2. Nội dung và phương pháp tiến hành 3.1 Phát triển phôi cá xương
4.2.1 Thí nghiệm ảnh hưởng của độ mặn đến quá trình phát triển phô
5
Đối với trứng cá bi ển, thí nghiệm này thực hiện trong khoảng độ mặn từ 20 – 40 ppt, chênh lê ̣ch giữa các nghiê ̣m thức là 5 ppt. Có tất cả 5 nghiê ̣m thức (20 ppt, 25 ppt, 30 ppt, 35 ppt, 40 ppt). Tùy theo điều kiện , cán bộ hướng dẫn có thể cho 01 nhóm làm 01 hoă ̣c nhiều nghiê ̣m thức với ít nhất là 02 lần lă ̣p.
Hình 6.3. Thí nghiệm ảnh hưởng độ mặn đến phát triên phôi cá xương
Cho trứng vào các xô thí nghiê ̣m đã được chuẩn bi ̣ nước với các đô ̣ mă ̣n khác nhau . Mâ ̣t đô ̣ trứng trong thí nghiê ̣m này khoảng 200 – 250 trứng/L. Các thí nghiệm được thực hiện để theo dõi ở phòng thí nghiệm và không thể tiến hành trực tiếp ở trại giống . Vì vậy, quá trình thu trứng và bố trí trứng vào các được thực hiê ̣n ngay ta ̣i tra ̣i giống . Sau đó di chuyển về ph òng thí nghiệm để theo dõi. Các xô phải được sục khí nhẹ và đo nhiệt độ hằng ngày .
6
Mỗi nghiê ̣m thức thực hiê ̣n các bước sau :
(1) Cứ sau khoảng 30 phút, lấy trứng từ các xô và thực hiện: - Quan sát, xác định giai đoạn , mô tả đă ̣c điểm - Đo đường kính gio ̣t dầu
- Chụp hình .
Hình 6.5. Trứng và giọt dầu cá xương Hình 6.6. Mô tả trắc vi thị kính Bảng 6.1. Mô tả các giai đoạn phát triển phôi
STT Độ mặn Thời gian
(…giờ …phút) Giai đoa ̣n
Đường kính
giọt dầu (µm) Đặc điểm
1 30 phút 2 1 giờ
…
Ghi chú: Mỗi nghiệm thức (độ mặn) lập 1 bảng.
(2) Đến giai đoa ̣n phôi vi ̣ tiến hành xác đi ̣nh tỷ lệ thụ tinh được xác đ ịnh ở thời điểm phôi vị. Trong mỗi nghiê ̣m thức (02 lọ/ xô thí nghiê ̣m ), để nguyên 1 lọ để theo dõi tiếp các giai đoa ̣n sau. Lọ còn lại , lấy 30 trứng, quan sát trên kính hiển vi và đếm số trứng phát triển đến phôi vị, số trứng hỏng. Chọn 100 trứng trong số trứng còn la ̣i cho vào lo ̣ khác, ấp cho đến khi xuất hiện ấu trùng để xác định tỷ lệ nở .
Tỷ lệ thụ tinh =
30
A
7
Trong đó: A là số trứng phát triển đến phôi vị
(3) Sau khi có khoảng 50% phôi nở thành cá bột thì xác định thời gian phát triển phôi. Sau khi ấu trùng đầu tiên nở 2 – 3 tiếng, xác định tỷ lê ̣ nở.
Tỷ lệ nở =
N B
x100 (%) Trong đó : B là số cá bột nở ra.
N là số trứng thụ tinh đem thí nghiệm . Trong trường hợp này b = 100.
(4) Xác định tỷ lệ dị hình : Trong số cá bột mới nở ra trong thí nghiê ̣m xác đi ̣nh tỷ lê ̣ nở , đếm số cá bột dị hình, dị dạng. Xác định tỷ lệ dị hình dị dạng theo công thức:
Tỷ lệ dị hình = 30
C
x100% Trong đó : C là số cá bột dị hình
30 là số cá bột lấy mẫu
(5) Sau khi trứng nở 4 – 6 giờ, tiến hành thí nghiệm xác định tỷ lệ sống. Cho 100 cá bột vào mỗi bình thủy tinh, có sục khí nhẹ. Mô ̣t ngày sau khi nở , đếm số cá bô ̣t còn sống để xác đi ̣nh tỷ lê ̣ sống của cá bô ̣t 1 ngày tuổi. Nếu muốn xác đi ̣nh tỷ lê ̣ sống cá bô ̣t bao nhiêu ngày ngày thì sau khi cá nở , bố trí bao nhiêu nghiê ̣m thức . Mỗi nghiê ̣m thức có 01 – 03 lần lă ̣p.
Tỷ lệ sống cá bột n ngày tuổi =
F E
x 100% Trong đó : E là số cá bột còn sống sau n ngày tuổi
F là số cá bột 1 ngày tuổi. Trong trườ ng hợp này là 100.
(6) Đo kích thước khối noãn hoàng , kích thước cá bột . Ngay sau khi cá nở , lấy khoảng 3 ấu trùng đo kích thước khối noãn hoàng và lặp sau 12 tiếng cho đến khi khối noãn hoàng tiêu hết. Trong quá trình đo kích thước, tiến hành quan sát cơ quan tiêu hóa của cá bô ̣t
8
Hình 6.7. Đo kích thước cá bô ̣t và khối noãn hoàng
Các số liệu thu theo các bảng sau:
Bảng 6.2. Phát triển phôi ở các độ mặn khác nhau
Nghiệm thức Thời gian phát triển (giờ)
Tỷ lệ nở (%)
Tỷ lệ dị hình (%)
20 ppt 25 ppt
…
Bảng 6.3. Kích thước cá bột và khối noãn hoàng
Nghiệm thức Thời gian
(giờ ) STT
Kích thước (mm) Cá bột Khối noãn hoàng 20 ppt 0 1 20 ppt 0 2 20 ppt 0 3 25 ppt 12 1 25 ppt 2 25 ppt 3 …
9