huyết thanh ngựa (loại khơng cho chất bảo quản), dung dịch glucose hoặc lactose 10%.... Việc làm lạnh được tiến hành một cách từ từ. Khi độ lạnh đạt -20oC, nếu tiếp tục làm lạnh thì tốc độ làm lạnh phải đạt 1- 2oC/phút. Phương pháp bảo quản này cĩ ưu điểm là bảo quản được lâu.
▪ Giữ giống bằng phương pháp đơng khơ
Về nguyên tắc cũng giống như phương pháp đơng lạnh nhưng khác ở chỗ là đưa chất bảo vệ vào như glutamate 3% hay lactose 1,2% + peptone 1,2% hay saccharose 8% + sữa 5% + gelatin 1,5%. Đây là phương pháp bảo quản tối ưu nhất hiện nay, cĩ thể tới vài chục năm mới phải làm lại.